不同时辰电针十二经五输穴与内关穴对正常人体免疫功能的影响
采用旨在进行多因素分析的6×6拉丁方实验设计，观察了不同时辰电针十二经五输穴与内关穴对正常青年人免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 观察对象 正常在校学生72例，男女各半，年龄18～22岁之间，平均(19.81±1.29)岁。
1.2 测定指标
1.2.1 红细胞粘附促进因子(RFER) 计量单位为百分率(%)。
1.2.2 红细胞粘附抑制因子(RFIR) 计量单位为百分率(%)。
1.2.3 E花环抑制因子 计量单位为百分率(%)。
1.3 实验方法
, http://www.100md.com
1.3.1 采用6×6拉丁方设计[1]，其格式见表1。
表1 6×6拉丁方设计格式
受试者
戌时
子时
寅时
辰时
午时
申时
1
B
C
A
, 百拇医药
D
F
E
2
E
D
B
C
A
F
3
C
F
E
, http://www.100md.com
A
B
D
4
A
E
C
F
D
B
5
F
B
D
, 百拇医药
E
C
A
6
D
A
F
B
E
C
A-井穴； B-荥穴; C-输穴; D-经穴 ; E-合穴; F-内关
1.3.2 以行代表受试者，共6人，其中男性3人，女性3人。
, http://www.100md.com
1.3.3 以列代表时辰，每4 h为1个时间单位。选用时辰为戌时(20∶00)、子时(00∶00)、寅时(04∶00)、辰时(08∶00)、午时(12∶00)、申时(16∶00)。
1.3.4 以字母代表穴位，A为井穴，B为荥穴，C为输穴，D为经穴，E为合穴，F为内关穴。
1.3.5 按十二经脉将实验对象随机均衡分为12组，每组6人。随机决定各实验组的先后实验次序。各实验组的拉丁方设计格式完全相同。
1.3.6 每组实验均在24 h内完成。6个受试者在1 d的6个连续不同时辰针刺五输穴和内关穴。
1.3.7 观察针刺的即刻效应。针刺得气后，通电(电针仪G-6805)，连续波，频率4 Hz，时间2 min，强度以受试者能够耐受为度，并尽量使受试者每次感受的刺激强度相等。
, http://www.100md.com
1.3.8 针刺时间均尽量靠近每一时辰的正中时刻，前后偏离不超过30 min。
1.3.9 针刺前后20 min各取血样1次，肘部静脉取血，放置引流管。
1.3.10 各组受试者均保持正常的生活起居，要求每次受试前避免剧烈的体力活动及明显的情绪波动。
1.3.11 各组女性的实验时间均固定在月经周期的第10天左右(卵泡期)进行。
1.4 统计方法
采用方差分析和t检验，所得数据由电子计算机进行处理。
2 实验结果
2.1 不同时辰电针肺经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
, 百拇医药
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与寅时之间的差别有显著意义(P<0.05)。针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，寅时与子时、辰时、午时以及午时与申时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与寅时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与寅时、戌时以及戌时与午时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.2 不同时辰电针大肠经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与子时、寅时、午时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFIR在不同穴位之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，阳溪与其他穴位之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFIR的针刺前后差值在不同时辰之间的差异也具有统计学意义(P<0.001)，经均数间两两比较，子时与寅时、午时，寅时与辰时、戌时，辰时与午时以及戌时与午时、申时之间的差异都有着显著意义(均P<0.05)。
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2.3 不同时辰电针胃经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，戌时与寅时、辰时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFIR的针刺前后差值在不同穴位之间的差别具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，陷谷与内关之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺前的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，辰时与午时、申时，午时与戌时，申时与子时、寅时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与子时、寅时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.4 不同时辰电针脾经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.0001)，经均数间两两比较，辰时与午时、申时、戌时，戌时与子时、寅时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，但经均数间两两比较，各时辰间的差别无显著意义。
, 百拇医药
2.5 不同时辰电针心经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前、后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异都具有统计学意义(P<0.001)，经均数间两两比较，针刺前、后寅时与其他时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFER和针刺前后RFER的差值在不同受试者之间的差异也具有统计学意义(均P<0.01)，其中3号受试者的RFER高于其他受试者。
2.6 不同时辰电针小肠经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.001)，经均数间两两比较，子时与寅时、辰时、午时、申时，戌时与寅时、辰时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFER的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与午时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与其他时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与午时、申时，寅时与午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与戌时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。
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2.7 不同时辰电针膀胱经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
不论是针刺前、针刺后或是针刺前后的差值，各免疫指标在不同时辰、不同受试者以及不同穴位之间的差异均无统计学意义。
2.8 不同时辰电针肾经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与辰时、午时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。E花环抑制因子的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与午时，辰时与子时、寅时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.9 不同时辰电针心包经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.0001)，经均数间两两比较，戌时与其它时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与子时、寅时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFER的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与寅时、辰时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与其他时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，戌时与寅时之间的差别都有着显著意义(P<0.05)。
, 百拇医药
2.10 不同时辰电针三焦经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺后的RFER在不同穴位之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，但经均数间两两比较，各穴位间的差别无显著意义。
2.11 不同时辰电针胆经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
RFER的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与申时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与其它时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.12 不同时辰电针肝经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
不论是针刺前、针刺后或是针刺前后的差值，各免疫指标在不同时辰、不同受试者以及不同穴位之间的差异均无统计学意义。
, 百拇医药
3 讨论
本实验采取了旨在进行多因素分析的拉丁方实验设计，其主要目的在于观察不同时辰针刺的影响。从实验结果可以看到，不同时辰针刺可以使正常青年人的免疫功能发生不同变化，但不同实验组的变化情况不同。肺经组针刺前后的RFER和RFIR，大肠经组针刺前的RFIR和针刺前后RFIR的差值，胃经组针刺前的RFER和针刺前后的E花环抑制因子，脾经组针刺前、针刺后的RFER，心经组针刺前后的E花环抑制因子，小肠经组针刺前的E花环抑制因子、针刺后的RFER、RFIR、E花环抑制因子和针刺前后RFER的差值，肾经组针刺前的RFIR、针刺后的E花环抑制因子和针刺前后E花环抑制因子的差值，心包经组针刺前、针刺后的RFER、RFIR和针刺前后RFIR的差值，胆经组针刺前后RFER的差值、针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异都具有统计学意义(P<0.05、P<0.01和P<0.0001)。由于各实验组的穴位不同，可以推测，上述不同时辰针刺效应之间的差异主要与穴位有关。实验中不同时辰针刺引起免疫功能的不同变化，实际上表明不同时辰针刺不同穴位对正常青年人的免疫功能有着不同影响。
, 百拇医药
电针各经的五输穴与内关穴，对正常青年人免疫功能影响的差异不明显。但在不同时辰针刺，却可使正常青年人的免疫功能出现不同变化，说明时间因素可以作用于穴位，使之出现相对特异性。十二经脉五输穴是古典时间针法——子午流注针法的开穴基础，而内关穴则属于八脉交会穴，亦是灵龟八法、飞腾八法的开穴之一。虽然本实验是在生理状态下进行观察，与子午流注等按时刺灸的方法应用于病人的条件不同，但不同时辰针刺十二经五输穴和内关穴效应之间的差异，从一个侧面提示了子午流注等按时刺灸的方法确有着其合理内涵。
我们在实验中还观察到，心经组针刺前的RFER和针刺前后RFER的差值在不同受试者之间的差异也具有统计学意义(均P<0.01)，其中3号受试者的RFER高于其他受试者。
*国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 杨树勤主编.中国医学百科全书 . 医学统计学.上海：上海科学技术出版社，1985.67, 百拇医药(李磊 任璐蓓 刘世敏 余双才 李继文|)
1 材料与方法
1.1 观察对象 正常在校学生72例，男女各半，年龄18～22岁之间，平均(19.81±1.29)岁。
1.2 测定指标
1.2.1 红细胞粘附促进因子(RFER) 计量单位为百分率(%)。
1.2.2 红细胞粘附抑制因子(RFIR) 计量单位为百分率(%)。
1.2.3 E花环抑制因子 计量单位为百分率(%)。
1.3 实验方法
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1.3.1 采用6×6拉丁方设计[1]，其格式见表1。
表1 6×6拉丁方设计格式
受试者
戌时
子时
寅时
辰时
午时
申时
1
B
C
A
, 百拇医药
D
F
E
2
E
D
B
C
A
F
3
C
F
E
, http://www.100md.com
A
B
D
4
A
E
C
F
D
B
5
F
B
D
, 百拇医药
E
C
A
6
D
A
F
B
E
C
A-井穴； B-荥穴; C-输穴; D-经穴 ; E-合穴; F-内关
1.3.2 以行代表受试者，共6人，其中男性3人，女性3人。
, http://www.100md.com
1.3.3 以列代表时辰，每4 h为1个时间单位。选用时辰为戌时(20∶00)、子时(00∶00)、寅时(04∶00)、辰时(08∶00)、午时(12∶00)、申时(16∶00)。
1.3.4 以字母代表穴位，A为井穴，B为荥穴，C为输穴，D为经穴，E为合穴，F为内关穴。
1.3.5 按十二经脉将实验对象随机均衡分为12组，每组6人。随机决定各实验组的先后实验次序。各实验组的拉丁方设计格式完全相同。
1.3.6 每组实验均在24 h内完成。6个受试者在1 d的6个连续不同时辰针刺五输穴和内关穴。
1.3.7 观察针刺的即刻效应。针刺得气后，通电(电针仪G-6805)，连续波，频率4 Hz，时间2 min，强度以受试者能够耐受为度，并尽量使受试者每次感受的刺激强度相等。
, http://www.100md.com
1.3.8 针刺时间均尽量靠近每一时辰的正中时刻，前后偏离不超过30 min。
1.3.9 针刺前后20 min各取血样1次，肘部静脉取血，放置引流管。
1.3.10 各组受试者均保持正常的生活起居，要求每次受试前避免剧烈的体力活动及明显的情绪波动。
1.3.11 各组女性的实验时间均固定在月经周期的第10天左右(卵泡期)进行。
1.4 统计方法
采用方差分析和t检验，所得数据由电子计算机进行处理。
2 实验结果
2.1 不同时辰电针肺经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
, 百拇医药
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与寅时之间的差别有显著意义(P<0.05)。针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，寅时与子时、辰时、午时以及午时与申时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与寅时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与寅时、戌时以及戌时与午时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.2 不同时辰电针大肠经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与子时、寅时、午时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFIR在不同穴位之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，阳溪与其他穴位之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFIR的针刺前后差值在不同时辰之间的差异也具有统计学意义(P<0.001)，经均数间两两比较，子时与寅时、午时，寅时与辰时、戌时，辰时与午时以及戌时与午时、申时之间的差异都有着显著意义(均P<0.05)。
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2.3 不同时辰电针胃经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，戌时与寅时、辰时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFIR的针刺前后差值在不同穴位之间的差别具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，陷谷与内关之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺前的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，辰时与午时、申时，午时与戌时，申时与子时、寅时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与子时、寅时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.4 不同时辰电针脾经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.0001)，经均数间两两比较，辰时与午时、申时、戌时，戌时与子时、寅时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，但经均数间两两比较，各时辰间的差别无显著意义。
, 百拇医药
2.5 不同时辰电针心经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前、后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异都具有统计学意义(P<0.001)，经均数间两两比较，针刺前、后寅时与其他时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFER和针刺前后RFER的差值在不同受试者之间的差异也具有统计学意义(均P<0.01)，其中3号受试者的RFER高于其他受试者。
2.6 不同时辰电针小肠经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.001)，经均数间两两比较，子时与寅时、辰时、午时、申时，戌时与寅时、辰时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFER的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与午时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与其他时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与午时、申时，寅时与午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与戌时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。
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2.7 不同时辰电针膀胱经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
不论是针刺前、针刺后或是针刺前后的差值，各免疫指标在不同时辰、不同受试者以及不同穴位之间的差异均无统计学意义。
2.8 不同时辰电针肾经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺后的E花环抑制因子在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与辰时、午时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。E花环抑制因子的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，子时与午时，辰时与子时、寅时、戌时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.9 不同时辰电针心包经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺前的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.0001)，经均数间两两比较，戌时与其它时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的RFER在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与子时、寅时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。RFER的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与寅时、辰时、午时、申时之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺前的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.01)，经均数间两两比较，戌时与其他时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，戌时与寅时之间的差别都有着显著意义(P<0.05)。
, 百拇医药
2.10 不同时辰电针三焦经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
针刺后的RFER在不同穴位之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，但经均数间两两比较，各穴位间的差别无显著意义。
2.11 不同时辰电针胆经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
RFER的针刺前后差值在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，子时与申时之间的差别有着显著意义(P<0.05)。针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，经均数间两两比较，申时与其它时辰之间的差别都有着显著意义(均P<0.05)。
2.12 不同时辰电针肝经五输穴与内关穴对正常人免疫功能的影响
不论是针刺前、针刺后或是针刺前后的差值，各免疫指标在不同时辰、不同受试者以及不同穴位之间的差异均无统计学意义。
, 百拇医药
3 讨论
本实验采取了旨在进行多因素分析的拉丁方实验设计，其主要目的在于观察不同时辰针刺的影响。从实验结果可以看到，不同时辰针刺可以使正常青年人的免疫功能发生不同变化，但不同实验组的变化情况不同。肺经组针刺前后的RFER和RFIR，大肠经组针刺前的RFIR和针刺前后RFIR的差值，胃经组针刺前的RFER和针刺前后的E花环抑制因子，脾经组针刺前、针刺后的RFER，心经组针刺前后的E花环抑制因子，小肠经组针刺前的E花环抑制因子、针刺后的RFER、RFIR、E花环抑制因子和针刺前后RFER的差值，肾经组针刺前的RFIR、针刺后的E花环抑制因子和针刺前后E花环抑制因子的差值，心包经组针刺前、针刺后的RFER、RFIR和针刺前后RFIR的差值，胆经组针刺前后RFER的差值、针刺后的RFIR在不同时辰之间的差异都具有统计学意义(P<0.05、P<0.01和P<0.0001)。由于各实验组的穴位不同，可以推测，上述不同时辰针刺效应之间的差异主要与穴位有关。实验中不同时辰针刺引起免疫功能的不同变化，实际上表明不同时辰针刺不同穴位对正常青年人的免疫功能有着不同影响。
, 百拇医药
电针各经的五输穴与内关穴，对正常青年人免疫功能影响的差异不明显。但在不同时辰针刺，却可使正常青年人的免疫功能出现不同变化，说明时间因素可以作用于穴位，使之出现相对特异性。十二经脉五输穴是古典时间针法——子午流注针法的开穴基础，而内关穴则属于八脉交会穴，亦是灵龟八法、飞腾八法的开穴之一。虽然本实验是在生理状态下进行观察，与子午流注等按时刺灸的方法应用于病人的条件不同，但不同时辰针刺十二经五输穴和内关穴效应之间的差异，从一个侧面提示了子午流注等按时刺灸的方法确有着其合理内涵。
我们在实验中还观察到，心经组针刺前的RFER和针刺前后RFER的差值在不同受试者之间的差异也具有统计学意义(均P<0.01)，其中3号受试者的RFER高于其他受试者。
*国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 杨树勤主编.中国医学百科全书 . 医学统计学.上海：上海科学技术出版社，1985.67, 百拇医药(李磊 任璐蓓 刘世敏 余双才 李继文|)