HPLC测定强精宝口服液中淫羊藿甙的含量
作者：楼余淦 张永清
单位：楼余淦 张永清(浦江 322200 浙江浦江县人民医院)
关键词：
980329 强精宝口服液是由黄芪、人参、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、韭菜籽、鹿肾、黄狗肾、驴肾、鹿茸、龟甲胶等十几味天然药物精制而成。具有补肾壮阳、益气填精补髓、强筋壮骨等功效，用于强健身体，补肾壮阳、腰膝酸痛乏力。原质量标准中无定量指标，本文采用RP-HPLC，用外标峰面积法测定该制剂中有效成份淫羊藿甙的含量，结果表明，本法可作为监测和控制该制剂质量指标的手段。
1 实验材料
1.1 仪器：Waters高效液相色谱仪(美国)；510泵(美国)；490型紫外检测器(美国)；745型分析仪；Milli-Q Reageat Water Syetem(日本产);U6c手动进样器。
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1.2 试药：淫羊藿标准品(中国药品生物制品检定所，批号737-8802)；强精宝口服液(内蒙古蒙药厂)；乙腈、甲醇均为色谱纯；超纯水自制。
1.3 色谱条件：μ-Bomdapak C18色谱柱，流动相为乙腈-水(7∶3),流速1.0ml/min,柱温30℃,检测波长270nm,AUFS为0.5,进样量10μl。淫羊藿甙的保留时间为2.45min,数据处理为外标峰面积法，色谱图见附图。
附图 HPLC色谱图
A-淫羊藿标准色谱图；B-强精宝口服液色谱图；1-淫羊藿甙峰；2，3-未知物峰
2 标准曲线的制备
2.1 标准溶液的配制：精密称取淫羊藿甙2.75mg,加甲醇溶解并稀释至25ml,摇匀，即得浓度为0.11mg/ml的标准溶液。
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2.2 标准曲线的绘制：在上述色谱条件下，分别进标准溶液8,10,14,20和30μl进行分析，测得各峰面积，计算淫羊藿甙量(W)与峰面积(A)在0.88～3.3μg范围内的线性关系。回归方程:W=9.1759×10-5A+0.01737,r=0.9999。
2.3 系统适用性试验：取上述标准品溶液10μl进样测定，计算结果理论板数为2075。
2.4 精密度试验：连续测定淫羊藿甙标准溶液10μl 5次，RSD为2.1%。
3 淫羊藿甙含量的测定
3.1 样品溶液的制备：精密吸取样品15ml,加氯仿洗涤3次，每次15ml,弃去氯仿层后，加入水饱和正丁醇萃取4次，每次15ml,合并正丁醇，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解，并定量溶解于25ml量瓶中,0.45μm滤膜过滤，取其续滤液为样品溶液。
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3.2 样品的测定：精密吸取样品溶液10μl,在上述色谱条件下进行分析，测定淫羊藿甙的峰面积，用外标峰面积法计算淫羊藿甙的含量，每批测定3份，结果见表1。
表1 强精宝口服液中淫羊藿甙的含量 批号
淫羊藿甙量(mg/ml)
RSD(%)
1
18561
0.297
1.3
2
16370
0.264
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1.5
3
16881
0.272
2.0
平均
0.278
3.3 加样回收率试验：精密称取淫羊藿甙标准品1.05，1.14，1.11，1.16和1.33mg于5只分液漏斗中，分别用10ml甲醇溶解后，各加批号为1的样品溶液5.0ml,摇匀，按样品测定项下“加氯仿洗涤……”起操作，但最后定量溶解于10ml量瓶中，测得淫羊藿甙的峰面积，计算加样回收率，结果见表2。表2 加样回收率 编号
5ml样品淫羊藿
, 百拇医药
甙的量(mg)
加入淫羊藿甙
的量(mg)
测得淫羊藿甙
的量(mg)
回收率
(%)
1
1.485
1.05
2.519
98.5
2
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1.485
1.14
2.598
97.6
3
1.485
1.11
2.574
98.1
4
1.485
1.16
2.950
, http://www.100md.com
95.3
5
1.485
1.23
2.688
97.8
平均
97.5
RSD(%)
1.2
5 讨 论
采用氯仿洗涤，可除去其它组份的干扰，效果较好。洗涤的氯仿层和水饱和正丁醇萃取的样品母液进行薄层层析：取20ml供试液，蒸去氯仿，放冷，用石油醚提取2次，每次20ml,合并石油醚，蒸干，残渣加石油醚0.5ml溶解作为供试液，另取上述淫羊藿对照品溶液作对照液，照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)检验，点样量为10μl,分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(40∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸铈试液，于105℃下烘至斑点清晰，结果均无淫羊藿甙的斑点，说明氯仿层不含淫羊藿甙，即氯仿洗涤不会造成淫羊藿甙的损失，正丁醇萃取亦已完全。
收稿日期：1997-05-12, 百拇医药
单位：楼余淦 张永清(浦江 322200 浙江浦江县人民医院)
关键词：
980329 强精宝口服液是由黄芪、人参、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、韭菜籽、鹿肾、黄狗肾、驴肾、鹿茸、龟甲胶等十几味天然药物精制而成。具有补肾壮阳、益气填精补髓、强筋壮骨等功效，用于强健身体，补肾壮阳、腰膝酸痛乏力。原质量标准中无定量指标，本文采用RP-HPLC，用外标峰面积法测定该制剂中有效成份淫羊藿甙的含量，结果表明，本法可作为监测和控制该制剂质量指标的手段。
1 实验材料
1.1 仪器：Waters高效液相色谱仪(美国)；510泵(美国)；490型紫外检测器(美国)；745型分析仪；Milli-Q Reageat Water Syetem(日本产);U6c手动进样器。
, http://www.100md.com
1.2 试药：淫羊藿标准品(中国药品生物制品检定所，批号737-8802)；强精宝口服液(内蒙古蒙药厂)；乙腈、甲醇均为色谱纯；超纯水自制。
1.3 色谱条件：μ-Bomdapak C18色谱柱，流动相为乙腈-水(7∶3),流速1.0ml/min,柱温30℃,检测波长270nm,AUFS为0.5,进样量10μl。淫羊藿甙的保留时间为2.45min,数据处理为外标峰面积法，色谱图见附图。
附图 HPLC色谱图
A-淫羊藿标准色谱图；B-强精宝口服液色谱图；1-淫羊藿甙峰；2，3-未知物峰
2 标准曲线的制备
2.1 标准溶液的配制：精密称取淫羊藿甙2.75mg,加甲醇溶解并稀释至25ml,摇匀，即得浓度为0.11mg/ml的标准溶液。
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2.2 标准曲线的绘制：在上述色谱条件下，分别进标准溶液8,10,14,20和30μl进行分析，测得各峰面积，计算淫羊藿甙量(W)与峰面积(A)在0.88～3.3μg范围内的线性关系。回归方程:W=9.1759×10-5A+0.01737,r=0.9999。
2.3 系统适用性试验：取上述标准品溶液10μl进样测定，计算结果理论板数为2075。
2.4 精密度试验：连续测定淫羊藿甙标准溶液10μl 5次，RSD为2.1%。
3 淫羊藿甙含量的测定
3.1 样品溶液的制备：精密吸取样品15ml,加氯仿洗涤3次，每次15ml,弃去氯仿层后，加入水饱和正丁醇萃取4次，每次15ml,合并正丁醇，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解，并定量溶解于25ml量瓶中,0.45μm滤膜过滤，取其续滤液为样品溶液。
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3.2 样品的测定：精密吸取样品溶液10μl,在上述色谱条件下进行分析，测定淫羊藿甙的峰面积，用外标峰面积法计算淫羊藿甙的含量，每批测定3份，结果见表1。
表1 强精宝口服液中淫羊藿甙的含量 批号
淫羊藿甙量(mg/ml)
RSD(%)
1
18561
0.297
1.3
2
16370
0.264
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1.5
3
16881
0.272
2.0
平均
0.278
3.3 加样回收率试验：精密称取淫羊藿甙标准品1.05，1.14，1.11，1.16和1.33mg于5只分液漏斗中，分别用10ml甲醇溶解后，各加批号为1的样品溶液5.0ml,摇匀，按样品测定项下“加氯仿洗涤……”起操作，但最后定量溶解于10ml量瓶中，测得淫羊藿甙的峰面积，计算加样回收率，结果见表2。表2 加样回收率 编号
5ml样品淫羊藿
, 百拇医药
甙的量(mg)
加入淫羊藿甙
的量(mg)
测得淫羊藿甙
的量(mg)
回收率
(%)
1
1.485
1.05
2.519
98.5
2
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1.485
1.14
2.598
97.6
3
1.485
1.11
2.574
98.1
4
1.485
1.16
2.950
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95.3
5
1.485
1.23
2.688
97.8
平均
97.5
RSD(%)
1.2
5 讨 论
采用氯仿洗涤，可除去其它组份的干扰，效果较好。洗涤的氯仿层和水饱和正丁醇萃取的样品母液进行薄层层析：取20ml供试液，蒸去氯仿，放冷，用石油醚提取2次，每次20ml,合并石油醚，蒸干，残渣加石油醚0.5ml溶解作为供试液，另取上述淫羊藿对照品溶液作对照液，照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)检验，点样量为10μl,分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(40∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸铈试液，于105℃下烘至斑点清晰，结果均无淫羊藿甙的斑点，说明氯仿层不含淫羊藿甙，即氯仿洗涤不会造成淫羊藿甙的损失，正丁醇萃取亦已完全。
收稿日期：1997-05-12, 百拇医药