血细胞形态学.ppt
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血液一般检查
血细胞形态学的检查方法：
1.光镜(瑞氏-姬姆萨染色)是血细胞形态学最基本和最常用的检查方法，被看成是血细胞形态学的基本内容，最广泛应用于临床实验室。
2.细胞化学染色：
是细胞学和化学两者结合的形态学方法，其目的和特点是细胞保持完整组织结构。在细胞个体组织的单位上，显示化学结构成分的定性或半定量。在血液学中应用的意义：
(1)研究血细胞化学成分及代谢功能；
(2)协助血液并病的诊断，尤其是急性白血病分型及鉴别诊断；
(3)观察血液病的疗效几判断预后；
(4)探索血液病的发病机制。
瑞氏染色法(Wrights Stain)：
细胞染色机制：染色是将细胞经染色剂的物理和化学作用，使其清楚显示细胞各个组成成分，有利辨识细胞形态。
染色可分两个步骤：
1.染料受相应物质吸附而附着于物质表面；
2.固着作用，即染色粒子进入细胞内起化学反应(染色透过细胞膜的学说很多，尚无定论)，与相应的物质形成形成溶解度很低的盐固着于细胞内而显色。染色剂皆有选择作用，其染色不是将细胞全部一齐着色，而只是将其中一部分染色，多余的被冲洗掉。目前多以吸附学说(电力吸附、机械吸附、化学吸附)来解释。
基本概念
1.瑞氏染料是碱性染料美蓝和酸性染料伊红合称伊红美蓝染料即瑞氏染料。
伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸色，故称伊红为酸性染料。美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。
2.用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用
(1)甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲醇
ME(瑞氏染料)──→M+ + E-
在配置的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染成蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
(2)甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料的吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
形态学也有其相对的独立性，这就是以标本的取材、涂片的制备与染色，以及镜检一整套的规律性检查，必须遵循这一套检查方法的要求，严格进行操作，才能得到满意合格的标本。严格镜下操作规程，才能达到诊断工作的良好条件，取得各种数据和参数，否则徒劳无益。
采样、制片及染色三道工序至关重要，是细胞形态学检查的成败关键。要取得合格的涂片标本，必须做好上述工序，应注意以下要求：
(一)采样、制片：
1.玻片要求：国内1.0mm×26mm×76mm±0.5，美国NCCLS规定1.0mm×25mm×76mm±0.5，要严格清洁，接近中性。
2.推片：要选择优质推片，推片两端边缘整齐、平滑。也可选用有机玻璃，其大小、厚度与玻片相同，两端之边缘应加工光滑，以利推片用。
3.才外周血(样)，擦去第一滴血，迅速采血，量适中，如绿豆粒大小，具有一定推片技术，推片倾斜45。±，推成血膜长度25mm-35mm，宽度18-20mm，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇(摇)干，血膜具有头体尾不同厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。
4.如若采用静脉血推片，用K3-EDTA或肝素抗凝，推制血片应尽早进行(最迟在1-2小时内)。
5.骨髓涂片：骨穿抽取骨髓 液至关重要，否则，骨髓细胞学检查则无法进行或不能真实反应骨髓造血状态。穿刺针定位后抽骨髓液量<0.2mm，拔出穿刺针时应保持注射器连接穿刺针的真空状态，再拔针，反复地打出骨髓，抽回血液部分，使玻片面留下较脓的骨髓液及骨髓小粒，进行推片。应推十张以上，顺序编号，以备常规形态学及细胞化学染色检查之用。骨髓液涂片与外周血涂片有所不同，骨髓液有核细胞多，脂肪成分较多，粘稠度高，未抗凝，易凝固，操作应敏捷。涂片时，应根据骨髓上述特点及病人情况，调整推片技巧，推片速度较血片慢，使细胞充分在玻片上摊展开来，迅速扇(摇)干。
(二)染色：是识别细胞形态的重要标记工序：
有核细胞是无色的，经细胞染色后，用光镜见到细胞显色的成分，并非是细胞原来的面貌。而是细胞经染色后在镜下反映细胞内不同的结构成分，在一定酸碱溶液中对染料的特殊的亲和性，如胞核的核酸及蛋白质以及原始细胞的胞浆为酸性物质，与碱性染料美兰作用后，染成蓝色，而碱性物质如Hb，则被伊红染成红色。血细胞瑞氏-姬姆萨染色的 光镜形态被看成是血细胞形态学最广泛的基本方法。
常规染色法
(1)姬姆萨(Giema's)染色： Giema's粉末为eosin-azureⅡ3.0g及天青azureⅡ0.8g混合而成。对胞浆和颗粒显色较好。
(2)瑞氏(Wright's)染色：Wright粉末是亚甲兰与伊红合成，染色对胞核结构显色好。
(3)瑞氏-姬姆萨混合染色(W-GS)：以瑞氏(核)染色为主，取其两者优点。
(4)May-Giemas氏染色：先用May-Giemas氏染液染色( May-Giemas氏液是含0.5伊红酸亚甲兰的甲醇溶液)，再用姬姆萨氏染色的方法，主要用于染色体染色。
(三)光镜检查程序：
1.肉眼观察：涂片厚薄是否适宜(根据贫血程度、白细胞及有核细胞的多少)，涂膜是否合格，未染色涂片涂膜色泽，骨髓小粒及脂肪情况(灰白粒状多为有核细胞增生明显或白血病；砖红色泽，涂膜面短、厚(推不开)多为RBC增多症，涂膜稀释或无骨髓小粒，多为取材不佳或增生不良；如若油珠甚多，多为AA或低增生MDS等)，涂片染色好坏，色泽是否正。
2.低倍镜观察-观察涂片全貌：
(1)涂片染色是否合格，了解全片有核细胞及各系细胞分布状况；
(2)观察外周血WBC数(校对直接计数)及各类WBC分布及其比例。
(3)骨髓有核细胞增生度，粒/红及粒红两系各阶段及巨核系细胞数量，各阶段比例及形态，血小板形成情况，特别在片尾有无异常细胞(转移瘤细胞、恶组、高雪氏细胞、N-P细胞及海兰组织细胞等)。选择具有代表性油镜观察区，寻找骨髓造血细胞成分多、分布比例具有代表性、无核细胞(RBC)不重叠、均匀分布区域，有核细胞才能分布均匀、推开，细胞形态才易辨认。
3.油镜观察：要求观察具有代表性区域的细胞形态比例，分类计数-镜头移动走向，按图进行。骨髓有核细胞分类计数200个，外周血细胞分类计数100个。
2.WBC分类正常范围及其病理性变化:
(1)WBC分类正常范围:新生儿出生后最初24小时白细胞数高,主要为中性粒细胞,至第3~4周,中性粒细胞与淋巴细胞比例倒转,直至4岁淋巴细胞比例仍增多.表1 ......
血液一般检查
血细胞形态学的检查方法：
1.光镜(瑞氏-姬姆萨染色)是血细胞形态学最基本和最常用的检查方法，被看成是血细胞形态学的基本内容，最广泛应用于临床实验室。
2.细胞化学染色：
是细胞学和化学两者结合的形态学方法，其目的和特点是细胞保持完整组织结构。在细胞个体组织的单位上，显示化学结构成分的定性或半定量。在血液学中应用的意义：
(1)研究血细胞化学成分及代谢功能；
(2)协助血液并病的诊断，尤其是急性白血病分型及鉴别诊断；
(3)观察血液病的疗效几判断预后；
(4)探索血液病的发病机制。
瑞氏染色法(Wrights Stain)：
细胞染色机制：染色是将细胞经染色剂的物理和化学作用，使其清楚显示细胞各个组成成分，有利辨识细胞形态。
染色可分两个步骤：
1.染料受相应物质吸附而附着于物质表面；
2.固着作用，即染色粒子进入细胞内起化学反应(染色透过细胞膜的学说很多，尚无定论)，与相应的物质形成形成溶解度很低的盐固着于细胞内而显色。染色剂皆有选择作用，其染色不是将细胞全部一齐着色，而只是将其中一部分染色，多余的被冲洗掉。目前多以吸附学说(电力吸附、机械吸附、化学吸附)来解释。
基本概念
1.瑞氏染料是碱性染料美蓝和酸性染料伊红合称伊红美蓝染料即瑞氏染料。
伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸色，故称伊红为酸性染料。美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。
2.用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用
(1)甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲醇
ME(瑞氏染料)──→M+ + E-
在配置的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染成蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
(2)甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料的吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
形态学也有其相对的独立性，这就是以标本的取材、涂片的制备与染色，以及镜检一整套的规律性检查，必须遵循这一套检查方法的要求，严格进行操作，才能得到满意合格的标本。严格镜下操作规程，才能达到诊断工作的良好条件，取得各种数据和参数，否则徒劳无益。
采样、制片及染色三道工序至关重要，是细胞形态学检查的成败关键。要取得合格的涂片标本，必须做好上述工序，应注意以下要求：
(一)采样、制片：
1.玻片要求：国内1.0mm×26mm×76mm±0.5，美国NCCLS规定1.0mm×25mm×76mm±0.5，要严格清洁，接近中性。
2.推片：要选择优质推片，推片两端边缘整齐、平滑。也可选用有机玻璃，其大小、厚度与玻片相同，两端之边缘应加工光滑，以利推片用。
3.才外周血(样)，擦去第一滴血，迅速采血，量适中，如绿豆粒大小，具有一定推片技术，推片倾斜45。±，推成血膜长度25mm-35mm，宽度18-20mm，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇(摇)干，血膜具有头体尾不同厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。
4.如若采用静脉血推片，用K3-EDTA或肝素抗凝，推制血片应尽早进行(最迟在1-2小时内)。
5.骨髓涂片：骨穿抽取骨髓 液至关重要，否则，骨髓细胞学检查则无法进行或不能真实反应骨髓造血状态。穿刺针定位后抽骨髓液量<0.2mm，拔出穿刺针时应保持注射器连接穿刺针的真空状态，再拔针，反复地打出骨髓，抽回血液部分，使玻片面留下较脓的骨髓液及骨髓小粒，进行推片。应推十张以上，顺序编号，以备常规形态学及细胞化学染色检查之用。骨髓液涂片与外周血涂片有所不同，骨髓液有核细胞多，脂肪成分较多，粘稠度高，未抗凝，易凝固，操作应敏捷。涂片时，应根据骨髓上述特点及病人情况，调整推片技巧，推片速度较血片慢，使细胞充分在玻片上摊展开来，迅速扇(摇)干。
(二)染色：是识别细胞形态的重要标记工序：
有核细胞是无色的，经细胞染色后，用光镜见到细胞显色的成分，并非是细胞原来的面貌。而是细胞经染色后在镜下反映细胞内不同的结构成分，在一定酸碱溶液中对染料的特殊的亲和性，如胞核的核酸及蛋白质以及原始细胞的胞浆为酸性物质，与碱性染料美兰作用后，染成蓝色，而碱性物质如Hb，则被伊红染成红色。血细胞瑞氏-姬姆萨染色的 光镜形态被看成是血细胞形态学最广泛的基本方法。
常规染色法
(1)姬姆萨(Giema's)染色： Giema's粉末为eosin-azureⅡ3.0g及天青azureⅡ0.8g混合而成。对胞浆和颗粒显色较好。
(2)瑞氏(Wright's)染色：Wright粉末是亚甲兰与伊红合成，染色对胞核结构显色好。
(3)瑞氏-姬姆萨混合染色(W-GS)：以瑞氏(核)染色为主，取其两者优点。
(4)May-Giemas氏染色：先用May-Giemas氏染液染色( May-Giemas氏液是含0.5伊红酸亚甲兰的甲醇溶液)，再用姬姆萨氏染色的方法，主要用于染色体染色。
(三)光镜检查程序：
1.肉眼观察：涂片厚薄是否适宜(根据贫血程度、白细胞及有核细胞的多少)，涂膜是否合格，未染色涂片涂膜色泽，骨髓小粒及脂肪情况(灰白粒状多为有核细胞增生明显或白血病；砖红色泽，涂膜面短、厚(推不开)多为RBC增多症，涂膜稀释或无骨髓小粒，多为取材不佳或增生不良；如若油珠甚多，多为AA或低增生MDS等)，涂片染色好坏，色泽是否正。
2.低倍镜观察-观察涂片全貌：
(1)涂片染色是否合格，了解全片有核细胞及各系细胞分布状况；
(2)观察外周血WBC数(校对直接计数)及各类WBC分布及其比例。
(3)骨髓有核细胞增生度，粒/红及粒红两系各阶段及巨核系细胞数量，各阶段比例及形态，血小板形成情况，特别在片尾有无异常细胞(转移瘤细胞、恶组、高雪氏细胞、N-P细胞及海兰组织细胞等)。选择具有代表性油镜观察区，寻找骨髓造血细胞成分多、分布比例具有代表性、无核细胞(RBC)不重叠、均匀分布区域，有核细胞才能分布均匀、推开，细胞形态才易辨认。
3.油镜观察：要求观察具有代表性区域的细胞形态比例，分类计数-镜头移动走向，按图进行。骨髓有核细胞分类计数200个，外周血细胞分类计数100个。
2.WBC分类正常范围及其病理性变化:
(1)WBC分类正常范围:新生儿出生后最初24小时白细胞数高,主要为中性粒细胞,至第3~4周,中性粒细胞与淋巴细胞比例倒转,直至4岁淋巴细胞比例仍增多.表1 ......
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