血清高密度和低密度脂蛋白胆固醇测定标准化

    董 军

    卫生部北京老年医学研究所脂蛋白异常与冠心病

    动脉粥样硬化性心血管病(CVD)是全球范围内危害人类

    健康最为严重的疾病

    一直是西方发达国家人口的第一位死因

    已逐渐成为我国城乡居民的第一位死因(死亡人数的近40%)

    HDL-C降低和LDL-C升高是CVD重要危险因素

    降低LDL-C减少CVD事件的发生和死亡

    HDL-C降低1mg/dL，CVD危险增加2-3%

    鉴定和干预血脂异常是心血管病防治的重要手段

    美国胆固醇教育计划(NCEP)，NCEP ATP I~III

    我国血脂异常防治建议(1997, 2007)中国成人血脂异常防治指南(2007)

    分层 血脂项目mmol/L (mg/dL)

    LDL-C HDL-C

    合适范围 < 3.37 (130) ≥1.04 (40)

    边缘升高 3.37- 4.12 (130-159)

    升高 ≥4.14 (160) ≥1.55(60)

    降低 < 1.04 (40)血脂异常开始调脂治疗的LDL-C值及目标值，mg/dL

    危险等级 TLC开始 药物治疗开始 治疗目标值

    10年危险<5% LDL-C≥160 LDL-C≥190 LDL-C<160

    10年危险5-10% LDL-C≥130 LDL-C≥160 LDL-C<130

    CHD或等危症 LDL-C≥100 LDL-C≥100 LDL-C<100

    极高危 LDL-C≥80 LDL-C≥80 LDL-C<80脂蛋白测定结果准确，有横向和纵向可比性

    ? 心血管病防治工作的需要

    ? 流行病学、临床、营养学研究的基本要求NCEP血脂分析质量指标

    偏差 不精密度(CV) 总误差

    HDL-C ≤ 5% ≤4% ≤ 13%

    LDL-C ≤ 4% ≤ 4% ≤ 12%

    [总误差 = 偏差 + 1.96 CV]HDL-C, LDL-C传统测定方法

    ? 超速离心法

    ? 电泳法

    ? 色谱法

    ? 化学沉淀法HDL-C的常规测定方法

    ?第一代化学沉淀法(60’ s-90’ s)

    Heparin-Mn2 (HM) , Dextran sulfate-Mg2 (DS)

    Phosphotungstate-Mg2 (PTA) , Polyethylene glycol (PG)

    ?第二代化学沉淀法(90’ s)

    Magnetic with dextran sulfate-Mg21 (MAG)

    ?第三代匀相法(直接法)HDL-C常规测定─ 匀相法

    ? PEG/抗体包裹法(IRC)

    ? PEG修饰的酶法 (PEGME)

    ?合成多聚物/表面活性剂法 (SPD)

    ?抗体免疫分离法 (AB)

    ?过氧化氢酶法 (CAT)

    标本用量少，不需沉淀离心等处理，可用于自动生化分析仪测定

    精密度、特异性优于沉淀法，基本不受内源性物质的干扰。LDL-C常规方法

    Friedeward公式(1972年~ )

    假设胆固醇分布在三种主要脂蛋白中，而VLDL携带循环中的

    绝大部分TG，所以VLDL-C可以根据测定的TG进行估算

    LDL-C = TC - HDL-C - TG/5 (mg/dL)

    LDL-C = TC - HDL-C - TG/2.2 (mmol/L)

    成本低、简便，但不能用于TG>400mg/dL的样本

    可靠性受TC、TG和HDL-C三项指标测定质量的影响LDL-C常规测定方法

    ?第一代化学沉淀法：肝素法、硫酸聚乙烯法、硫酸葡聚糖法

    (沉淀LDL，测定non-LDL-C，计算LDL-C)

    ?第二代化学沉淀法：免疫学分离法、肝素磁力分离法

    ?第三代匀相法(直接法)：

    可溶性反应法 (Solubilization, SOL)

    表面活性剂法 (Surfactant, SUR)

    保护性试剂法(Protecting reagent, PRO)

    过氧化氢酶法(Catalase, CAT)

    Calixarene (CAL)

    有可接受的特异性，不受主要的内源性物质的干扰。

    但有些方法还未经足够的特异性、准确性论证。? 采用商品试剂盒进行测定

    ? 使用非常方便，适合自动化，大大提高了检验效率

    ? 试剂盒多样化：方法(原理)、厂家、批号等

    ? 某些方法在追求和实现简便性的同时，在一定程度上牺牲了方法特异性和准确性

    临床脂蛋白测定的特点1997-2000一项临床研究中血脂和脂蛋白测定质量

    ?CHD二级预防研究

    ?全国65参加单位

    ?1997-2000, 8次血脂测定调查

    ?冰冻血清, 3水平

    ?每种血清独立测定3次，每次重复测定3份

    ?共约~1500次测定,计算CV 和偏差HDLC , ~30% Bias<5%

    1997-2000一项临床研究中HDL-C测定质量北京临床实验室调查2006 (HDL-C)

    4/7 Bias>5%

    Interlab CV 15%实验室数 均值,mmol/L 平均 bias%

    所有方法 317 1.92 -19.3%

    方法 1 2 1.85 -22.3%

    方法 2 1 1.97 3.4%

    方法 3 1 1.95 2.4%

    方法 4 6 2.05 -13.9%

    方法 5 5 1.85 -22.3%

    方法 6 205 1.93 -18.9%

    方法 7 1 1.67 -12.3%

    方法 8 4 1.64 -31.1%

    方法 9 6 1.92 -19.3%

    方法 10 7 1.77 -25.6%

    方法 11 14 1.99 -16.4%

    方法 12 35 1.75 -26.5%

    方法 13 2 2.38 0.0%

    方法 14 10 2.06 -13.4%

    方法 15 2 1.79 -24.8%

    方法 16 3 2.08 -12.6%

    其它 6 1.72 -27.7%

    中位数 1.92

    均值 1.905

    SD 0.183

    CV(%) 9.62%

    2007年，全国室间质评 HDL-C

    14/17, Bias>5%

    实验室间CV=9.62%实验室数 均值,mmol/L 平均 bias%

    所有方法 289 4.35 0.8%

    方法 1 3 4.52 4.7%

    方法 2 1 4.00 -7.3%

    方法 3 1 4.16 -3.6%

    方法 4 1 4.57 5.9%

    方法 5 1 3.72 -13.8%

    方法 6 145 4.42 2.4%

    方法 7 20 3.23 -25.2%

    方法 8 3 4.15 -3.9%

    方法 9 6 4.56 5.6%

    方法 10 11 4.12 -4.6%

    方法 11 5 4.46 3.3%

    方法 12 29 4.35 0.8%

    方法 13 13 4.63 7.3%

    方法 14 7 4.45 3.1%

    方法 15 8 4.11 -4.8%

    方法 16 1 4.66 8.0%

    方法 17 14 4.18 -3.2%

    方法 18 1 4.81 11.4%

    方法 19 3 4.67 8.2%

    方法 20 2 4.52 4.7%

    其它 10 4.36 1.0%

    2007年 ......