不同厂家的银杏叶片黄酮含量的比较与分析
作者：陶巧凤
单位：杭州 310004 浙江省药品检验所
关键词：银杏叶片；黄酮；HPLC
中国现代应用药学990120摘要 目的：对市售不同品牌的银杏叶片进行质量考查，制订科学合理 统一的质量标准。方法：采用HPLC测定了11个制药公司的15批银杏叶片 的黄酮含量。结果：各制药公司生产的银杏叶片黄酮含量差异较大，且 主要峰之间的比例亦有差异。结论：建议进一步考察工艺，制订统一的 质量标准以保证银杏叶片质量。
Comparative study of the flavonoids from tablets of Ginkgo biloba
Tao Qiaofeng(Tao QF)(Zhejiang Provincial Institute f or Drug Control,Hangzhou 310004)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：To comparative the quality of tablet s of Ginkgo biloba on market.METHODS:The flavonoids were analysed in 15 batches of the tablets produced by 11 manufactures using RP-HPLC.RESUL TS:These batches of tablets differ greatly in the flavonoids and the ratio of three main peaks.CONCLUSION:The experiment provided the data and method for improving the technique of preparation and quality of the tablets.
KEY WORDS tablet of Ginkgo biloba,flavonoids,HPLC
, 百拇医药
近年来，银杏叶已成为植物药开发研究的热点，由于银杏叶含有黄酮类化合物和萜类银杏内 酯等独特的活性成分，备受国内外的关注。我国在银杏叶制剂开发研究中也取得了很大进展 ，大批新产品问世，如片剂、胶囊剂、口服液、茶剂等。目前银杏叶提取物及制剂尚无统一 的质量标准，就所含的银杏黄酮亦无统一的含量测定方法。本文参考文献对市售11个制药公 司生产的15批银杏叶片进行了黄酮含量测定并作比较分析，为该制剂的工艺改进及制订统一 的质量标准提供数据和方法。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(配备510泵、U6k进样器、490检测器、820色谱工作站),CQ-250型超 声波清洗器(上海超声波仪器厂)。槲皮素、异鼠李素(中国药品生物制品检定所)，山奈酚(s igma公司，含量>90%，定性用)，甲醇(色谱纯)，其它试剂为分析纯。银杏叶片(市售)。
2 实验方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件：色谱柱为Nova-pa k C18(4μ)200×4mm(大连化物所)，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(1∶1),检测波长36 0nm,灵敏度0.1～0.3AUFS,进样量10μl,柱温为室温。色谱图见图1，2。
2.2 测定方法：取银杏叶片20片(糖衣片除糖衣)，精密称定，研细，精 密称取适量(相当于银杏黄酮80mg),精密加入甲醇25ml,称定重量，超声处理20min，取出并放 冷，称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml置烧 瓶中，加入甲醇10ml,4%硫酸溶液20ml,置水浴回流3h,放冷，用甲醇定量转移置50ml量瓶， 摇匀，滤膜滤过即为供试品溶液。另取槲皮素对照品适量用甲醇溶解并制成0.12mg/ml的溶 液作为对照品溶液。分别量取上述两溶液注入液相色谱仪，测定峰面积，计算槲皮素(Q)、 山奈酚(K)、异鼠李素(I)三个甙元含量，乘以计算因子相加即得银杏黄酮含量，计算公式为 :756.7/302.2×Q+740.7/286.2×K+770.6/316.2×I，测定结果见表1。
, 百拇医药
图1 对照品色谱图
Q- 槲皮素；K-山萘酚；Ⅰ-异鼠李素(下图同)
图2 样品色谱图
表1 银杏叶片黄酮含量测定结果 生产厂
批 号
标示量(mg/片)
测定结 果(mg/片)
标示量的百分含量(%)
三个甙元的比例(Q∶K∶I)
A
941103
, http://www.100md.com
9.6
6.42
66.9
1∶0.80∶0.36
B
941015
9.6
9.75
101.6
1∶0.36∶0 .21
B
941210
9.6
, http://www.100md.com
11.45
119.3
1∶1.03∶0.33
C
941010
9.6
9.84
102.5
1∶1.10∶0.40
C
950413
9.6
9.85
, 百拇医药
102 .6
1∶0.86∶0.40
C
951030
9.6
10.04
104.6
1∶0.97∶0.39
D
950503
9.6
8.90
92.7
, 百拇医药
1∶1.02∶0.30
E
950101
9. 6
9.84
102.5
1∶0.76∶0.37
F
950302
9.6
6.26
65.2
1 ∶0.93∶0.53
, 百拇医药
G
930601
9.6
<0.1
<1
-
G
940902
9. 6
<0.1
<1
-
H
, 百拇医药 940501
9.6
8.25
85.9
1∶1.20∶0.43
K
940614
9.6
8.33
86.8
1∶1.24∶0.42
I
CHB0110695
, 百拇医药
9.6
8.66
90.2
1∶0.88∶0.27
J
24029
7.2
6.92
96.1
1∶0.85∶0.26
3 讨 论
3.1 从表1可见，目前市 场上的银杏叶片生产厂家较多且标示量相同为含银杏内酮9.6mg/片(含银杏叶提取物40mg/片 )，但不同厂家的银杏黄酮测定结果差异很大，15批中有11批在标示量的80%～120%,两批只 有标示量的60%,还有2批含量甚微(几乎检不出)。有必要对银杏片及中间体提取物制订统一 的质量标准，以保证临床疗效。
, 百拇医药
3.2 据报道[1～7]，银杏叶 中黄酮类化合物主要是以槲皮素(Q)、山奈酚(K)、异鼠李素(I)为甙元的，其中Q和K为主要 甙元，I仅为Q或K的1/5～2/5,从实验结果可见，除B厂941015和G厂的2批样品外，12批样品 中三种甙元比例(Q∶K∶I)为1∶(0.98±0.16)∶(0.38±0.07)，这一结果与报道相符。但B 厂941015为1∶0.36∶0.21,即槲皮素含量大大高出山奈酚含量，这是什么原因引起值得进一 步研究，银杏叶中的甙元比例反映了其所含化学成分的特性，这一信息须引起我们的足够重 视，合理的比例可确保以多组分共存的银杏叶的内在质量及其提取工艺的科学性。
3.3 目前银杏黄酮的分析方法多为HPLC法，但在测定条件及计算上均存 在差异，本文建议在研究的基础上对测定方法标准化，同时对另一有效成分银杏内酯制订相 应的质量控制方法。
参考文献
, http://www.100md.com [1] Hasler A,Sticher O,Meier B.Identification and det ermination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high performance liquid chrom atography.J Chromatogr,1992,605∶41.
[2] Sticher O.Quality of Ginkgo preparations.Planta M ed,1993,59∶2.
[3] 陶巧凤，黄宗玉，范秀林.高效液相色谱法测定银杏叶制 剂中黄酮含量.中成药，1994，15(12)∶14.
[4] 浙江省药品标准.浙Q/WS-1362-93.
[5] 广东省药品标准.粤Q/WS-3527-94.
, 百拇医药
[6] Pietta PG,Mauri PG,Bruno A.Identification of flav onoids from Ginkgo biloba L.,Anthemis nobilis L. and Equisetum arvense L. by hig h performance liquid chromatography with diode array UV detection.J Chromatogr,1 991,553∶223.
[7] 陈仲良.银杏提取物的化学成分和制剂的质量.中国药学 杂志，1996，31(6)∶326-331.
收稿日期：1998-02-24, http://www.100md.com
单位：杭州 310004 浙江省药品检验所
关键词：银杏叶片；黄酮；HPLC
中国现代应用药学990120摘要 目的：对市售不同品牌的银杏叶片进行质量考查，制订科学合理 统一的质量标准。方法：采用HPLC测定了11个制药公司的15批银杏叶片 的黄酮含量。结果：各制药公司生产的银杏叶片黄酮含量差异较大，且 主要峰之间的比例亦有差异。结论：建议进一步考察工艺，制订统一的 质量标准以保证银杏叶片质量。
Comparative study of the flavonoids from tablets of Ginkgo biloba
Tao Qiaofeng(Tao QF)(Zhejiang Provincial Institute f or Drug Control,Hangzhou 310004)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：To comparative the quality of tablet s of Ginkgo biloba on market.METHODS:The flavonoids were analysed in 15 batches of the tablets produced by 11 manufactures using RP-HPLC.RESUL TS:These batches of tablets differ greatly in the flavonoids and the ratio of three main peaks.CONCLUSION:The experiment provided the data and method for improving the technique of preparation and quality of the tablets.
KEY WORDS tablet of Ginkgo biloba,flavonoids,HPLC
, 百拇医药
近年来，银杏叶已成为植物药开发研究的热点，由于银杏叶含有黄酮类化合物和萜类银杏内 酯等独特的活性成分，备受国内外的关注。我国在银杏叶制剂开发研究中也取得了很大进展 ，大批新产品问世，如片剂、胶囊剂、口服液、茶剂等。目前银杏叶提取物及制剂尚无统一 的质量标准，就所含的银杏黄酮亦无统一的含量测定方法。本文参考文献对市售11个制药公 司生产的15批银杏叶片进行了黄酮含量测定并作比较分析，为该制剂的工艺改进及制订统一 的质量标准提供数据和方法。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(配备510泵、U6k进样器、490检测器、820色谱工作站),CQ-250型超 声波清洗器(上海超声波仪器厂)。槲皮素、异鼠李素(中国药品生物制品检定所)，山奈酚(s igma公司，含量>90%，定性用)，甲醇(色谱纯)，其它试剂为分析纯。银杏叶片(市售)。
2 实验方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件：色谱柱为Nova-pa k C18(4μ)200×4mm(大连化物所)，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(1∶1),检测波长36 0nm,灵敏度0.1～0.3AUFS,进样量10μl,柱温为室温。色谱图见图1，2。
2.2 测定方法：取银杏叶片20片(糖衣片除糖衣)，精密称定，研细，精 密称取适量(相当于银杏黄酮80mg),精密加入甲醇25ml,称定重量，超声处理20min，取出并放 冷，称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml置烧 瓶中，加入甲醇10ml,4%硫酸溶液20ml,置水浴回流3h,放冷，用甲醇定量转移置50ml量瓶， 摇匀，滤膜滤过即为供试品溶液。另取槲皮素对照品适量用甲醇溶解并制成0.12mg/ml的溶 液作为对照品溶液。分别量取上述两溶液注入液相色谱仪，测定峰面积，计算槲皮素(Q)、 山奈酚(K)、异鼠李素(I)三个甙元含量，乘以计算因子相加即得银杏黄酮含量，计算公式为 :756.7/302.2×Q+740.7/286.2×K+770.6/316.2×I，测定结果见表1。
, 百拇医药
图1 对照品色谱图
Q- 槲皮素；K-山萘酚；Ⅰ-异鼠李素(下图同)
图2 样品色谱图
表1 银杏叶片黄酮含量测定结果 生产厂
批 号
标示量(mg/片)
测定结 果(mg/片)
标示量的百分含量(%)
三个甙元的比例(Q∶K∶I)
A
941103
, http://www.100md.com
9.6
6.42
66.9
1∶0.80∶0.36
B
941015
9.6
9.75
101.6
1∶0.36∶0 .21
B
941210
9.6
, http://www.100md.com
11.45
119.3
1∶1.03∶0.33
C
941010
9.6
9.84
102.5
1∶1.10∶0.40
C
950413
9.6
9.85
, 百拇医药
102 .6
1∶0.86∶0.40
C
951030
9.6
10.04
104.6
1∶0.97∶0.39
D
950503
9.6
8.90
92.7
, 百拇医药
1∶1.02∶0.30
E
950101
9. 6
9.84
102.5
1∶0.76∶0.37
F
950302
9.6
6.26
65.2
1 ∶0.93∶0.53
, 百拇医药
G
930601
9.6
<0.1
<1
-
G
940902
9. 6
<0.1
<1
-
H
, 百拇医药 940501
9.6
8.25
85.9
1∶1.20∶0.43
K
940614
9.6
8.33
86.8
1∶1.24∶0.42
I
CHB0110695
, 百拇医药
9.6
8.66
90.2
1∶0.88∶0.27
J
24029
7.2
6.92
96.1
1∶0.85∶0.26
3 讨 论
3.1 从表1可见，目前市 场上的银杏叶片生产厂家较多且标示量相同为含银杏内酮9.6mg/片(含银杏叶提取物40mg/片 )，但不同厂家的银杏黄酮测定结果差异很大，15批中有11批在标示量的80%～120%,两批只 有标示量的60%,还有2批含量甚微(几乎检不出)。有必要对银杏片及中间体提取物制订统一 的质量标准，以保证临床疗效。
, 百拇医药
3.2 据报道[1～7]，银杏叶 中黄酮类化合物主要是以槲皮素(Q)、山奈酚(K)、异鼠李素(I)为甙元的，其中Q和K为主要 甙元，I仅为Q或K的1/5～2/5,从实验结果可见，除B厂941015和G厂的2批样品外，12批样品 中三种甙元比例(Q∶K∶I)为1∶(0.98±0.16)∶(0.38±0.07)，这一结果与报道相符。但B 厂941015为1∶0.36∶0.21,即槲皮素含量大大高出山奈酚含量，这是什么原因引起值得进一 步研究，银杏叶中的甙元比例反映了其所含化学成分的特性，这一信息须引起我们的足够重 视，合理的比例可确保以多组分共存的银杏叶的内在质量及其提取工艺的科学性。
3.3 目前银杏黄酮的分析方法多为HPLC法，但在测定条件及计算上均存 在差异，本文建议在研究的基础上对测定方法标准化，同时对另一有效成分银杏内酯制订相 应的质量控制方法。
参考文献
, http://www.100md.com [1] Hasler A,Sticher O,Meier B.Identification and det ermination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high performance liquid chrom atography.J Chromatogr,1992,605∶41.
[2] Sticher O.Quality of Ginkgo preparations.Planta M ed,1993,59∶2.
[3] 陶巧凤，黄宗玉，范秀林.高效液相色谱法测定银杏叶制 剂中黄酮含量.中成药，1994，15(12)∶14.
[4] 浙江省药品标准.浙Q/WS-1362-93.
[5] 广东省药品标准.粤Q/WS-3527-94.
, 百拇医药
[6] Pietta PG,Mauri PG,Bruno A.Identification of flav onoids from Ginkgo biloba L.,Anthemis nobilis L. and Equisetum arvense L. by hig h performance liquid chromatography with diode array UV detection.J Chromatogr,1 991,553∶223.
[7] 陈仲良.银杏提取物的化学成分和制剂的质量.中国药学 杂志，1996，31(6)∶326-331.
收稿日期：1998-02-24, http://www.100md.com