通心络胶囊对实验性心肌缺血、心律失常和高脂血症的影响
摘要 目的：观察通心络胶囊对实验动物心肌缺血、心肌梗塞、心律失常及血脂水平的影响。方法：利用结扎犬冠状动脉形成实验性急性心肌缺血及心肌梗塞、垂体后叶素诱发大鼠心肌缺血以及氯仿导致小鼠心律失常和食饵性大鼠高脂血症等动物模型，观察通心络胶囊消化道给药对其的防治作用。结果：通心络胶囊能够明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)，缩小心肌缺血范围(N-ST)，减小经硝基四氮唑蓝染色所显示的梗塞区，保护垂体后叶素所致大鼠冠脉痉挛性心肌缺血，显著抑制氯仿引起的小鼠室性心律失常，明显降低食饵性高脂血症大鼠的血脂水平。结论：通心络胶囊可明显改善实验性心肌缺血和心肌梗塞程度，同时对心律失常及高脂血症的发生也有较好的预防作用。
通心络胶囊由人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、赤芍等中药组成，是根据中医理论研制而成的中药复方制剂，具有通络活血、缓急止痛及益气养阴之功效。临床用于治疗冠心病心绞痛取得较好疗效。为了研究其作用机制，我们进行了与其功能主治相关的药效学实验研究。
材料与方法
, 百拇医药
1.主要实验药物：通心络胶囊干粉(1.43g生药/g干粉)，由石家庄以岭药业股份有限公司提供。硫氮酮片(恬尔心，盐酸地尔硫)，30mg/片；心得安注射液，50mg/5ml；垂体后叶素，10U/ml；利多卡因注射液，0.2mg/10ml；血脂宁。
2.实验动物：健康成年杂种犬20只，雌雄兼用，体重12～16kg，由中国中医研究院西苑医院实验动物室提供。Wistar大鼠80只，雌雄各半，体重240～380g；昆明小白鼠64只，体重18～22g，由河北省医学科学院动物室提供。
3.实验方法
(1)实验性犬急性心肌缺血：实验分4组，每组5只犬。空白对照组：给予生理盐水4ml/kg；通心络小剂量组：给予近似胶囊0.36g生药/kg；通心络大剂量组：给予近似胶囊0.72g生药/kg；阳性对照药组：给予硫氮酮片，5mg/kg。所试药物均用生理盐水配制成等体积(4ml/kg)，经胃管灌胃给药。动物经戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，气管插管，连接SC-3型电动呼吸机；左侧第4肋间开胸，暴露心脏，剪开心包，做心包床；分离冠状动脉左前降支中段，穿线以备结扎用，造成急性实验性心肌缺血模型；缝置多点固定式心外膜电极，连接RM-6000型多道生理记录仪，描记心外膜电图。结扎冠脉15min后，进行记录，作为给药前对照值。经胃管给予实验药物或生理盐水，于给药后15、30、60、90、120、180min记录30个标测点心外膜电图，以S-T段升高大于2mV为判断标准，以此计算心肌缺血程度(∑-ST，S-T段升高总毫伏数)及心肌缺血范围(N-ST，S-T段升高总点数)。
, 百拇医药
给药后180min记录完毕，立即取下心脏，生理盐水冲洗，称量全心重。在心脏结扎线以下，平行于冠状沟均匀地将心室部分横断切成5片，然后，置于硝基四氮唑蓝(N-BT)染液中，常温染色15min。用落点求积法(36点/cm2)测量每片心肌双侧的梗死区(N-BT染色区)，每片心肌称重，计算每片心肌的面积、心室总面积和梗塞区总面积。计算梗塞区占心室(梗塞区/心室)及占全心脏(梗死区/心脏)的百分比，结果进行统计学处理，检验判断其显著性。
(2)垂体后叶素所致大鼠心肌缺血：将大鼠随机分为4组，通心络胶囊(灌胃给药)1.0g/kg剂量组、0.5g/kg剂量组、阳性药心得安组(2mg/kg，腹腔注射，每天1次)及空白对照组(灌服0.5%羧甲基纤维素钠液)。每组10只，连续给药10天。末次给药后1h，腹腔注射30%乌拉坦麻醉，静脉注射垂体后叶素0.5U/kg，10s内注完，诱发冠脉痉挛性心肌缺血。用六道生理记录仪记录Ⅱ导心电图，观察注射垂体后叶素后即刻、15s、30s、1min、2min、5min心电图变化，以T波、S-T段改变或P-R、Q-T间期延长判断心肌缺血程度和药物作用。
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心肌缺血判断标准：第1期：注射垂体后叶素后即刻至30s，T波升高、S-T段抬高超过0.1mV。第2期：T波低平、双相、倒置，心率变慢，P-R及Q-T间期延长。
(3)氯仿所致小鼠心律失常：将小鼠随机分为通心络胶囊1.0g/kg剂量组、0.5g/kg剂量组、利多卡因组(0.1mg/20g，腹腔注射)及空白对照组(0.5羧甲基纤维素钠液)。每天灌胃给药1次，连续10天。于末次给药1h后吸入氯仿，六道生理仪记录标准Ⅱ导联心电图，观察心律失常(室性纤颤)发生率。
(4)高脂血症大鼠血脂水平测定：将大鼠随机分为通心络胶囊1.0g/kg剂量组、0.5g/kg剂量组、血脂宁组(1.0g/kg)及高脂空白对照组。每组10只，各组均喂高脂饲料10天(1%胆固醇加10%猪油加0.25%甲亢平加88.75%基础饲料)，每天灌胃给药1次；高脂对照组给予0.5%羧甲纤维素钠液。在末次给药后1h，处死动物取血，用琼脂糖凝胶电泳法测定血清中总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白(LDL)含量，推算高密度脂蛋白(HDL)水平。
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结 果
1.对犬心肌缺血的影响：通心络胶囊大剂量组、小剂量组及阳性对照药硫氮酮组对∑-ST有明显减轻的作用。大剂量组给药后30min即可起效，由给药前(294.80±97.97)mV降至(248.00±97.97)mV，下降(16.36±8.49)%，与给药前(P< 0.05)及与对照组比较，均有显著性差异(P < 0.05)，且随给药时间延长作用愈加显著。小剂量组减轻心肌缺血程度的作用不及大剂量组，给药后120min，∑-ST开始明显下降，由给药前(293.40±117.40)mV降至(212.00±93.26)mV,下降(26.62±14.84)%，与给药前自身比较及与对照组比较，均有显著性差异(P< 0.05，P< 0.01)。给药后180min两剂量组减轻心肌缺血程度的作用进一步加强，大剂量组降至(70.80±33.54)mV，下降率(76.04±6.73)%，与给药前及对照组比较，均有显著性差异(P< 0.01，P< 0.001)；小剂量组降至(146.20±62.07)mV，下降率为(47.71±19.06)%，与给药前及对照组比较，有显著性差异(P< 0.05，P< 0.01)。阳性对照药硫氮酮亦有相同作用。
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对照组给生理盐水后，心肌缺血范围(N-ST)无明显改变。通心络胶囊大剂量组减少N-ST的作用比较明显，给药后120min，N-ST由给药前 (29.80±0.447)个标测点降至(22.0±7.75)个标测点，下降(25.52±19.68)%，与给药前自身比较及与对照组比较均有显著差异(P< 0.05)；阳性对照药硫氮酮组给药后180min亦有相同作用，N-ST由给药前(30.00±0.00)个标测点，降至(22.00±7.75)个标测点，下降(26.73±25.88)%，与给药前自身比较及与对照组比较均有明显差异(P< 0.05)；通心络胶囊小剂量组减小心肌缺血范围(N-ST)的作用不明显。
结果表明，通心络胶囊对实验性犬心肌缺血有明显改善作用，可显著减轻心肌缺血程度(∑-ST)，减小心肌缺血范围(N-ST)，且大剂量组起效时间及作用强度均强于小剂量组。
2.各组犬急性心肌梗塞范围比较(见表1)：以定量组织学N-BT染色法显示心肌梗塞范围。生理盐水对照组梗塞区分别占心脏及心室的(7.83±3.28)%和(15.69±3.29)%。通心络胶囊大剂量组及硫氮酮组有明显缩小心肌梗塞范围的作用，梗塞区分别占心脏的(4.52±2.09)%、(2.35±0.83)%，与生理盐水对照组比较，均有显著差异(P均< 0.01)；梗塞区分别占心室的(6.91±2.98)%、(4.42±1.35)%，与对照组比较均有显著性差异(P均< 0.001)；小剂量组梗塞区占心室的(8.96±2.54)%，与对照组比较差异显著(P< 0.01)；梗塞区占心脏的百分比有降低的趋势，但无统计学意义。以上结果表明，通心络胶囊具有显著缩小心肌梗塞范围(N-BT染色)的作用，大剂量组强于小剂量组，与心外膜电图测定的结果是一致的。
, 百拇医药
表1 各组急性心肌梗塞范围比较(x±s)
组 别
犬 数
梗塞区/心脏(%)
梗塞区/心室(%)
生理盐水组
5
7.83±3.28
15.69±3.29*
硫氮酮组
5
2.35±0.83*
, 百拇医药
4.42±1.35**
通心络0.36g组
5
4.55±0.95
8.96±2.54*
通心络0.72g组
5
4.52±2.09*
6.91±2.98**
与生理盐水组比较，*P< 0.05,**P< 0.01。
3.对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响：各组心电图出现缺血性改变的动物数为对照组9只、心得安组2只、通心络胶囊1.0g/kg剂量组4只、0.5g/kg剂量组5只。经χ2检验，并与对照组比较，有显著性差异(P< 0.05)。
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4.对氯仿所致小鼠心律失常的影响：通心络胶囊1.0g/kg剂量组有6只、0.5g/kg剂量组有8只、利多卡因组有3只发生室性纤颤；经χ2检验，并与对照组比较差异显著(P< 0.05)。表明通心络胶囊有明显抗心律失常作用。
5.各组高脂血症大鼠血脂水平比较(见表2)：通心络胶囊两个剂量组与高脂对照组比较，均有明显降低TC、LDL作用，与血脂宁降脂作用无明显差异。对HDL无明显影响。
表2 各组大鼠血脂水平比较(x±s)
组别
犬数
血脂(mmol/L)
TC
HDL
, 百拇医药
LDL
高脂对照组
10
221.0±49.2
18.3±9.6
198.1±32.1
血脂宁组
10
145.2±50.1*
24.1±9.8
120.6±32.1**
通心络0.5g组
, 百拇医药
10
181.4±31.2*
21.3±7.9
160.3±15.9*
通心络1.0g组
10
163.8±63.1*
20.8±9.1
142.6±40.2**
与高脂对照组比较，*P< 0.05,**P< 0.01。
讨 论
, 百拇医药 研究防治冠心病类药物多以抗心肌缺血(缺氧)为主要指标，常以阻断冠状动脉造成急性心肌缺血模型来观察药物的治疗作用。通心络胶囊为口服剂型，本实验通过动物消化道给药，30min即可显示药物作用。同时，以具有典型抗心肌缺血作用的钙拮抗剂硫氮酮作为阳性药，证实该动物模型的可靠性。
本实验采用心外膜电图标测心肌缺血范围及程度，定量组织学(N-BT染色法)测定心肌梗塞范围，观察了通心络胶囊对实验性犬急性心肌缺血的影响。实验结果证实，通心络胶囊具有明显改善犬急性心肌缺血和心肌梗塞的作用，减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)，减小心肌缺血范围(N-ST)；明显减小通过N-BT染色所显示的梗塞区，推测其作用机制与促进心脏侧支循环，改善微循环障碍，增加缺血区供血及提高心肌耐缺氧能力有关。
冠状动脉痉挛是心绞痛重要的发病因素，实验观察到通心络胶囊对垂体后叶素诱发大鼠心电图缺血性改变有明显的改善作用，证实通心络胶囊能够保护大鼠垂体后叶素所致心肌缺血，与犬抗心肌缺血实验研究结果是一致的。心律失常可由心肌缺血所致心肌损伤引起。一定剂量的氯仿可提高心肌的自律性，导致室性早搏、室性心动过速，甚至室性颤动。本实验采用氯仿所致小鼠室性纤颤动物模型，以利多卡因作为阳性对照药观察了通心络胶囊对小鼠室性纤颤的影响，结果显示通心络胶囊有明显的抑制氯仿引起的小鼠室性心律失常的作用。
近年的临床与实验研究证实LDL的浓度与冠心病的形成有着密切的联系，降低血清中高胆固醇水平，可以延缓动脉粥样硬化的发展。实验采用琼脂糖凝胶电泳法测定了高脂大鼠血清TC及LDL。结果表明，通心络胶囊可明显降低食饵性高脂血症大鼠的血脂水平。, http://www.100md.com
通心络胶囊由人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、赤芍等中药组成，是根据中医理论研制而成的中药复方制剂，具有通络活血、缓急止痛及益气养阴之功效。临床用于治疗冠心病心绞痛取得较好疗效。为了研究其作用机制，我们进行了与其功能主治相关的药效学实验研究。
材料与方法
, 百拇医药
1.主要实验药物：通心络胶囊干粉(1.43g生药/g干粉)，由石家庄以岭药业股份有限公司提供。硫氮酮片(恬尔心，盐酸地尔硫)，30mg/片；心得安注射液，50mg/5ml；垂体后叶素，10U/ml；利多卡因注射液，0.2mg/10ml；血脂宁。
2.实验动物：健康成年杂种犬20只，雌雄兼用，体重12～16kg，由中国中医研究院西苑医院实验动物室提供。Wistar大鼠80只，雌雄各半，体重240～380g；昆明小白鼠64只，体重18～22g，由河北省医学科学院动物室提供。
3.实验方法
(1)实验性犬急性心肌缺血：实验分4组，每组5只犬。空白对照组：给予生理盐水4ml/kg；通心络小剂量组：给予近似胶囊0.36g生药/kg；通心络大剂量组：给予近似胶囊0.72g生药/kg；阳性对照药组：给予硫氮酮片，5mg/kg。所试药物均用生理盐水配制成等体积(4ml/kg)，经胃管灌胃给药。动物经戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，气管插管，连接SC-3型电动呼吸机；左侧第4肋间开胸，暴露心脏，剪开心包，做心包床；分离冠状动脉左前降支中段，穿线以备结扎用，造成急性实验性心肌缺血模型；缝置多点固定式心外膜电极，连接RM-6000型多道生理记录仪，描记心外膜电图。结扎冠脉15min后，进行记录，作为给药前对照值。经胃管给予实验药物或生理盐水，于给药后15、30、60、90、120、180min记录30个标测点心外膜电图，以S-T段升高大于2mV为判断标准，以此计算心肌缺血程度(∑-ST，S-T段升高总毫伏数)及心肌缺血范围(N-ST，S-T段升高总点数)。
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给药后180min记录完毕，立即取下心脏，生理盐水冲洗，称量全心重。在心脏结扎线以下，平行于冠状沟均匀地将心室部分横断切成5片，然后，置于硝基四氮唑蓝(N-BT)染液中，常温染色15min。用落点求积法(36点/cm2)测量每片心肌双侧的梗死区(N-BT染色区)，每片心肌称重，计算每片心肌的面积、心室总面积和梗塞区总面积。计算梗塞区占心室(梗塞区/心室)及占全心脏(梗死区/心脏)的百分比，结果进行统计学处理，检验判断其显著性。
(2)垂体后叶素所致大鼠心肌缺血：将大鼠随机分为4组，通心络胶囊(灌胃给药)1.0g/kg剂量组、0.5g/kg剂量组、阳性药心得安组(2mg/kg，腹腔注射，每天1次)及空白对照组(灌服0.5%羧甲基纤维素钠液)。每组10只，连续给药10天。末次给药后1h，腹腔注射30%乌拉坦麻醉，静脉注射垂体后叶素0.5U/kg，10s内注完，诱发冠脉痉挛性心肌缺血。用六道生理记录仪记录Ⅱ导心电图，观察注射垂体后叶素后即刻、15s、30s、1min、2min、5min心电图变化，以T波、S-T段改变或P-R、Q-T间期延长判断心肌缺血程度和药物作用。
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心肌缺血判断标准：第1期：注射垂体后叶素后即刻至30s，T波升高、S-T段抬高超过0.1mV。第2期：T波低平、双相、倒置，心率变慢，P-R及Q-T间期延长。
(3)氯仿所致小鼠心律失常：将小鼠随机分为通心络胶囊1.0g/kg剂量组、0.5g/kg剂量组、利多卡因组(0.1mg/20g，腹腔注射)及空白对照组(0.5羧甲基纤维素钠液)。每天灌胃给药1次，连续10天。于末次给药1h后吸入氯仿，六道生理仪记录标准Ⅱ导联心电图，观察心律失常(室性纤颤)发生率。
(4)高脂血症大鼠血脂水平测定：将大鼠随机分为通心络胶囊1.0g/kg剂量组、0.5g/kg剂量组、血脂宁组(1.0g/kg)及高脂空白对照组。每组10只，各组均喂高脂饲料10天(1%胆固醇加10%猪油加0.25%甲亢平加88.75%基础饲料)，每天灌胃给药1次；高脂对照组给予0.5%羧甲纤维素钠液。在末次给药后1h，处死动物取血，用琼脂糖凝胶电泳法测定血清中总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白(LDL)含量，推算高密度脂蛋白(HDL)水平。
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结 果
1.对犬心肌缺血的影响：通心络胶囊大剂量组、小剂量组及阳性对照药硫氮酮组对∑-ST有明显减轻的作用。大剂量组给药后30min即可起效，由给药前(294.80±97.97)mV降至(248.00±97.97)mV，下降(16.36±8.49)%，与给药前(P< 0.05)及与对照组比较，均有显著性差异(P < 0.05)，且随给药时间延长作用愈加显著。小剂量组减轻心肌缺血程度的作用不及大剂量组，给药后120min，∑-ST开始明显下降，由给药前(293.40±117.40)mV降至(212.00±93.26)mV,下降(26.62±14.84)%，与给药前自身比较及与对照组比较，均有显著性差异(P< 0.05，P< 0.01)。给药后180min两剂量组减轻心肌缺血程度的作用进一步加强，大剂量组降至(70.80±33.54)mV，下降率(76.04±6.73)%，与给药前及对照组比较，均有显著性差异(P< 0.01，P< 0.001)；小剂量组降至(146.20±62.07)mV，下降率为(47.71±19.06)%，与给药前及对照组比较，有显著性差异(P< 0.05，P< 0.01)。阳性对照药硫氮酮亦有相同作用。
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对照组给生理盐水后，心肌缺血范围(N-ST)无明显改变。通心络胶囊大剂量组减少N-ST的作用比较明显，给药后120min，N-ST由给药前 (29.80±0.447)个标测点降至(22.0±7.75)个标测点，下降(25.52±19.68)%，与给药前自身比较及与对照组比较均有显著差异(P< 0.05)；阳性对照药硫氮酮组给药后180min亦有相同作用，N-ST由给药前(30.00±0.00)个标测点，降至(22.00±7.75)个标测点，下降(26.73±25.88)%，与给药前自身比较及与对照组比较均有明显差异(P< 0.05)；通心络胶囊小剂量组减小心肌缺血范围(N-ST)的作用不明显。
结果表明，通心络胶囊对实验性犬心肌缺血有明显改善作用，可显著减轻心肌缺血程度(∑-ST)，减小心肌缺血范围(N-ST)，且大剂量组起效时间及作用强度均强于小剂量组。
2.各组犬急性心肌梗塞范围比较(见表1)：以定量组织学N-BT染色法显示心肌梗塞范围。生理盐水对照组梗塞区分别占心脏及心室的(7.83±3.28)%和(15.69±3.29)%。通心络胶囊大剂量组及硫氮酮组有明显缩小心肌梗塞范围的作用，梗塞区分别占心脏的(4.52±2.09)%、(2.35±0.83)%，与生理盐水对照组比较，均有显著差异(P均< 0.01)；梗塞区分别占心室的(6.91±2.98)%、(4.42±1.35)%，与对照组比较均有显著性差异(P均< 0.001)；小剂量组梗塞区占心室的(8.96±2.54)%，与对照组比较差异显著(P< 0.01)；梗塞区占心脏的百分比有降低的趋势，但无统计学意义。以上结果表明，通心络胶囊具有显著缩小心肌梗塞范围(N-BT染色)的作用，大剂量组强于小剂量组，与心外膜电图测定的结果是一致的。
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表1 各组急性心肌梗塞范围比较(x±s)
组 别
犬 数
梗塞区/心脏(%)
梗塞区/心室(%)
生理盐水组
5
7.83±3.28
15.69±3.29*
硫氮酮组
5
2.35±0.83*
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4.42±1.35**
通心络0.36g组
5
4.55±0.95
8.96±2.54*
通心络0.72g组
5
4.52±2.09*
6.91±2.98**
与生理盐水组比较，*P< 0.05,**P< 0.01。
3.对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响：各组心电图出现缺血性改变的动物数为对照组9只、心得安组2只、通心络胶囊1.0g/kg剂量组4只、0.5g/kg剂量组5只。经χ2检验，并与对照组比较，有显著性差异(P< 0.05)。
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4.对氯仿所致小鼠心律失常的影响：通心络胶囊1.0g/kg剂量组有6只、0.5g/kg剂量组有8只、利多卡因组有3只发生室性纤颤；经χ2检验，并与对照组比较差异显著(P< 0.05)。表明通心络胶囊有明显抗心律失常作用。
5.各组高脂血症大鼠血脂水平比较(见表2)：通心络胶囊两个剂量组与高脂对照组比较，均有明显降低TC、LDL作用，与血脂宁降脂作用无明显差异。对HDL无明显影响。
表2 各组大鼠血脂水平比较(x±s)
组别
犬数
血脂(mmol/L)
TC
HDL
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LDL
高脂对照组
10
221.0±49.2
18.3±9.6
198.1±32.1
血脂宁组
10
145.2±50.1*
24.1±9.8
120.6±32.1**
通心络0.5g组
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10
181.4±31.2*
21.3±7.9
160.3±15.9*
通心络1.0g组
10
163.8±63.1*
20.8±9.1
142.6±40.2**
与高脂对照组比较，*P< 0.05,**P< 0.01。
讨 论
, 百拇医药 研究防治冠心病类药物多以抗心肌缺血(缺氧)为主要指标，常以阻断冠状动脉造成急性心肌缺血模型来观察药物的治疗作用。通心络胶囊为口服剂型，本实验通过动物消化道给药，30min即可显示药物作用。同时，以具有典型抗心肌缺血作用的钙拮抗剂硫氮酮作为阳性药，证实该动物模型的可靠性。
本实验采用心外膜电图标测心肌缺血范围及程度，定量组织学(N-BT染色法)测定心肌梗塞范围，观察了通心络胶囊对实验性犬急性心肌缺血的影响。实验结果证实，通心络胶囊具有明显改善犬急性心肌缺血和心肌梗塞的作用，减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)，减小心肌缺血范围(N-ST)；明显减小通过N-BT染色所显示的梗塞区，推测其作用机制与促进心脏侧支循环，改善微循环障碍，增加缺血区供血及提高心肌耐缺氧能力有关。
冠状动脉痉挛是心绞痛重要的发病因素，实验观察到通心络胶囊对垂体后叶素诱发大鼠心电图缺血性改变有明显的改善作用，证实通心络胶囊能够保护大鼠垂体后叶素所致心肌缺血，与犬抗心肌缺血实验研究结果是一致的。心律失常可由心肌缺血所致心肌损伤引起。一定剂量的氯仿可提高心肌的自律性，导致室性早搏、室性心动过速，甚至室性颤动。本实验采用氯仿所致小鼠室性纤颤动物模型，以利多卡因作为阳性对照药观察了通心络胶囊对小鼠室性纤颤的影响，结果显示通心络胶囊有明显的抑制氯仿引起的小鼠室性心律失常的作用。
近年的临床与实验研究证实LDL的浓度与冠心病的形成有着密切的联系，降低血清中高胆固醇水平，可以延缓动脉粥样硬化的发展。实验采用琼脂糖凝胶电泳法测定了高脂大鼠血清TC及LDL。结果表明，通心络胶囊可明显降低食饵性高脂血症大鼠的血脂水平。, http://www.100md.com