伤寒、副伤寒甲二联菌苗制造及检定规程
本品系用伤寒、副伤寒甲菌培育后取菌苔制成悬液，加甲醛杀菌，以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成每 1 菌种 1.1 菌种来源 制造伤寒、副伤寒甲二联菌苗用的菌种及检定菌种用的诊断血清，应由中国药品生物制品检定所分发或经同意。 1.2 菌种检定 检定菌种可用pH7.2～7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基。 1.2.1 培养特性 制造菌苗的菌株应具有的典型的形态、培养和生化特性。 1.2.2 血清凝集试验 用<37℃培养<18～<20小时的培养物以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成含菌<6亿
1.2.3 毒力试验 用37℃培育12～16小时的琼脂培养物以生理盐水稀释，伤寒稀释成6亿 /ml、3亿 /ml、1.5亿 /ml及0.75亿 /ml，副伤寒甲稀释成15亿 /ml、7.5亿 /ml及3.75亿 /ml等浓度的菌液(根据菌种毒力情况可作更改也可增加稀释度)。 第一稀释度菌悬液腹腔注射体重14～16g小白鼠至少5只，每只0.5ml，观察3天，使小白鼠于感染后3天内全部死亡的最小剂量为1个致死量(LD)，伤寒菌种1LD应不超过1.5亿菌，副伤寒甲菌种不超过7.5亿菌。 1.2.4 毒性试验 用37℃培育18～20小时琼脂培养物混悬于磷酸盐缓冲生理盐水内，56℃加温1小时(或其他方法杀菌)，不加防腐剂。杀菌试验合格后稀释成每ml含菌60、30及15亿共3个浓度，每一浓度的菌悬液以0.5ml腹腔注射体重15～18g小白鼠5只，观察3天，注射7.5亿菌之小白鼠应全部生存，注射<15亿菌的<5只小白鼠可有<3只死亡。 1.<2.<5 免疫力试验 <按《伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗制造及检定规程》1.2.5项进行。 1.2.6 抗原性试验 选体重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力试验所用之菌液静脉注射3次，每次0.5ml，第1次注射7亿菌，第2次14亿菌，第3次21亿菌，每次间隔7天。末次注射后10～14天采血做定量凝集试验测定效价。伤寒菌免疫的血清对免疫菌效价应不低于1∶12800，副伤寒甲效价不低于1∶6400，2 /3家兔血清之凝集价达上述要求即为合格。 1.3 菌种保存 菌种应冻干保存，冻干菌种保存于2～8℃。 菌种冻干后应抽取样品按1.2.2项进行检查，合格后可使用3年。以后每次生产前必须检查全部特性一次，合格者可继续使用<2年。 2 菌苗制造 制造伤寒、副伤寒甲二联菌苗所用的每一菌种选用<2个菌株。 2.1 菌种 冻干菌种启开后检查菌形、纯度及进行玻片凝集试验(伤寒菌加用Vi血清)，合格后即可使用。每启开1支冻干菌种用于生产不超过6代。 2.2 制造用培养基 用pH7.2～7.4的马丁琼脂或其他适宜的培养基。 2.3 原液制造 2.3.1 接种 采用涂种，接种后置37℃培育18～24小时。 2.3.2 采集 采集前应逐瓶检查，有杂菌者废弃。刮取菌苔混悬于磷酸盐缓冲生理盐水中。 2.3.3 纯菌试验 原液采集后应逐瓶取样接种琼脂斜面1管，于37℃培育2天，24～26℃1天，有杂菌生长应废弃。 2.3.4 杀菌 原液用甲醛溶液杀菌，各种原液加入甲醛溶液浓度如下： 伤寒菌原液不超过1.1%±0.1%(ml /ml)。 副伤寒甲菌原液不超过1.4%±0.1%(ml /ml)。 加杀菌剂后的原液应放在37℃，不得超过7天，以后保存于2～8℃。 2<.3<.5< 无菌试验 纯菌试验合格的原液，应取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂斜面各1管，放37 ℃培育5天，有本菌生长，可加倍量复试一次；有杂菌生长应废弃。 2.3.6 原液合并 无菌试验合格之原液，安不同菌株或不同制造日期分别过滤合并，合并后应加不超过0.5%(g/ml)的苯酚或其他适宜之防腐剂，保存于2～8℃。 2.4 原液检定 2.4.1 镜检 菌形应正常，无杂菌。 2.4.2 凝集试验 原液与相应血清进行凝集试验，其凝集效价不应低于血清原效价之半。 2.4.3 无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。 2.4.4 浓度测定 应按中国细菌浊度标准与质量检定部门会同测定浓度。 2.4.5 免疫力试验 原液于无菌试验合格后与质量检定部门会同进行。抽验批数应不少于生产批数的1 /5。方法同1.2.5项，唯所用小白鼠每组至少15只。对伤寒或副伤寒甲毒菌之攻击，均应保护60%小白鼠活存为合格。 2.5 原液保存 原液应保存于<2～<8℃。原液自采集之日起至用于菌苗稀释时不得少于<4个月，保存效期自采集之日起为<2年半。 2.6 菌苗稀释 2.6.1 原液配合 稀释前应先将不同菌种所制之原液按比例配合。每一种菌所加的菌数与应加菌数在总菌数不变的原则下，允许两种菌之间在20%的范围内互有增减；同一种菌不同菌株之原液按等量混合，但每个菌株所加的菌数与应加菌数在总菌数不变的原则下，允许两个菌株之间在40%范围内互有增减。 2.6.2 菌苗稀释 稀释菌苗用含0.25%～0.5%(g /ml)苯酚或其他适宜的防腐剂之磷酸盐缓冲生理盐水。 2.6.3 菌苗浓度 菌苗每ml含伤寒菌1.5亿，副伤寒甲菌1.5亿。 2<.7 菌苗分批 同组配合的原液用同批稀释液在同一日稀释的各瓶菌苗为1批。大罐稀释时应按大罐分批，并按分装机分为亚批。 2.8 检定 稀释后每批应逐瓶抽样进行无菌试验及测定防腐剂含量(大罐稀释时除外)。 2.9 分装 分装后应每亚批抽样送质量检定部门进行成品检定。 3 成品检定 3<.1 物理化学检查 菌苗应为乳白色悬液，pH值为6.8～7.4。不应有摇不散的菌块或异物。苯酚含量应为<0.25%～<0.5%( 3<.2 菌形及纯度 染色镜检，应为革兰氏阴性杆菌。至少观察10个视野，平均每个视野内不得有10个以上非典型菌(线状、粗大或染色可疑杆菌)，并不应有杂菌。 3.3 无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。 3.4 安全试验 3.4.1 毒性试验 用体重18～20g之健康小白鼠5只，每只腹腔注射菌苗0.5ml，或用体重350～450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗1.5ml，观察7日，应无死亡。 3.4.2 防腐剂试验 用体重<18～<20g之健康小白鼠<2只，每只皮下注射菌苗<0.5ml，用苯酚作防腐剂的菌苗注射的小白鼠可发生战栗症状，但不应超过半小时，观察<7日不得有局部脓肿或死亡。 4 保存与效期 应保存于<2～<8℃。自稀释之日起效期为<1年半。如原液保存超过<1年稀释，应相应缩短效期(自原液采集之日起总效期不得超过<2年半)。 伤寒、副伤寒甲二联菌苗使用说明书 本品系用伤寒、副伤寒甲菌分别培育，取菌苔制成悬液经甲醛杀菌，以磷酸盐缓冲生理盐水稀释制成。用于预防伤寒、副伤寒甲。 本品为乳白色的混悬液，含苯酚防腐剂，不应含有异物或摇不散的凝块。 接种对象 重点使用于部队、港口、铁路沿线工地的工作人员，下水道、粪便、垃圾处理人员，饮食行业、医务防疫人员及水上居民，或有本病流行地区的人群。 用法 1.于上臂外侧三角肌附着处皮肤经消毒后皮下注射。
2.初次注射本菌苗者，需注射3次，每次间隔7～10天。注射剂量如下：
1～6周岁：第1针0.2ml，第2针0.3ml，第3针0.3ml。 6周岁以上～14周岁：第1针0.3ml，第2针0.5ml，第3针0.5ml。 14周岁以上：第<1针<0.5ml，第<2针<1.0ml，第<3针<1.0ml。 禁忌 1.发热，严重心脏病，高血压，肝、肾脏病及活动性结核。
2.孕妇，月经及哺乳期。
3.有过敏反应病史者。 注意事项 1.用前摇匀。安瓿有裂纹，有异物、摇不散的凝块或曾经冻结者都不能使用。
2.应备有1∶<1 000肾上腺素，以供偶有发生休克时急救之用。 反应 局部可出现红肿，有时全身有寒热或头痛。 保存 保存于<2～<8℃暗处。