尿激酶
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| 药品名称 | 尿激酶 |
| 拼音名 | Niaojimei |
| 英文名 | UROKINASUM |
| 类别 | 原料药 |
| 标准编号 | WS1-C3-001 |
| 来源(分子式)/处方与标准 | 本品系从新鲜人尿中提取的一种激活纤维蛋白溶酶原的酶。 其比活力为每1mg蛋白 不得少于35,000单位，高分子尿激酶的百分含量不得低于85.0%。 |
| 全文 | 【性状】 本品为白色或类白色粉末。 【鉴别】 取本品，加巴比妥缓冲液(pH7.4)稀释成每1ml中含18单位的溶液，吸取1ml,加入牛纤维蛋白原溶液0.3ml中，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液0.2ml，牛凝血酶溶液0.2ml，迅速摇匀，立即置37±0.5℃恒温水浴中保温，记时，反应系统应在30～45秒内凝结，且凝块在15分钟内重新溶解。 以生理盐水作空白，同法操作，反应系统应在30～45秒内凝结，凝块在2小时内不溶(试剂的配制同效价测定)。 【检查】 溶液的澄明度与颜色 取本品，加生理盐水溶解成每1ml中含1,000单位的溶液，在1分钟内溶液应澄明无色。 干燥失重 取本品，在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得过5.0%(中国药典1985年版二部附录40页)。 异常毒性 取本品,加灭菌生理盐水制成每1ml中含2,000单位的溶液,依法检查(中国药典1985年版二部附录86页)，按静脉注射法给药，应符合规定。 热原 取本品，加灭菌生理盐水制成每1ml中含5,000单位的溶液，依法检查(中国药典1985年版二部附录86页)，剂量按家兔体重每1kg注射1ml,应符合规定。 凝血质样活性物质 (1) 血浆的制备 从正常空腹献血者静脉采血,开始的2～3滴血弃去，再用予先加有20%草酸钾溶液的聚乙烯输血袋(每10ml血加20%草酸钾溶液0.15ml)，混匀，置0～5℃的20,000转/分的离心机内，离心20分钟,使血浆澄清。 血浆的复钙试验凝固时间应在12～17分钟内，如小于12分钟，应再离心或放置在0～5℃冰箱，12分钟以后即可使用。 在-20℃速冻保存备用，用前在25℃融化。 (2) 复钙试验前，氯化钙用量预试 取小试管(12×75mm)6支，各加血浆0.1ml、6-氨基己酸液(0.03mol/L)0.1ml及巴比妥缓冲液(pH7.4)0.1ml，再递次分别加入氯化钙液(0.025mol/L)0.10、0.12、0.14、0.16、0.18、0.20ml，迅速置25℃水浴中保温，观察各试管的凝固时间。 在一系列试管中，以最短凝固时间的一管所加的氯化钙量，为复钙试验时的氯化钙溶液用量。 (3) 测定法 取本品，加巴比妥缓冲液 (pH7.4) 使成每1ml中含10,000、5,000、2,500、1,250、625及312单位。 若供试品中含乙二胺四醋酸盐或磷酸盐，必须先经巴比妥缓冲液(pH7.4)在2℃透析除去，再配成上述浓度的溶液。 取小试管(12×75mm)8支,第一、第八管各加巴比妥缓冲液(pH7.4)0.1ml作空白对照,其余6管分别加入上述倍比稀释的尿激酶溶液各0.1ml，再依次加入6-氨基己酸液(0.03mol/L)和血浆各0.1ml,轻轻摇匀，在25℃水浴中，静置2～3分钟，迅速加入予湿至25℃的、复钙试验所需的氯化钙液(0.025mol/L)用量，混匀，记录放入时间。 注意观察血浆凝固，观察时轻轻倾斜，避免影响凝血过程，记录凝固时间，两支对照管的误差不得大于1分钟。 空白对照管凝固时间减去供试品管凝固时间等于复钙试验凝固缩短时间。 在单对数纸上，以尿激酶溶液的浓度为纵座标，以复钙缩短时间(秒)为横座标、绘图，联接不同稀释度的尿激酶各点，应成一直线，此直线外延至纵轴，与纵轴的交点即表示尿激酶浓度，也是凝血质样活性为零值时的尿激酶活力,按每1ml中尿激酶的单位表示，每1ml应大于120单位。 【比活力测定】 效价测定 (1) 标准品溶液的制备 取尿激酶标准品，加巴比妥一氯化钠缓冲液(pH7.75)制成每1ml中含60单位的溶液。 (2) 供试品溶液的制备 取本品适量，用巴比妥一氯化钠缓冲液(pH7.75)溶解、混匀并稀释成与标准品溶液相同的浓度。 (3) 测定法 取试管4支，各加牛纤维蛋白原溶液0.3ml,置37±0.5℃水浴中，分别加入巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.75) 0.9、0.8、0.7、0.6ml，依次加标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4ml,再分别加混合溶液0.4ml,立即摇匀，分别计时。 反应系统应在30～45秒内凝结，当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终点，记时。 以尿激酶的浓度为横座标，以反应终点时间与入水浴时间的差值为纵座标，在双对数纸上绘制标准曲线应呈直线。 供试品按上法测定,在标准曲线上求得每1ml单位数。 标准品和供试品应各做二次，所得的直线亦应平行，否则应重复试验。 蛋白含量 照氮测定法测定(中国药典1985年版二部附录42页第二法)，得到的蛋白氮量与6.25相乘，即得供试品中含有蛋白的重量，计算每1ml中含蛋白的mg数。 比活力 按下式计算 比活力效价单位数 比活力＝─────── 蛋白的mg数 【分子量测定】 取本品,照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定(附录*58页)求出高分子尿激酶和低分子尿激酶的分子量及相应的峰面积，按下式计算高分子尿激酶的百分含量。 高分子尿激酶峰面积 高分子尿激酶的百分含量＝──────────────×100% 高、低分子尿激酶峰面积之和 【作用与用途】 溶血栓酶。 能激活纤溶酶原使成纤溶酶。 用于脑血栓，肢体周围动静脉血栓及中央视网膜动静脉血栓等。 【贮藏】 密闭，在2～10℃处保存。 应在近期内使用。 【制剂】 注射用尿激酶。 巴比妥缓冲液(0.05mol/L,pH7.4) 取巴比妥纳4.24g,加蒸馏水使溶解并稀释至400ml,用盐酸液(2mol/L)调节pH值至7.4,滤过。 6-氨基己酸液(0.03mol/L) 取6-氨基己酸1.97g，加巴比妥缓冲液(0.05mol/L,pH7.4)使溶解并稀释至50ml。 氯化钙液(0.025mol/L) 取氯化钙1.84g,加蒸馏水使溶解并稀释至500ml。 巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.75) 取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及蒸馏水适量使溶解，另取明胶0.5g加蒸馏水适量，加热溶解后并入上述溶液中,然后用盐酸液(0.2mol/L)调节pH值至7.75，再用蒸馏水稀释至500ml。 曲瑞斯缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加蒸馏水使溶解成1,000ml，调节pH值至9.0。 牛纤维蛋白原溶液 取牛纤维蛋白原，加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.75)制成每1ml中含6.67mg可凝结蛋白的溶液。 牛凝血酶溶液 取牛凝血酶，加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.75)制成每1ml中含6.0单位的溶液。 牛纤维蛋白溶酶原溶液 取牛纤维蛋白溶酶原,加曲瑞斯缓冲液(pH9.0)制成每ml中含1～1.4酪蛋白单位的溶液(如溶液浑浊，离心，取上清液备用)。 混合溶液 临用前取等容积的牛凝血酶溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液，混匀。 |