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编号:96132
聚合酶链反应检测幽门螺杆菌70例
http://www.100md.com 《中国幽门螺杆菌研究》

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌70例

1990年Hoshina等首行应用聚合酶链反应(PCR)成功检出胃粘膜活检标本内的Hp。我院从今年1995的1月份开始,在短短3个月中对70例胃镜受检者应用PCR检测幽门螺杆菌,并采用目前广泛使用的快速尿素酶试验作了对比,收到满意效果,报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料  

①取材:对70例胃镜受检者(十二指肠球部溃疡31例,胃溃疡2例,胃癌2例,各类胃炎28例,十二指肠球炎7例)均在幽门前区钳取组织1~2块,供尿素酶试验和PCR检测。②药盒深圳爱利国公司提供的1min快速尿素酶试剂检测Hp,在1min~5min内观看结果。厦门长城生物工程有限公司提供的幽门螺杆菌DNA PCR诊断试剂盒,测Hp保守区的DNA片断,扩增产物为456bp,一步法提取模板,直接扩增,无需分装。③样品处理将小块胃粘膜研磨后用生理盐水洗涤。1.5万r/min离心5min,去上清,沉淀用50μl样品处理液混悬,96℃加热10min,1.5万r/min离心5min,取上清8μl加入反应管内混匀,置PCR仪,同时和阳性和阴性对照。④PCR扩增94℃加热300S后进入循环,94℃—30s,55℃—30s,72℃—60s,共循环36次,最后72℃保温300s。取后应产物10μl直接点样于含溴乙锭琼脂糖胶板孔中,电泳80V,10min~25min停止电泳,于紫外检测仪观看结果。

表1 两种方法检测结果比较

n

PCR

尿素酶试验

35

+

+

17

+

-

9

-

-

5

-

弱阳

3

+

弱阳

3

-

+

3 讨论

在众多检测Hp感染方法中,PCR具有高效、特异、敏感、简便、快速和自动化等优点,可检出少至100个细菌的水平,如取材不便还可从胃液和唾液中检测Hp,是我国进行流行病学研究的理想方法;快速尿素酶观察的时间尚需作严格规定,过快可致假阴性,过长又易产生尿素酶污染菌致假阳性,认为本组织果不能排除此类因素。

李延年 刘先贤

武汉市东西湖区人民医院消化内科(430071)

2000/06/27 姬颖 校对

, 百拇医药