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编号:99102
皮上划痕人用炭疽活菌苗制造及检定规程
http://www.100md.com 《生物制品规范》
皮上划痕人用炭疽活菌苗制造及检定规程

皮上划痕人用炭疽活菌苗制造及检定规程

本品系用弱毒炭疽菌株制成的活芽胞悬液。专供预防炭疽病之用。

1         菌种

1.1  菌种来源

为无荚膜,水肿型,具有一定残余毒力,免疫原性较好的A16R菌株。由中国药品生物制品检定所分发或经同意。

1.2 菌种应以冻干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年应全面检定其培养特性、残余毒力、安全性及免疫力,建立种子批。生产前只检查菌形,培养特性及噬菌体特异性。

1.3 菌种检定

1.3.1  培养及生化特性

在牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基上生长,菌落为灰白色,不透明,呈卷发状。为革兰氏阳性大杆菌,呈链状排列。无运动力。能够形成芽胞。液体培养呈絮状发育,在血清培养基上不形成荚膜。能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,不分解水杨苷。

1.3.2  残余毒力试验

用体重350400g健康豚鼠5只,各皮下注射0.5亿/ml的牙包悬液1ml。另用体重1820g小白鼠5只,各皮下注射0.5亿/ml的芽胞悬液0.1ml。观察10天,3只以上动物应出现水肿,可有特异死亡。但脏器涂片只应找到无荚膜的本菌。若全部动物不出现水肿,应重试。重试仍无水肿,菌种不得用于生产。

1.3.3  安全试验

用体重2.02.5kg分健康家兔10只,各皮下注射2.5亿/ml的芽胞悬液1ml,观察10天,在注射部位可出现水肿,全部动物应活存。如有死亡,应用同数动物重试,重试仍有死亡,菌种不得用于生产。

1.3.4  免疫力试验

上述安全试验动物于注射后1820天,用炭疽毒菌攻击,各皮下注射20MLD。同时用同体重的健康家兔3只,各皮下注射1MLD作为对照。观察10天,对照动物死亡3只。试验组保护60%;对照组死亡2只,试验组保护80%为合格。对照动物死亡1只或无死亡,为对照不成立,应重试。

2  制造

制造菌苗的工作室及设备应当专用,不得与其他细菌工作混用。生产中应严格执行无菌操作,非制造菌苗用的其他炭疽菌株不得带到生产工作室内。

2.1  菌种

接种牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基,于34℃培育1820小时,经检查为纯菌者,保存于28℃,在2周内供作生产种子用。

2.2  培养基

用pH7.27.4牛肉消化液琼脂或其他培养基。

2.3  种子

将供制造用菌种,移种于牛肉消化液中。于34℃培育2024小时,检查其生长特性、菌形及纯度,应符合1.3.1项要求。

2.4  接种

经检查合格之种子培养物,接种于牛肉消化液琼脂上,置3334℃培育。成熟的典型芽胞达至80%以上、无杂菌者采集。

2.5  采集

将培养物刮入50%(ml/ml)甘油蒸馏水原液瓶内,振摇使成均匀悬液。每瓶取样按《生物制品无菌试验规程》进行纯菌试验。

2.6  合并

将纯菌试验合格之原液进行合并分批,取样做纯菌试验、浓度测定及活菌计数。

2.6.1  纯菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

2.6.2  浓度测定

按中国细菌浊度标准测定浓度。

2.6.3  活菌计数

0.5亿/ml的菌液1ml,按10倍系列稀释至10-5。取10-5稀释菌液接种5个平皿,每个平皿接种0.1ml。置37℃培育24小时,计算每ml菌苗的芽胞活存率。芽胞活存率在50%以上为合格。

2.7  稀释分装

2.7.1  稀释

用灭菌的50%甘油蒸馏水将原液稀释成每ml含芽胞40亿个,即为皮上划痕用菌苗。同批原液稀释之菌苗为作1批。稀释若干大瓶时,应按瓶号分为亚批。

2.7.2  分装

皮上划痕用菌苗按20人份/ml分装。规格为每安瓿12ml,抽样进行成品检定。

3  成品检定

3.1  物理检查

应为灰白色之均匀悬液,无异物及摇不散之菌块。

3.2  纯菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

3.3  浓度测定

按中国细菌浊度标准测定浓度,应为每ml含菌40亿±20%

3.4  活菌计数

按2.6.3项进行。

3.5  安全试验

每批菌苗用体重2.02.5kg,健康家兔5只,各皮下注射2.5亿/ml的芽胞悬液1ml。观察10天。可有水肿,全部动物应活存。如有死亡,应用加倍量动物重试。如仍有死亡,判为不合格。

3.6  免疫力试验

每5批菌苗或不足5批者,至少抽检1批(可利用安全试验的动物)按1.3.4项进行。

4  保存与效期

应保存于28℃。自检定合格之日起效期为2年。

皮上划痕人用炭疽活菌苗使用说明书

严禁注射!

本品系用弱毒炭疽菌株制成的50%甘油活芽胞悬液。专供预防炭疽病之用。

本品为灰白色均匀悬液,无异物或摇不散的菌块。

接种对象

炭疽病常发地区人群、皮毛加工与制革工人、放牧员以及其他与牧畜密切接触者,应每半年或1年接种1次。

用法

1.用消毒注射器吸取菌苗,在消毒过的上臂外侧上部滴菌苗两滴,相距34cm。划痕时用手将皮肤绷紧,用消毒划痕针在每滴菌苗处作“井”字划前,每条痕长约11.5cm。划破表皮以现出间断小血点为度。

2.用同一划痕针反复涂压,使菌苗充分进入划痕处。接种后局部应裸露至少510分钟,然后用消毒干棉球擦净。

3.接种后24时划痕部位无任何反应者应重新接种。

禁忌

患严重疾病、免疫缺陷症、严重皮肤病患者,用免疫抑制剂治疗者,有严重过敏史者不予接种。

注射事项

1.本品仅供皮上划痕用,严禁注射。

2.凡制品内有摇不散的菌块或安瓿有裂纹、过失效期等均不能使用。

3.用前应将菌苗充分摇匀。消毒皮肤只用酒精,不用碘酒。

4.菌苗安瓿启开后,应于3小时内用完。

5.剩余菌苗,空安瓿及用具,需用3%碱水煮沸消毒30分钟。

保存

应保存于28℃。

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