羊水细胞的性染色质测定
为测定胎儿无伴性遗传性疾病，需要测定胎儿的性别，如果是男性胎儿，则发病的危险率可达50%。可靠的测定性别方法，应该作羊水细胞培养得到染色体核型，如无培养条件的单位也可直接做羊水细胞的X小体和Y小体，以定胎儿性别。
1.X小体的测定
将抽出的羊水5～10ml放入离心管离心5～15分钟(800～1 000转/分)。离心后弃去上清液，加甲醇-冰醋酸固定液，固定2小时后，再离心15分钟，弃去上清液，加少许新鲜固定液，将细胞打开成悬液，滴1～2滴于玻片上，空气干燥后，硫堇染色，或0.20%甲苯胺蓝染色10～15秒，用油镜检查。若抽出的羊水呈乳白色，表明含胎脂太多，可用乙醚酒精(1：1)处理20分钟后，再用95%酒精固定30分钟，再涂片染色。
硫堇染色法(thionine)：将涂片放入5N HCl中，在室温下(25℃左右)水解20分钟，用流水冲洗，过蒸馏水，入缓冲染色液染色30分钟，取出用流水冲洗，蒸馏水洗并迅速过70%酒精分色，时间不宜过长，几秒钟即可，再依次进95%酒精、无水酒精各1分钟，最后经二甲苯透明1～2分钟即可油镜检查。
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硫堇染色液的组成：
(1)硫堇饱和溶液 硫堇1g溶在50%酒精25ml中，过滤备用。
(2)Michaelis缓冲液
醋酸钠(NaCH3COO、3H2O)0.485g
巴比妥酸钠(C8H11O3N2Na)0.735g
双蒸馏水 25ml
(3)0.1N HCl
将缓冲液14ml
0.1N HCl 16ml
配制调pH至5.7±0.2
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硫堇染色后X小体呈深蓝色，常贴在核膜边缘，呈三角形、半圆开成或馒头形，核膜清晰，其他核内染色质着色浅，胞浆无色透明，X小体在核内很小，约1μm左右。计数时在油镜下选择100个胞核染色均匀清晰、核膜完整无缺的细胞，计数有多少个有X小体的细胞核，算出百分数。
2.Y小体的测定
1968年，Caspersson等首先报道用荧光喹吖因染细胞分裂相中期的染色体后有荧光带。人体细胞的Y染色体长臂末端荧光很强。以后Bar/ow和Vasa用喹吖因染精子发现39%～40%的精子有显著的荧光点，这种荧光小体与Y染色体有关，故命名为Y小体。
(1)羊水培养Y小体显示法：将羊水5～10ml在室温下离心(800转/分)10分钟，去上清液，将细胞悬液加甲醇：冰醋酸(3：1)固定液，固定2小时，再离心1 000转/分，10分钟，去上清液，另加入新鲜固定液少许，取1～2滴于玻片中央，涂成薄片，空气干燥，用0.5%喹吖因染色15分钟以上，然后用pH5.6的Mcllvaine氏磷酸缓冲液冲洗加盖玻片，在荧凶显微镜下检查。
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(2)染液的配制：
1)0.5%喹吖因荧光染液的配制：在染色前临时配制，取盐酸喹吖因50mg,溶于10ml双蒸馏水中，置有色玻璃瓶，放冰箱备用，最好勿超过3天，也有人应用1周。
2)Mcllvaine氏缓冲液的配制：称取21.0g柠檬酸(C8H8O7、H2O)，配成100ml0.1M柠檬酸水溶液。再称取71.6g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)配成1 000ml0.2M磷酸氢二钠水溶液。上述二液前者取8.4ml，后者约取11.6ml，混合后将pH调至5.6即可备用。
(3)Y小体的观察：在荧光显微镜下，或用国产轻便荧光灯或Y0-1型医疗灯作荧光光源，在普通显微镜下观察，可见细胞核的中心或近核膜处有约0.35μm(约为X小体的1/4)的荧光弧线状网点，即可诊为Y染色质阳性。选择100个清晰，核膜完整、核质均匀、可计数的细胞进行计数，若涂片有细菌或其他物质污染，则不应计数。
3.胎儿性别的判定
如羊水X小体计数超过6%，则胎儿为女性；如Y小体计数超过5%，则胎儿为男性。湖南医学院报告30例没定，女性胎儿X小体出现率自6%～20%，男性胎儿Y小体出现率自5%～49%。如X小体、Y小体同时存在，应考虑有性染色体异常，此种病例应进一步检查染色体核型。, 百拇医药
1.X小体的测定
将抽出的羊水5～10ml放入离心管离心5～15分钟(800～1 000转/分)。离心后弃去上清液，加甲醇-冰醋酸固定液，固定2小时后，再离心15分钟，弃去上清液，加少许新鲜固定液，将细胞打开成悬液，滴1～2滴于玻片上，空气干燥后，硫堇染色，或0.20%甲苯胺蓝染色10～15秒，用油镜检查。若抽出的羊水呈乳白色，表明含胎脂太多，可用乙醚酒精(1：1)处理20分钟后，再用95%酒精固定30分钟，再涂片染色。
硫堇染色法(thionine)：将涂片放入5N HCl中，在室温下(25℃左右)水解20分钟，用流水冲洗，过蒸馏水，入缓冲染色液染色30分钟，取出用流水冲洗，蒸馏水洗并迅速过70%酒精分色，时间不宜过长，几秒钟即可，再依次进95%酒精、无水酒精各1分钟，最后经二甲苯透明1～2分钟即可油镜检查。
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硫堇染色液的组成：
(1)硫堇饱和溶液 硫堇1g溶在50%酒精25ml中，过滤备用。
(2)Michaelis缓冲液
醋酸钠(NaCH3COO、3H2O)0.485g
巴比妥酸钠(C8H11O3N2Na)0.735g
双蒸馏水 25ml
(3)0.1N HCl
将缓冲液14ml
0.1N HCl 16ml
配制调pH至5.7±0.2
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硫堇染色后X小体呈深蓝色，常贴在核膜边缘，呈三角形、半圆开成或馒头形，核膜清晰，其他核内染色质着色浅，胞浆无色透明，X小体在核内很小，约1μm左右。计数时在油镜下选择100个胞核染色均匀清晰、核膜完整无缺的细胞，计数有多少个有X小体的细胞核，算出百分数。
2.Y小体的测定
1968年，Caspersson等首先报道用荧光喹吖因染细胞分裂相中期的染色体后有荧光带。人体细胞的Y染色体长臂末端荧光很强。以后Bar/ow和Vasa用喹吖因染精子发现39%～40%的精子有显著的荧光点，这种荧光小体与Y染色体有关，故命名为Y小体。
(1)羊水培养Y小体显示法：将羊水5～10ml在室温下离心(800转/分)10分钟，去上清液，将细胞悬液加甲醇：冰醋酸(3：1)固定液，固定2小时，再离心1 000转/分，10分钟，去上清液，另加入新鲜固定液少许，取1～2滴于玻片中央，涂成薄片，空气干燥，用0.5%喹吖因染色15分钟以上，然后用pH5.6的Mcllvaine氏磷酸缓冲液冲洗加盖玻片，在荧凶显微镜下检查。
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(2)染液的配制：
1)0.5%喹吖因荧光染液的配制：在染色前临时配制，取盐酸喹吖因50mg,溶于10ml双蒸馏水中，置有色玻璃瓶，放冰箱备用，最好勿超过3天，也有人应用1周。
2)Mcllvaine氏缓冲液的配制：称取21.0g柠檬酸(C8H8O7、H2O)，配成100ml0.1M柠檬酸水溶液。再称取71.6g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)配成1 000ml0.2M磷酸氢二钠水溶液。上述二液前者取8.4ml，后者约取11.6ml，混合后将pH调至5.6即可备用。
(3)Y小体的观察：在荧光显微镜下，或用国产轻便荧光灯或Y0-1型医疗灯作荧光光源，在普通显微镜下观察，可见细胞核的中心或近核膜处有约0.35μm(约为X小体的1/4)的荧光弧线状网点，即可诊为Y染色质阳性。选择100个清晰，核膜完整、核质均匀、可计数的细胞进行计数，若涂片有细菌或其他物质污染，则不应计数。
3.胎儿性别的判定
如羊水X小体计数超过6%，则胎儿为女性；如Y小体计数超过5%，则胎儿为男性。湖南医学院报告30例没定，女性胎儿X小体出现率自6%～20%，男性胎儿Y小体出现率自5%～49%。如X小体、Y小体同时存在，应考虑有性染色体异常，此种病例应进一步检查染色体核型。, 百拇医药