新生物制品审批办法4-3
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4.2.2细胞培养法 可以采用发酵罐培养，亦可用细胞培养瓶培养收采上清液制备单克隆抗体。
4.2.2.1种子细胞 来源于生产细胞库。
4.2.2.2培养基 用无牛血清或低牛血清培养基，不能用β-内酰胺类抗生素。
4.2.2.3抗体收集 可一次性收集，也可采用连续收集法。每一支安瓿种子细胞扩大培养后收集的上清为一个批号4.3粗制抗体检测 无论是小鼠腹水法还是细胞培养法制备的单克隆抗体，都需要进行如下检定。
4.3.1无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。
4.3.2支原体检查 按1.4.4项进行。
4.3.3鼠源病毒检查 按1.4.3项进行。
4.3.4效价测定 用ELISA法或其他特异性检测方法测定。合格的用于抗体纯化。
4.4抗体纯化 可采用盐析法、分子筛层析、离子交换等适宜的方法。
4.4.1尽可能选用一些不引起免疫球蛋白聚合、变性等的纯化方法及条件。
4.4.2应验证所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、病毒及用于生产腹水抗体的刺激物(如降植烷、液体石蜡)。
4.4.3连续生产(至少3批)的各批产品必须符合质检要求，批间具有良好的重复性。
4.5纯化后处理 4.5.1灭活 必要时56℃水浴灭活30分钟，离心收集上清。
4.5.2合并 不同亚批的合格制品合并后应在2～8℃放置一个月以上，去除部分不稳定蛋白。
4.5.3除菌分装 将经灭活的单抗用0.22μm滤膜过滤，过滤后进行分装。
5检定5.1半成品5.1.1活性检测 用ELISA法或其他特异性检测方法测定。抗体活性应≥参比品。
5.1.2纯度测定5.1.2.1电泳法 还原和非还原条件SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定抗体纯度。扫描后计算出免疫球蛋白含量，含量应达到95%以上，二聚体≤10%。
5.1.2.2 HPLC法 纯度应≥95%。
5.1.3多聚体测定 用FPLC或HPLC法，用适宜的分子筛层析，多聚体应≤10%。
5.1.4蛋白质含量测定 用Lowry法或其他适宜的方法测定。
5.1.5DNA含量测定 用DNA分子杂交法。提取待检制品中的DNA，用骨髓瘤细胞制备的DNA探针与待检样品进行杂交。以不同含量的骨髓瘤细胞DNA作为工作标准，每一剂量残余DNA含量不应超过 100pg。
5.1.6交叉反应性测定 用免疫组织化学及细胞化学方法检查。应提供3批单抗与人体组织器官的交叉反应性材料。结果不应与人体组织器官发生交叉反应。如肿瘤相关抗原单抗，应进行各种肿瘤组织的 交叉反应测定。, http://www.100md.com
4.2.2.1种子细胞 来源于生产细胞库。
4.2.2.2培养基 用无牛血清或低牛血清培养基，不能用β-内酰胺类抗生素。
4.2.2.3抗体收集 可一次性收集，也可采用连续收集法。每一支安瓿种子细胞扩大培养后收集的上清为一个批号4.3粗制抗体检测 无论是小鼠腹水法还是细胞培养法制备的单克隆抗体，都需要进行如下检定。
4.3.1无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。
4.3.2支原体检查 按1.4.4项进行。
4.3.3鼠源病毒检查 按1.4.3项进行。
4.3.4效价测定 用ELISA法或其他特异性检测方法测定。合格的用于抗体纯化。
4.4抗体纯化 可采用盐析法、分子筛层析、离子交换等适宜的方法。
4.4.1尽可能选用一些不引起免疫球蛋白聚合、变性等的纯化方法及条件。
4.4.2应验证所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、病毒及用于生产腹水抗体的刺激物(如降植烷、液体石蜡)。
4.4.3连续生产(至少3批)的各批产品必须符合质检要求，批间具有良好的重复性。
4.5纯化后处理 4.5.1灭活 必要时56℃水浴灭活30分钟，离心收集上清。
4.5.2合并 不同亚批的合格制品合并后应在2～8℃放置一个月以上，去除部分不稳定蛋白。
4.5.3除菌分装 将经灭活的单抗用0.22μm滤膜过滤，过滤后进行分装。
5检定5.1半成品5.1.1活性检测 用ELISA法或其他特异性检测方法测定。抗体活性应≥参比品。
5.1.2纯度测定5.1.2.1电泳法 还原和非还原条件SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定抗体纯度。扫描后计算出免疫球蛋白含量，含量应达到95%以上，二聚体≤10%。
5.1.2.2 HPLC法 纯度应≥95%。
5.1.3多聚体测定 用FPLC或HPLC法，用适宜的分子筛层析，多聚体应≤10%。
5.1.4蛋白质含量测定 用Lowry法或其他适宜的方法测定。
5.1.5DNA含量测定 用DNA分子杂交法。提取待检制品中的DNA，用骨髓瘤细胞制备的DNA探针与待检样品进行杂交。以不同含量的骨髓瘤细胞DNA作为工作标准，每一剂量残余DNA含量不应超过 100pg。
5.1.6交叉反应性测定 用免疫组织化学及细胞化学方法检查。应提供3批单抗与人体组织器官的交叉反应性材料。结果不应与人体组织器官发生交叉反应。如肿瘤相关抗原单抗，应进行各种肿瘤组织的 交叉反应测定。, http://www.100md.com
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