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编号:10496580
用MUG-Indole法和药典法对大肠杆菌变异情况考察
http://www.100md.com 《中国现代应用药学》 1999年第1期
     作者:鹿梅花 崔凤珍 马宏伟

    单位:郑州 450003 河南省药品检验所

    关键词:大肠杆菌;MUG-Indole法;药典法;变异

    中国现代应用药学990115摘要 目的:通过MUG-Indole法和中国药典法对大肠杆菌变异情况考察,选出较优的大肠杆菌检验方法。方法:MUG-Indole法和中国药典法配对试验。结果:两法无显著性差异。结论:MUG-Indole法优于中国药典法

    Detection of the variation of escherichia coil by methods of MUG-Indole and CP

    Lu Meihua(Lu MH),Cui Fengzen(Cui FZ),Ma Hongwei(Ma HW)(enan Province Institute of Drug Control,Zhengzhou 450003)
, http://www.100md.com
    ABSTRACT OBJECTIVE:Detect the variation of Escherichia coil by methods of MUG-Indole and CP.METHOD:MUG-Indole method and cp method were performed by conjugation test.RESULTS:There was no marked difference betweet the two methods.CONCLUSION:MUG-Indole method is better than CP method.

    KEY WORDS escherichia coil,MUG-Indole method,CP method,variation

    我国药典法(95年版)[1]收载的大肠杆菌检查法是从混合菌中分离单个菌落并进行整套生化试验,繁琐、费时。据报道[2]大肠杆菌在药品中易发生菌落变异,可能造成漏检。又有报道[3]MUG-Indole法是经过改进的高度专一快速的大肠杆菌检查法,原理是利用目标菌限定酶作用的底物分解产物产生荧光或颜色来鉴定大肠杆菌,MI法简便、快速、灵敏。但是否因大肠杆菌变异,造成漏检,尚未见报道。为此我们对10种蜜丸,20株大肠杆菌用两法配对试验,考察大肠杆菌在蜜丸贮存期变异情况。
, 百拇医药
    1 材 料

    1.1 样品:10种蜜丸为人参归脾丸、羚翘解毒丸、银翘解毒丸、柏子养心丸、山楂丸、黄连上清丸、肠炎康丸、保坤丹丸、附子理中丸、槐角丸。

    1.2 菌种:大肠杆菌20株,用两法确证(见表1)。

    1.3 培养基:营养肉汤、营养琼脂、BL增菌液、EMB琼脂、MUG蛋白胨(采用中国药品生物制品检定所研制的干燥培养基)。

    1.4 仪器:366nm紫外灯。

    2 试验方法

    2.1 染菌及考察时间:将10种蜜丸、20株大肠杆菌随机分为5组,每组两种蜜丸同用4株菌。将蜜丸放入带塞的试管内(每管1丸,每丸中心挖一个凹窝),灭菌后在凹窝处滴入经37℃培养24h的大肠杆菌肉汤培养液一滴(平板计数法测菌数0.2亿个),室温放置,分次试验(0,3,5,7,10,15d)。
, http://www.100md.com
    表1 MI法和药典法对蜜丸中大肠杆菌试验结果比较 试验菌种来源

    编号

    试验菌种Ⅰ

    结 论

    MI法

    MI

    药典法

    IMViC

    小鼠粪便

    (1)

    -+

    ++--

    典型大肠杆菌
, 百拇医药
    小鼠粪便

    (2)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    小鼠粪便

    (3)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    兔粪便

    (4)

    +-
, http://www.100md.com
    -+--

    非典型大肠杆菌

    兔粪便

    (5)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    兔粪便

    (6)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    兔粪便
, http://www.100md.com
    (7)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    兔粪便

    (8)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    兔粪便

    (9)

    ++

    ++--
, http://www.100md.com
    典型大肠杆菌

    便池污水

    (10)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    污土

    (11)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    黄连上清丸

    (12)
, http://www.100md.com
    -+

    ++--

    典型大肠杆菌

    银翘解毒丸

    (13)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    银翘解毒丸

    (14)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌
, 百拇医药
    银翘解毒丸

    (15)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    银翘解毒丸

    (16)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    银翘解毒丸

    (17)

    ++
, 百拇医药
    ++--

    典型大肠杆菌

    淡豆豉

    (18)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    淡豆豉

    (19)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    标准菌种
, 百拇医药
    (20)

    ++

    ++--

    典型大肠杆菌

    (44102)

    2.2 方法:每次试验取两种染菌蜜丸各4丸。分别制成1∶10供试液,各取10ml于100ml增菌液中,置36±1℃培养24h。

    MI法:取0.2ml增菌液于MUG蛋白胨培养基5ml中,培养5~24h,置366nm紫外灯下约5cm处观察(以未接种增菌液的MUG蛋白胨管作本底对照)呈蓝白色荧光为阳性,无荧光为阴性,然后加柯凡克试剂,呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。

    药典法:沾取增菌液划线于EMB平板,同置36±1℃培养至规定时间。挑EMB平板上疑似菌落,纯培养,革兰氏染色镜检,作IMViC试验。
, 百拇医药
    2.3 结果判断 MUG-Ⅰ

    EMB

    IMViC

    结果

    ++

    长菌

    ++--

    检出

    -+

    长菌

    ++--

    检出

    +-
, 百拇医药
    长菌

    -+--

    检出--

    未长菌

    未检出

    ++:表示有荧光,有玫瑰红色;-+:表示无荧光,有玫瑰红色;+-:表示有荧光,无玫瑰红色;--:表示无荧光,无玫瑰红色

    MUG-Ⅰ

    EMB

    IMViC

    原菌种

    ++

    长菌
, 百拇医药
    ++--

    变异--

    长菌---+--

    长菌--++--

    长菌

    -+-+--

    长菌

    +--+

    注:变异是指MUG蛋白胨管和平板均有菌生长,但生化结果和原菌种不同

    3 试验结果

    试验结果见表2~6。

    4 讨 论
, http://www.100md.com
    4.1 为从大肠杆菌变异角度评价MI法和药典法检出率的差异,用配对法进行实验,选用“数据统计四格表”X2检验进行两样本的比较。两法均检出大肠杆菌87对,两法均未检出大肠杆菌8对(变异),MI法检出大肠杆菌而药典法未检出1对(见表5),药典法检出大肠杆菌MI法未检出0对。经X2检验,两种方法无显著性差异(P>0.1),见表7。

    表2 MI法和药典法对蜜丸中大肠杆菌试验结果比较

    人参归脾丸

    羚翘解毒丸

    MI法

    药典法(IMViC)

    MI法

    药典法(IMViC)
, http://www.100md.com
    菌种号

    0(d)

    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    0
, 百拇医药
    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    14

    ++

    ++
, 百拇医药
    ++

    ++

    O

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--

    O

    O

    ++

    O

    O

    O
, 百拇医药
    O

    O

    ++--

    O

    O

    O

    O

    O

    13

    ++

    ++

    ++

    ++

    O
, 百拇医药
    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--

    O

    O

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--
, 百拇医药
    O

    O

    O

    O

    O

    5

    ++

    ++

    ++

    ++

    ++

    O

    ++--

    ++--
, 百拇医药
    ++--

    ++--

    ++--

    O

    ++

    ++

    ++

    O

    O

    O

    ++--

    ++--

    ++--

, 百拇医药     O

    O

    O

    1

    -+

    -+

    -+

    -+

    O

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--
, 百拇医药
    O

    O

    ++

    ++

    O

    O

    O

    O

    ++--

    ++--

    O

    O

    O

    O
, 百拇医药
    存活率

    100

    100

    100

    100

    25

    0

    100

    100

    100

    100

    25

    0

, 百拇医药     100

    50

    25

    0

    0

    0

    100

    50

    25

    0

    0

    0

    (%)

    O-表示菌死亡(MI管不浑浊、无荧光、无玫瑰红色,EMB平板未长菌)。
, 百拇医药
    表3 MI法和药典法对密丸中大肠杆菌试验结果比较

    银翘解毒丸

    柏子养心丸

    MI法

    药典法(IMViC)

    MI法

    药典法(IMViC)

    菌种号

    0(d)

    3

    5

    7

, 百拇医药     10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15
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    0

    3

    5

    7

    10

    15

    18

    ++

    ++

    ++

    O

    O

    O

    ++--
, http://www.100md.com
    ++--

    ++--

    O

    O

    O

    ++

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    O

    O

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    ++--

    ++--

    O
, 百拇医药
    O

    O

    O

    15

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    ++

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    ++

    O

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    O

    O

    ++--

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    --

    O

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    11

    ++

    O

    O

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    O

    O

    ++--

    O

    O

    O

    O

    O

    ++
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    ++

    ++

    O

    O

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    O

    O

    O

    6

    ++

    ++
, 百拇医药
    ++

    ++--

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++-----+

    O

    ++

    ++

    O

    O

    O

, http://www.100md.com     O

    ++--

    ++--

    O

    O

    O

    O

    存活率

    100

    75

    75

    50

    25

    0
, 百拇医药
    100

    75

    75

    50

    25

    0

    100

    100

    50

    25

    0

    0

    100

    100
, http://www.100md.com
    50

    25

    0

    0

    (%)--:表示有菌生长,无荧光和玫瑰红色

    表4 MI法和药典法对蜜丸中大肠杆菌试验结果比较

    附子理中丸

    槐角丸

    MI法

    药典法(IMViC)

    MI法

    药典法(IMViC)
, http://www.100md.com
    菌种号

    0(d)

    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    0
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    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    4

    +-

    O
, http://www.100md.com
    O

    O

    O

    O

    -+--

    O

    O

    O

    O

    O

    +-

    O

    O

    O
, 百拇医药
    O

    O

    -+--

    O

    O

    O

    O

    O

    16

    ++

    O

    O

    O

    O
, 百拇医药
    O

    ++--

    O

    O

    O

    O

    O

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--
, 百拇医药
    O

    O

    O

    O

    O

    10

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--

    O
, 百拇医药
    O

    O

    O

    O

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--

    O

    O

    O
, 百拇医药
    O

    O

    17

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--

    O

    O

    O

    O
, 百拇医药
    O

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--

    O

    O

    O

    O

    O

    存活率
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    100

    0

    0

    0

    0

    0

    100

    0

    0

    0

    0

    0

    100

    0
, http://www.100md.com
    0

    0

    0

    0

    100

    0

    0

    0

    0

    0

    (%)

    表5 MI法和药典法对蜜丸中大肠杆菌试验结果比较

    山楂丸
, 百拇医药
    黄连上清丸

    MI法

    药典法(IMViC)

    MI法

    药典法(IMViC)

    菌种号

    0(d)

    3

    5

    7

    10

    15

    0
, 百拇医药
    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5
, 百拇医药
    7

    10

    15

    12

    -+

    -+

    O

    O

    O

    O

    ++--

    +--+

    O

    O
, 百拇医药
    O

    O

    -+

    -+

    -+

    -+

    -+

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--

, 百拇医药     O

    20

    ++

    O

    O

    O

    O

    O

    ++--

    O

    O

    O

    O

    O
, 百拇医药
    ++

    ++

    ++

    ++

    O

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--

    O

    O

    9

    ++
, 百拇医药
    ++

    ++

    ++

    ++

    O

    ++--

    ++--

    ++--

    ++--

    O

    O

    ++

    ++

    O
, 百拇医药
    O

    O

    O

    ++--

    ++--

    O

    O

    O

    O

    19

    ++

    ++

    ++

    ±-
, 百拇医药
    O

    O

    ++--

    ++-----+

    ++--

    O

    O

    ++

    ++

    O

    O

    O

    O

    ++--
, 百拇医药
    ++--

    O

    O

    O

    O

    存活率

    100

    75

    50

    50

    25

    0

    100

    75
, 百拇医药
    50

    50

    25

    0

    100

    100

    50

    50

    25

    0

    100

    100

    50

    50
, 百拇医药
    25

    0

    (%)

    ±:表示弱荧光

    表6 MI法和药典法对蜜丸中大肠杆菌试验结果比较

    肠炎康丸

    保和丸

    MI法

    药典法(IMViC)

    MI法

    药典法(IMViC)

    菌种号
, http://www.100md.com
    0(d)

    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    0

    3
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    5

    7

    10

    15

    0

    3

    5

    7

    10

    15

    2

    ++

    ++

    O
, 百拇医药
    O

    O

    O

    ++--

    ++--

    O

    O

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    O

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    ++----

    O

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    -++-

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    7

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    O

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    8

    ++

    O--

    O

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    ++--

    O

    -+-+

    O

    O

    O
, 百拇医药
    ++

    O

    O

    O

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    O

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    O

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    3

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    ++--

    -+-+

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    O

    O

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, 百拇医药
    ++----++---+

    O

    O

    O

    存活率

    100

    50

    25

    0

    0

    0

    100

    50

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    0

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    100

    50

    50

    25

    0

    0

    100

    50

    50

    25
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    0

    0

    (%)

    表7 MI法和药典法试验结果比较(配对X2检测)

    药典法

    小结

    检 出

    变 异

    MI法

    检出

    变异

    a=87

    c=0
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    b=1

    d=8

    88

    8

    小 结

    87

    9

    96

    查表:X2=2.7,故X22,P>0.1,无显著性差异

    4.2 虽两法无显著差异,但MI法检出率略高于药典法,变异率(漏检率)略低于药典法,而且MI法快速、简便、省时、无主观误差。故我们认为MI法优于药典法。
, http://www.100md.com
    4.3 该试验由于试验染菌贮存时间长,有的菌株未见变异已死亡。以上是初步试验结果试验数据少,有待进一步研究。

    参考文献

    [1] 中国药典.1995∶79.

    [2] 苏德模.MUG-Indole快速鉴定大肠杆菌方法研究.药物分析杂志,1996,16(2)∶108.

    [3] 张荣藻,王荣华.口服制剂的控制菌(大肠杆菌)标准的研究.中国药事,1993,7(增)∶1.

    收稿日期:1997-11-19, 百拇医药