系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群Fas及bcl-2抗原的表达
作者：蒋莉 赵丽娟 何春涤
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院普通内科(蒋莉 赵丽娟)，皮肤科(何春涤)
关键词：红斑狼疮；系统性；T淋巴细胞亚群
中华皮肤科杂志980103
【摘要】 目的 通过对SLE患者末梢血CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原表达的测定，寻找与SLE发病有关的因素。方法 用流式细胞仪双色解析法。结果 与健康对照组比较，SLE患者的CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴胞亚群表面Fas抗原表达明显增强(P〈0.01)，而bcl-2抗原表达明显降低(P〈0.01)。
, 百拇医药
结论 末梢血CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas抗原表达增强，bcl-2抗原表达降低即过度细胞凋亡现象可能与SLE发病有关。
Fas bcl-2Expression of Fas and bcl-2 Antigens on T Lymphocyte Subsets in Patients withSystemic Lupus Erythematosus Jiang Li,Zhao Lijuan,He Chundi.Department of GeneralInternal Medicine,The First Clinical College,China Medical University, Shenyang 110001
【Abstract】 Objective To study the expression of Fas and bcl-2 antigens on Tlymphocyte subsets in patients with SLE and healthy controls. Methods Flow cytometry(two colour analysis) were used. Results We observed that the expression of Fas antigenon CD4+,CD8+,CD45RO+ T lymphocyte subsets of SLE patients was significantly higher
, 百拇医药
than that of healthy controls (P〈0.01) and that the expression of bcl-2 antigen was significantlydecreased(P〈0.01). Conclusion Increased expression of Fas antigen and decreased expressionof bcl-2 antigen on T lymphocyte subsets may be related to the pathogenesis of SLE.
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic T lymphocyte subset Fas bcl-2系统性红斑狼疮(SLE)的病理形成机理目前考虑为B淋巴细胞的多克隆活化及T淋巴细胞的功能异常。近年，随着对与细胞寿命密切相关的细胞凋亡(apoptosis)的不断研究，已发现Fas抗原及bcl-2抗原分别是促进和抑制细胞凋亡的抗原
, 百拇医药
[1，2]，故T淋巴细胞亚群Fas及bcl-2抗原的表达与免疫异常相关性的研究引起了广大学者的重视。我们通过对SLE患者CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原表达的研究，旨在揭示SLE患者产生T淋巴细胞功能异常的病理机理。
材料和方法
1.研究对象：日本独协医科大学病院变态反应内科门诊及住院患者。SLE患者26例，均为女性，年龄16～51岁，平均31.61±6.77岁。诊断符合1982年美国风湿病协会的诊断标准，为初发未治疗及复发者，泼尼松用量〈10mg/d，采血前2周内未用免疫抑制剂。同时以15例健康人作为对照，均为女性，年龄21～47岁，平均33.15±5.92岁。
2.试剂：Ficoll淋巴细胞分离液(Pharmacia, Sweden)，磷酸缓冲液(PBS，Nissui，Japan)，RPE结合CD4单克隆抗体(Dako, Japan)，FITC结合Fas单克隆抗体(MBL, Japan)，RPE结合CD8单克隆抗体(Dako, Japan)，ITC结合bcl-2单克隆抗体(Dako, Japan)，RPE结合CD45RO单克隆抗体(Dako, Japan)。
, 百拇医药
3.淋巴细胞分离：取肝素抗凝血5ml，小心重层于Ficoll淋巴细胞分离液3ml上，以400r/min离心30分钟，小心吸取血浆与Ficoll淋巴细胞分离液交界面的细胞层，PBS洗2次。淋巴细胞纯度95%以上。
4.T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原的测定：用PBS液调整淋巴细胞悬浮液浓度为5×106/ml，于上述淋巴细胞悬浮液200μl中以CD4 Fas、CD4 bcl-2、CD8 Fas、CD8 bcl-2、CD45RO Fas及CD45RO bcl-2组合分别加入各自单克隆抗体10μl，冰中遮光反应15分钟，PBS洗2次。测定使用流式细胞仪FACS can(Becton Dickinson, USA)，采用双色解析法，结果以5000个淋巴细胞的平均荧光强度(MFI)表示，测定时以PBS管为对照。
5.统计学处理：实验结果用各测定管的MFI与各自对照管的MFI的差表示，采用Student t检验。
, 百拇医药
结 果
1.T淋巴细胞亚群Fas抗原的表达(表1)：从表1可以看出，SLE患者的CD4+ Fas+、CD8+ Fas+及CD45RO+ Fas+值均明显高于健康对照组。
2.T淋巴细胞亚群bcl-2抗原的表达(表2)：从表2可以看出，SLE患者的CD4+bcl-2+、CD8+ bcl-2+及CD45RO+ bcl-2+值均明显低于健康对照组。
表1 SLE患者T淋巴细胞亚群Fas抗原的
表达(平均荧光强度，±s)
, 百拇医药
组别
例数
CD4+ Fas+
CD8+ Fas+
CD45RO+ Fas+
对照组
15
11.52±1.87
5.02±1.70
8.55±1.95
SLE组
, 百拇医药
26
19.56±1.92
12.96±2.11
16.52±2.78
t值
-
3.971
4.211
3.850
P值
-
〈0.01
〈0.01
, 百拇医药
〈0.01
表2 SLE患者T淋巴细胞亚群bcl-2抗原的
表达(平均荧光强度，±s)
组别
例数
CD4+ bcl-2+
CD8+ bcl-2+
CD45RO+ bcl-2+
对照组
15
, 百拇医药
149.03±3.87
132.38±3.61
86.38±2.86
SLE组
26
43.88±2.55
44.96±3.20
59.74±2.69
t值
7.411
6.992
3.574
, http://www.100md.com
P值
〈0.01
〈0.01
〈0.01
讨 论
细胞凋亡指由基因控制的细胞程序性死亡现象[3]。细胞凋亡过程的失衡与自身免疫性疾病及肿瘤等病的发生发展有关，故作为促进细胞凋亡过程的Fas抗原及与之相反的抑制细胞凋亡过程的bcl-2抗原在自身免疫性疾病研究中的重要性受到广大学者重视[1，2]。SLE的发生普遍被认为与T淋巴细胞功能异常有关。有研究报道，SLE患者末梢血中作为诱导性/辅助性T细胞的CD4+ T细胞、抑制性/细胞毒性T细胞的CD8+T细胞及记忆性T细胞的CD45RO+T细胞均明显减少[4，5]，并认为与其产生自身抗淋巴细胞抗体及粘附分子异常有关[6，7]。
, 百拇医药
随着细胞凋亡这一现象的发现与研究，推测SLE患者T淋巴细胞功能异常及淋巴细胞减少可能与淋巴细胞表面Fas抗原表达有关。我们对26例SLE患者CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原的表达进行了探讨，以健康人为对照。结果显示：与健康对照组比较，SLE患者CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面的Fas抗原表达明显增强，bcl-2抗原表达明显降低，提示SLE患者的T淋巴细胞功能异常及末梢血淋巴细胞数量减少可能与T淋巴细胞亚群的过度细胞凋亡过程有关。
参 考 文 献
1 Williams GT, Smith CA. Molecular regulation apoptosis: genetic controls on cell death. Cell,1993,74∶777-779.
, http://www.100md.com
2 花园丰. アポト-シスの分子生物学. 临床医, 1995,21∶2084-2087.
3 Clarke PGH. Developmental cell death. Anat Embryol, 1990,181∶195-198.
4 Morimoto C, Steinberg AD, Letvin NL. A defect of immuno-regulatory T cell subsets insystemic lupus erythematosus patients demonstrated with anti 2H4 antibody. J Clin Invest,1987,79∶762-768.
5 Takeuchi T, Tanaka S, Steinberg AD. Defective expression of the 2H4 molecule afterautologous mixed lymphocyte reaction activation in systemic lupus erythematosus patients.J Clin Invest, 1988,82∶1288-1294.
, 百拇医药
6 Koike T, Koboyashi S, Yoshiki T. Erythrocyte rosette inhibition as an assay for naturallyoccurring T lymphocytotoxic antibody in systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum,1979,22∶1064-1073.
7 Haskard DO, Cavender D, Maliakka ID. T cell adhesion to endothelial cells in systemic lupuserythematosus. Rheumatol Int, 1989,9∶33-37.
(收稿：1997-04-20 修回：1997-09-26), 百拇医药
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院普通内科(蒋莉 赵丽娟)，皮肤科(何春涤)
关键词：红斑狼疮；系统性；T淋巴细胞亚群
中华皮肤科杂志980103
【摘要】 目的 通过对SLE患者末梢血CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原表达的测定，寻找与SLE发病有关的因素。方法 用流式细胞仪双色解析法。结果 与健康对照组比较，SLE患者的CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴胞亚群表面Fas抗原表达明显增强(P〈0.01)，而bcl-2抗原表达明显降低(P〈0.01)。
, 百拇医药
结论 末梢血CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas抗原表达增强，bcl-2抗原表达降低即过度细胞凋亡现象可能与SLE发病有关。
Fas bcl-2Expression of Fas and bcl-2 Antigens on T Lymphocyte Subsets in Patients withSystemic Lupus Erythematosus Jiang Li,Zhao Lijuan,He Chundi.Department of GeneralInternal Medicine,The First Clinical College,China Medical University, Shenyang 110001
【Abstract】 Objective To study the expression of Fas and bcl-2 antigens on Tlymphocyte subsets in patients with SLE and healthy controls. Methods Flow cytometry(two colour analysis) were used. Results We observed that the expression of Fas antigenon CD4+,CD8+,CD45RO+ T lymphocyte subsets of SLE patients was significantly higher
, 百拇医药
than that of healthy controls (P〈0.01) and that the expression of bcl-2 antigen was significantlydecreased(P〈0.01). Conclusion Increased expression of Fas antigen and decreased expressionof bcl-2 antigen on T lymphocyte subsets may be related to the pathogenesis of SLE.
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic T lymphocyte subset Fas bcl-2系统性红斑狼疮(SLE)的病理形成机理目前考虑为B淋巴细胞的多克隆活化及T淋巴细胞的功能异常。近年，随着对与细胞寿命密切相关的细胞凋亡(apoptosis)的不断研究，已发现Fas抗原及bcl-2抗原分别是促进和抑制细胞凋亡的抗原
, 百拇医药
[1，2]，故T淋巴细胞亚群Fas及bcl-2抗原的表达与免疫异常相关性的研究引起了广大学者的重视。我们通过对SLE患者CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原表达的研究，旨在揭示SLE患者产生T淋巴细胞功能异常的病理机理。
材料和方法
1.研究对象：日本独协医科大学病院变态反应内科门诊及住院患者。SLE患者26例，均为女性，年龄16～51岁，平均31.61±6.77岁。诊断符合1982年美国风湿病协会的诊断标准，为初发未治疗及复发者，泼尼松用量〈10mg/d，采血前2周内未用免疫抑制剂。同时以15例健康人作为对照，均为女性，年龄21～47岁，平均33.15±5.92岁。
2.试剂：Ficoll淋巴细胞分离液(Pharmacia, Sweden)，磷酸缓冲液(PBS，Nissui，Japan)，RPE结合CD4单克隆抗体(Dako, Japan)，FITC结合Fas单克隆抗体(MBL, Japan)，RPE结合CD8单克隆抗体(Dako, Japan)，ITC结合bcl-2单克隆抗体(Dako, Japan)，RPE结合CD45RO单克隆抗体(Dako, Japan)。
, 百拇医药
3.淋巴细胞分离：取肝素抗凝血5ml，小心重层于Ficoll淋巴细胞分离液3ml上，以400r/min离心30分钟，小心吸取血浆与Ficoll淋巴细胞分离液交界面的细胞层，PBS洗2次。淋巴细胞纯度95%以上。
4.T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原的测定：用PBS液调整淋巴细胞悬浮液浓度为5×106/ml，于上述淋巴细胞悬浮液200μl中以CD4 Fas、CD4 bcl-2、CD8 Fas、CD8 bcl-2、CD45RO Fas及CD45RO bcl-2组合分别加入各自单克隆抗体10μl，冰中遮光反应15分钟，PBS洗2次。测定使用流式细胞仪FACS can(Becton Dickinson, USA)，采用双色解析法，结果以5000个淋巴细胞的平均荧光强度(MFI)表示，测定时以PBS管为对照。
5.统计学处理：实验结果用各测定管的MFI与各自对照管的MFI的差表示，采用Student t检验。
, 百拇医药
结 果
1.T淋巴细胞亚群Fas抗原的表达(表1)：从表1可以看出，SLE患者的CD4+ Fas+、CD8+ Fas+及CD45RO+ Fas+值均明显高于健康对照组。
2.T淋巴细胞亚群bcl-2抗原的表达(表2)：从表2可以看出，SLE患者的CD4+bcl-2+、CD8+ bcl-2+及CD45RO+ bcl-2+值均明显低于健康对照组。
表1 SLE患者T淋巴细胞亚群Fas抗原的
表达(平均荧光强度，±s)
, 百拇医药
组别
例数
CD4+ Fas+
CD8+ Fas+
CD45RO+ Fas+
对照组
15
11.52±1.87
5.02±1.70
8.55±1.95
SLE组
, 百拇医药
26
19.56±1.92
12.96±2.11
16.52±2.78
t值
-
3.971
4.211
3.850
P值
-
〈0.01
〈0.01
, 百拇医药
〈0.01
表2 SLE患者T淋巴细胞亚群bcl-2抗原的
表达(平均荧光强度，±s)
组别
例数
CD4+ bcl-2+
CD8+ bcl-2+
CD45RO+ bcl-2+
对照组
15
, 百拇医药
149.03±3.87
132.38±3.61
86.38±2.86
SLE组
26
43.88±2.55
44.96±3.20
59.74±2.69
t值
7.411
6.992
3.574
, http://www.100md.com
P值
〈0.01
〈0.01
〈0.01
讨 论
细胞凋亡指由基因控制的细胞程序性死亡现象[3]。细胞凋亡过程的失衡与自身免疫性疾病及肿瘤等病的发生发展有关，故作为促进细胞凋亡过程的Fas抗原及与之相反的抑制细胞凋亡过程的bcl-2抗原在自身免疫性疾病研究中的重要性受到广大学者重视[1，2]。SLE的发生普遍被认为与T淋巴细胞功能异常有关。有研究报道，SLE患者末梢血中作为诱导性/辅助性T细胞的CD4+ T细胞、抑制性/细胞毒性T细胞的CD8+T细胞及记忆性T细胞的CD45RO+T细胞均明显减少[4，5]，并认为与其产生自身抗淋巴细胞抗体及粘附分子异常有关[6，7]。
, 百拇医药
随着细胞凋亡这一现象的发现与研究，推测SLE患者T淋巴细胞功能异常及淋巴细胞减少可能与淋巴细胞表面Fas抗原表达有关。我们对26例SLE患者CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面Fas及bcl-2抗原的表达进行了探讨，以健康人为对照。结果显示：与健康对照组比较，SLE患者CD4+、CD8+、CD45RO+T淋巴细胞亚群表面的Fas抗原表达明显增强，bcl-2抗原表达明显降低，提示SLE患者的T淋巴细胞功能异常及末梢血淋巴细胞数量减少可能与T淋巴细胞亚群的过度细胞凋亡过程有关。
参 考 文 献
1 Williams GT, Smith CA. Molecular regulation apoptosis: genetic controls on cell death. Cell,1993,74∶777-779.
, http://www.100md.com
2 花园丰. アポト-シスの分子生物学. 临床医, 1995,21∶2084-2087.
3 Clarke PGH. Developmental cell death. Anat Embryol, 1990,181∶195-198.
4 Morimoto C, Steinberg AD, Letvin NL. A defect of immuno-regulatory T cell subsets insystemic lupus erythematosus patients demonstrated with anti 2H4 antibody. J Clin Invest,1987,79∶762-768.
5 Takeuchi T, Tanaka S, Steinberg AD. Defective expression of the 2H4 molecule afterautologous mixed lymphocyte reaction activation in systemic lupus erythematosus patients.J Clin Invest, 1988,82∶1288-1294.
, 百拇医药
6 Koike T, Koboyashi S, Yoshiki T. Erythrocyte rosette inhibition as an assay for naturallyoccurring T lymphocytotoxic antibody in systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum,1979,22∶1064-1073.
7 Haskard DO, Cavender D, Maliakka ID. T cell adhesion to endothelial cells in systemic lupuserythematosus. Rheumatol Int, 1989,9∶33-37.
(收稿：1997-04-20 修回：1997-09-26), 百拇医药