第二节 均相酶免疫测定

一、酶扩大免疫测定技术

酶扩大免疫测定技术是最早取得实际应用的均相酶免疫测定方法，是由美国Syva公司研究成功并定名的。此法主要检测小分子抗原或半抗原，在药物测定中取得较多应用。酶扩大免疫测定技术(enzyme-multipliedimmunoassaytechnique，EMIT)试剂盒的商标取名为EMIT。

EMIT的基本原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性(图15-2B)。当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受影响而活性被抑制(图15-2A)。EMIT试剂盒中的主要试剂为：①抗体，②酶标半抗原，③酶的底物。检测对象为标本中的半抗原。当试剂①、②与标本混合后，标本中的半抗原与酶标的半抗原竞争性地与试剂中的抗体相结合。如标本中的半抗原量少，与抗体结合的酶标半抗原的比例增高，游离的具有酶活力的酶标半抗原的量就减少。因此在反应后酶活力大小一标本中的半抗原呈一定的比例，从酶活力的测定结果就可推算出标本中半抗原的量。

图15-2EMIT原理示意图

二、克隆酶供体免疫测定

利用重组DNA技术制备β-半糖苷酶的两个片段：大片段称为酶受体(enzymeacceptor，EA)，小片段称为酶供体(enzymedonor，ED)。两个片段本身均不具酶活性，但在合适的条件下结合在一起就具有酶活性。利用这两相片段的特性建立的均相酶免疫测定称为克隆酶供体免疫测定(clonedenzymedonorimmunoassay,CEDIA)。CEDIA的反应模式为竞争法，测定原理为：标本中的抗原和ED标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不再能与EA结合。反应平衡后，剩余的ED标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶(图15-3)。加入底物测定酶活力，酶活力的大小与标本中抗原含量成正比。CEDIA主要用于药物和小分子物质的测定。

图15-3CEDIA原理示意图