吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程
<<本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸附制成。用于预防破伤风。
<1 <毒素制造
<<制造破伤风毒素应在隔离的具有专用消毒设备的实验室内进行。实验室的墙面、地面及实验台应使用便于消毒的材料。工作人员应经过培训并接受破伤风类毒素全程免疫，以后每10年进行一次加强免疫，凡发生外伤未完全治愈前不能参加工作。
<1.1 菌种
<1.1.1 应选用中国药品生物制品检定所分发或同意的产毒效价高、免疫力强的破伤风菌株，必要时可对菌种进行筛选。
<1.1.2 菌种应定期作全面性状检查(如细菌形态、纯菌试验、糖发酵反应、产毒试验及特异性中和试验等)，并有完整的传代、检定记录。
<1<.1<.3 菌种应用冻干或其他适宜方法保存在2～8℃。
<1.2 培养基
<<制造种子管及毒素培养基所用的酪蛋白、黄豆蛋白、牛肉等蛋白质应适当加深水解。其他原材料应尽量减少对人体产生过敏反应的物质，不得含有可引起人体毒性反应的物质。培养基原材料应保证质量，所用化学原料应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》。
<1.3 毒素
<1.3.1 毒素制造过程应严格控制杂菌污染，经显微镜检查或纯菌试验发现污染者应废弃。
<1.3.2 毒素须经除菌过滤后方可进行下步制造程序，亦可杀菌后进行精制。
<1.3.3 毒素Lf测定
<<用生理盐水将 <1.3.4 用于生产的毒素不得低于<40Lf/ml<。 2 <类毒素制造 2<.1 <毒素或精制毒素的脱毒 <毒素或精制毒素中加入适量甲醛溶液，置适宜温度进行脱毒。所用甲醛溶液等级应不低于化学纯。 <2.2 脱毒试验 每瓶取样，用体重300～400g豚鼠1只，皮下注射10ml。精制毒素脱毒者可事先用生理盐水稀释成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天进行观察，动物不应有破伤风症状，到期每只动物体重不得较注射前减轻且健存者为合格，发生破伤风症状者应继续脱毒，<体重减轻者应予重试。 2<.3 脱毒试验合格的类毒素应做Lf测定。类毒素应为黄色或棕黄色透明液体。 <2.4 类毒素之保存时间，自脱毒合格之日起保存于<2<～<8<℃不得超过<3<年。 3 <精制 3<.1 <毒素或类毒素可用等电点沉淀、超滤、硫酸铵盐析等方法或其他适宜方法精制。 <3.2 用于精制的类毒素应透明，无肉眼可见之染菌。 <3.3 精制时所用化学药品等级应不低于化学纯或符合《中国药典》规定，蒸馏水应新鲜。 <3.4 类毒素精制后应加0.01%(g/ml)硫柳汞防腐并尽快除菌过滤。 <3.5 用同一菌种、培养基处方、精制方法制造的类毒素在同一容器内混合均匀后除菌过滤者为<1<批。 4 精制<类<毒素的检定和保存 4<.1 pH值应为6.6～7.4。 <4.2 无菌试验 <按《生物制品无菌试验规程》进行。无菌试验不合格时可重新除菌过滤，如制品有肉眼可见之染菌应废弃。 <4.3 效价测定 每瓶取样进行Lf测定。测定方法见1.3.3项。 <4.4 纯度 精制类毒素的纯度应在1500Lf/mgPN以上。 <4.5 安全试验 <每亚批取样，等量混合，用生理盐水稀释为<250Lf/ml<，用体重<300<～<400g<豚鼠<4<只，每只皮下注射<2ml<。于注射后第<7<、<14<、<21<天进行观察并称体重。动物不应有破伤风症状，局部无化脓、坏死，到期每只动物体重比注射前增加者为合格。 <4.6 保存与效期 保存于2～8℃。类毒素精制者自精制之日起，先精制后脱毒制品从脱毒试验<合格之日起，效期为<3<年半。 5 <吸附剂配制 5<.1 <吸附剂配制过程所用的器具应清洁、蒸馏水应新鲜，各种药品等级应不低于化学纯。 <5.2 配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝加氢氧化钠法，用氨水配制者需透析除氨后使用。 <5.3 配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异物。 5<.4 <氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。 <6 吸附精制类毒素的制造 <6.1 吸附制品每ml应含精制破伤风类毒素7～10Lf。 <6.2 氢氧化铝用量不得超过3mg/ml。 <6.3 吸附制品应加0.005%～0.01%(g/ml)硫柳汞为防腐剂。 <6.4 同批精制类毒素用同批吸附剂吸附者为<1<批，用大罐吸附时每罐为<1<批，但所用精制破伤风类毒素、氢氧化铝各不得超过<3<批。 7 成<品<检定 7<.1 <理化性状 <7.1.1 吸附精制破伤风类毒素振摇后为乳白色均匀悬液，无摇不散的凝块及异物。 7<.1<.2 pH值应为6.0～7.0。 <7.1.3 氢氧化铝含量不应超过3mg/ml。 <7.1.4 氯化钠含量应为0.75%～0.9%(g/ml)。 <7.1.5 硫柳汞含量不应超过0.01%(g/ml)。 <7.1.6 游离甲醛含量不应超过0.02%(g/ml)。 <7.2 无菌试验 <按《生物制品无菌试验规程》进行。 <7.3 安全试验 每亚批取样等量混合，用体重300～400g，豚鼠4只，每只注射2.5ml于腹部皮下，注射后于第7、14、21天各观察1次并称体重，动物不应有破伤风症状，注射部位无化脓、坏死，到期体重比注射前增加者<为合格。 7<.4 <效力试验 每亚批取样等量混合，用体重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml，第30天采心血，分离血清，等量混合，测定破伤风抗毒素单位，至少应含1IU/ml。 <抗毒素单位测定方法： 用pH7.0～7.4之硼酸硼砂缓冲生理盐水，将被检血清做系列稀释，各取1ml放入一列试管中，然后各加入5个L+/100量破伤风标准毒素1ml(由0.05IU/ml破伤风标准抗毒素标定)，盖上胶塞，混合均匀，放37℃结合45分钟，每个混合液各用体重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml。 同时设对照组，即取0.05IU/ml的标准抗毒素1ml，加入5个L+/100的标准毒素1ml，放37℃结合45分钟。用体重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml，每日观察动物发病情况并记录。以72～120小时动物全部死亡为判定标准。 <以被检样品与对照组动物死亡数相同之最高稀释度判定之。 <亦可按 <7.5 稳定性试验 生产工艺有改变时应做稳定性试验。抽3批不同批号的精制类毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期结束之日，进行效力检定，应符合规程要求。 <7.6 鉴别试验 抽取样品加枸橼酸钠将吸附剂溶解后作絮状试验，或将样品调pH至9.0作凝胶<免疫沉淀试验，以出现絮状反应或免疫沉淀反应者为合格。 8 <保存与效期 <保存于<2<～<8<℃。自吸附之日起效期为<3<年半。 <附录< WHO<推荐的破伤风类毒素效价测定方法(毒素攻击法) 1 <免<疫及攻击 <用生理盐水将吸附破伤风类毒素标准品和待检样品以<2<倍稀释法稀释成<3<～<5<个稀释度(中间的稀释度必须在攻毒后能保护约半数动物)。每一稀释度样品免疫体重<14<～<16g<小白鼠<14<只(或<250<～<350g<豚鼠至少<10<只)。另外<10<只小白鼠不注射作为对照(另外<5<只豚鼠不注射作为对照)。免疫<4<周，每只免疫小白鼠攻击破伤风毒素<50LD50(<免疫豚鼠攻击<100LD50)<，皮下注射<0.5ml<。对照组健康小白鼠注射<25<倍稀释的上述毒素(对照组豚鼠注射<100<倍稀释的上述毒素)，每只皮下注射<0.5ml<，攻击后观察<5<日，每日记录结果。 2 试<验<成立应具备的条件 <(<1<)检品的最低稀释度能保护半数以上动物。 (2)检品的最高稀释度能保护半数以下动物。 (3)对照组动物应部分死亡而不全部死亡。 <(<4<)检品和标准品的剂量反应曲线在平行性及直线性上没有太大的偏差。 3 <结果计算 <用平行线分析法进行结果计算。 4 <结果判定 <待检样品的效价每个剂量应不少于<40IU<。如<95%<可信限大于<50%<～<200%<则<95%<可信限的低限效价应大于<40IU/1<个人用剂量。 <吸附精制破伤风类毒素使用说明书 <本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸附制成。用于预防破伤风。 <本品为乳白色均匀混悬液，含防腐剂硫柳汞，长时间放置后吸附剂下沉，溶液上层应澄明无色，但经振摇后能均匀分散。 <接种对象 <主要是发生创伤机会较多的人群，孕妇接种本品可预防产妇及新生儿破伤风。 <用法 1<.<上臂三角肌肌内注射。 <2.剂量 (1)无破伤风类毒素免疫史者应按附表方法进行全程免疫。 (2)经全程免疫和加强免疫之人员，自最后1次接种3年以内受伤时，不需注射本品，超过3年者应用本品做1次加强注射，严重污染的创伤或受伤前未经全程免疫者，除注射本品外，可酌情在另一部位注射破伤风抗毒素。 (3)用含破伤风类毒素的混合制剂做过全部免疫者，以后每10年用本品做1针<加强注射即可。 < 针 次 < 剂量(ml<) < 全程免疫 < 第1<年 < 第2<年 < 第1<针(间隔4<～8<周) <第2<针 <注射1<针 <1.5 <1.5 <0<.5 < 加强免疫 < 以后一般每10<年注射1<针，如遇特殊情况也可5<年加强1<针 <0<.5 <孕妇可在妊娠第<4<个月注射第<1<针，<6<～<7<个月时注射第<2<针，每次注射<0.5ml<。 <禁忌 <患严重疾病、发热或有过敏史者及注射破伤风类毒素后发生神经系统反应者禁用。 <反应 <注射本品后局部可有红肿、疼痛、发痒，或有低热、疲倦、头痛等，一般不需处理即行消退。 <注意事项 1<.<使用时应充分摇匀，如出现摇不散之凝块、异物，安瓿有裂纹，制品曾经冻结，标签不清及过期失效者均不可使用。 <2.注射后局部可能有硬结，1～2个月即可吸收，注射第2针时应换另侧部位。 <3.应备1∶100<0<肾上腺素，供偶有发生休克时急救用。 <保存 <保存于<2<～<8<℃暗处，不可冻结。
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