结核病有关新进展.ppt
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参见附件(109kb)。
结核病有关新进展
西南医院呼吸科 胡建林
结核病一直是发展中国家较严重的传染病，1985年以来艾滋病的流行、结核感染者的涌入等原因便美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势，尤其是结核病耐药问题使结核病治疗更是雪上加霜。目前全世界有结核病人约2000万，每
年新增结核病人800～1000万，每年死亡人数约300万;我国的结核病疫情也相当严重，2000年第四次全国结核病流行病学调查结果表明我国有结核病人500万，每年死亡人数约23.8万，结核病死亡在我国各种死亡原因中居第十一位，在传染病中
居第一位。1993年世界卫生组织(WHO)采用特别步骤宣布结核病全球告急。面对这种严峻的形势，结核病的预防和治疗已引起国内外学者的高度重视。
简述：
结核病DNA疫苗
结核病诊断分型
诊断方法进展
抗结核药物进展
结核病耐药问题
结核病DNA疫苗
目前用于结核病预防的疫苗是卡介苗(BCG)，它自1921年以来就一直被用于人类结核病的预防，但经过半个多世纪的临床对照试验研究，BCG对肺结核的免疫保护力是0～80%，差异很大，1995年WHO总结出BCG不是预防肺结核的有效疫苗。
此外，对于免疫功能缺陷的病人，BCG接种有可能导致全身播散。因此，有必要研制新疫苗。
1990年Wolff等在一次基因治疗的实验研究中意外地发现不加任何处理的基因也可在骨酪肌细胞中表达蛋白至少2个月。1992年Tang等报道人生长激素编码基因的重组质粒接种小鼠后，可诱发机体产生抗人生长激素抗体。1993年Ulmer等首先
报道用甲型流感病毒基因免疫小鼠，不仅可表达蛋白，刺激机体产生特异性免疫应答，还可保护小鼠抵抗异株流感病毒的攻击。至此，产生了核酸疫苗(Nucleic Acid Vaccine)或基因疫苗(Genetic Vaccine )、基因免疫(Genetic immunization)、核酸免疫
(Nucleic Acid Immuniztion)的全新概念，开创了免疫学和疫苗学的新领域。
核酸疫苗(Nucleic Acid Immuniztion)包括DNA疫苗和RNA疫苗，由能引起机体保护性免疫反应的病原体抗原的编码基因和真核表达载体构建而成，它被注入机体后，通过宿主细胞的转录系统表达蛋白抗原，诱导宿主产生细胞免疫应答和
体液免疫应答，从而达到预防和治疗疾病的目的。由于RNA疫苗不稳定，在体内存在时间短，表达短暂，生产、贮存、运输比DNA疫苗要求高, 因此，目前研究最多的是DNA疫苗，其不需要任何化学载体，故又称为裸DNA疫苗(Naked DNA Vaccine)。几个流感、艾滋病、乙型肝炎、疟疾、结肠癌、T细胞淋巴瘤等DNA疫苗在美国和欧洲已进入Ⅰ或Ⅱ期临床试验。1996年以来WHO将结核病核酸疫苗研究列为资助的项目之一。
一、结核病DNA疫苗的研究现状
DNA疫苗可诱导全面的免疫反应，尤其是特异性CTL可识别、杀伤、破坏被感染的细胞及清除细胞内的病原体，这对于消除寄生于巨噬细胞内的结核分支杆菌非常有意义。结核病DNA疫苗的研究正日益深入。
(一)结核病预防性DNA疫苗
迄今大约有以下结核病预防性DNA疫苗在动物实验中获得了较理想的效果。
1.Ag85复合物编码基因； 2.Pst S编码基因；
3.ESAT6编码基因和MPT64编码基因；
4.65kDa热休克蛋白(hsp60)编码基因； 5.Hsp70编码基因；
6.36kDa编码基因； 7.19kDa或ahpC编码基因; 8.22kDa编码基因;
9.HsplO编码基因;
(二)结核病治疗性DNA疫苗
目前用于结核病治疗的免疫调节剂主要有二类:一类是非特异性的如IFN-Y、IL-2、IL-l2等细胞因子;另一类是特异性的母牛分支杆菌菌苗(商品名维卡菌苗)，是由母牛分支杆菌经高温灭活后冻千制成的。由于前者半衰期短，费用高;而后者
是死菌只能诱导体液免疫和Thl型细胞应答;不能诱导特异性CTL应答。DNA疫苗在细胞内生成内生性抗原，不仅能诱导体液免疫和Thl型细胞应答，还能诱导特异性CTL应答。因此，结核病DNA疫苗不仅有可能成为结核病预防性疫苗，还可能成为治疗性疫苗。
1999年Lowrie等首次将hsp6O、hsp7O和ESAT6质粒DNA疫苗用于小鼠结核病模型的治疗，以BCG质粒载体和生理盐水为对照，hsp6O和hsp7ODNA疫苗诱导产生的IFN-7水平显著高于BCG、质粒载体和生理盐水对照组，并使免疫小鼠脾、肺菌落计数显
著低于其它各组;但ESAT-6DNA疫苗的治疗效果不是很明显。hsp6ODNA疫苗还可使结核病化疗后体内残余的菌数显著减少。该研究结果证明了某些结核病DNA疫苗作为特异性免疫调节剂的可能性。但IL-l2的表达质粒与hsp60DNA疫苗联合注射未
能观察到协同效应，其肺和脾菌落计数均比它们单独免疫的高。
目前关于结核病治疗性DNA疫苗的研究报道还不多，由于采用的小鼠模型不同，而且小鼠对结核分支杆菌不敏感，因此，各研究结果也不尽相同。
(三)制备抗血清
DNA疫苗免疫后可激起机体产生体液免疫应答，产生高效价的特异性多克隆抗体，从而为抗血清的制备开辟了一条简便、快速的新途径。
(四)DNA疫苗可能的免疫学机理
DNA疫苗的免疫学机理尚不十分清楚。结核病DNA疫苗被导人宿主骨酪肌细胞内，并在细胞内表达结核菌蛋白抗原，加工后形成多肽抗原，与宿主细胞MHC I类和MHC Ⅱ类分子结合，被呈递给宿主的免疫识别系统 ......
结核病有关新进展
西南医院呼吸科 胡建林
结核病一直是发展中国家较严重的传染病，1985年以来艾滋病的流行、结核感染者的涌入等原因便美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势，尤其是结核病耐药问题使结核病治疗更是雪上加霜。目前全世界有结核病人约2000万，每
年新增结核病人800～1000万，每年死亡人数约300万;我国的结核病疫情也相当严重，2000年第四次全国结核病流行病学调查结果表明我国有结核病人500万，每年死亡人数约23.8万，结核病死亡在我国各种死亡原因中居第十一位，在传染病中
居第一位。1993年世界卫生组织(WHO)采用特别步骤宣布结核病全球告急。面对这种严峻的形势，结核病的预防和治疗已引起国内外学者的高度重视。
简述：
结核病DNA疫苗
结核病诊断分型
诊断方法进展
抗结核药物进展
结核病耐药问题
结核病DNA疫苗
目前用于结核病预防的疫苗是卡介苗(BCG)，它自1921年以来就一直被用于人类结核病的预防，但经过半个多世纪的临床对照试验研究，BCG对肺结核的免疫保护力是0～80%，差异很大，1995年WHO总结出BCG不是预防肺结核的有效疫苗。
此外，对于免疫功能缺陷的病人，BCG接种有可能导致全身播散。因此，有必要研制新疫苗。
1990年Wolff等在一次基因治疗的实验研究中意外地发现不加任何处理的基因也可在骨酪肌细胞中表达蛋白至少2个月。1992年Tang等报道人生长激素编码基因的重组质粒接种小鼠后，可诱发机体产生抗人生长激素抗体。1993年Ulmer等首先
报道用甲型流感病毒基因免疫小鼠，不仅可表达蛋白，刺激机体产生特异性免疫应答，还可保护小鼠抵抗异株流感病毒的攻击。至此，产生了核酸疫苗(Nucleic Acid Vaccine)或基因疫苗(Genetic Vaccine )、基因免疫(Genetic immunization)、核酸免疫
(Nucleic Acid Immuniztion)的全新概念，开创了免疫学和疫苗学的新领域。
核酸疫苗(Nucleic Acid Immuniztion)包括DNA疫苗和RNA疫苗，由能引起机体保护性免疫反应的病原体抗原的编码基因和真核表达载体构建而成，它被注入机体后，通过宿主细胞的转录系统表达蛋白抗原，诱导宿主产生细胞免疫应答和
体液免疫应答，从而达到预防和治疗疾病的目的。由于RNA疫苗不稳定，在体内存在时间短，表达短暂，生产、贮存、运输比DNA疫苗要求高, 因此，目前研究最多的是DNA疫苗，其不需要任何化学载体，故又称为裸DNA疫苗(Naked DNA Vaccine)。几个流感、艾滋病、乙型肝炎、疟疾、结肠癌、T细胞淋巴瘤等DNA疫苗在美国和欧洲已进入Ⅰ或Ⅱ期临床试验。1996年以来WHO将结核病核酸疫苗研究列为资助的项目之一。
一、结核病DNA疫苗的研究现状
DNA疫苗可诱导全面的免疫反应，尤其是特异性CTL可识别、杀伤、破坏被感染的细胞及清除细胞内的病原体，这对于消除寄生于巨噬细胞内的结核分支杆菌非常有意义。结核病DNA疫苗的研究正日益深入。
(一)结核病预防性DNA疫苗
迄今大约有以下结核病预防性DNA疫苗在动物实验中获得了较理想的效果。
1.Ag85复合物编码基因； 2.Pst S编码基因；
3.ESAT6编码基因和MPT64编码基因；
4.65kDa热休克蛋白(hsp60)编码基因； 5.Hsp70编码基因；
6.36kDa编码基因； 7.19kDa或ahpC编码基因; 8.22kDa编码基因;
9.HsplO编码基因;
(二)结核病治疗性DNA疫苗
目前用于结核病治疗的免疫调节剂主要有二类:一类是非特异性的如IFN-Y、IL-2、IL-l2等细胞因子;另一类是特异性的母牛分支杆菌菌苗(商品名维卡菌苗)，是由母牛分支杆菌经高温灭活后冻千制成的。由于前者半衰期短，费用高;而后者
是死菌只能诱导体液免疫和Thl型细胞应答;不能诱导特异性CTL应答。DNA疫苗在细胞内生成内生性抗原，不仅能诱导体液免疫和Thl型细胞应答，还能诱导特异性CTL应答。因此，结核病DNA疫苗不仅有可能成为结核病预防性疫苗，还可能成为治疗性疫苗。
1999年Lowrie等首次将hsp6O、hsp7O和ESAT6质粒DNA疫苗用于小鼠结核病模型的治疗，以BCG质粒载体和生理盐水为对照，hsp6O和hsp7ODNA疫苗诱导产生的IFN-7水平显著高于BCG、质粒载体和生理盐水对照组，并使免疫小鼠脾、肺菌落计数显
著低于其它各组;但ESAT-6DNA疫苗的治疗效果不是很明显。hsp6ODNA疫苗还可使结核病化疗后体内残余的菌数显著减少。该研究结果证明了某些结核病DNA疫苗作为特异性免疫调节剂的可能性。但IL-l2的表达质粒与hsp60DNA疫苗联合注射未
能观察到协同效应，其肺和脾菌落计数均比它们单独免疫的高。
目前关于结核病治疗性DNA疫苗的研究报道还不多，由于采用的小鼠模型不同，而且小鼠对结核分支杆菌不敏感，因此，各研究结果也不尽相同。
(三)制备抗血清
DNA疫苗免疫后可激起机体产生体液免疫应答，产生高效价的特异性多克隆抗体，从而为抗血清的制备开辟了一条简便、快速的新途径。
(四)DNA疫苗可能的免疫学机理
DNA疫苗的免疫学机理尚不十分清楚。结核病DNA疫苗被导人宿主骨酪肌细胞内，并在细胞内表达结核菌蛋白抗原，加工后形成多肽抗原，与宿主细胞MHC I类和MHC Ⅱ类分子结合，被呈递给宿主的免疫识别系统 ......
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