正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中脂肪酸组成的气相色谱测定
作者：张恩平 李红娟
单位：张恩平 山西医科大学公共卫生学院分析中心 太原 030001；李红娟 山西医科大学公共卫生学院儿少卫生教研室)
关键词：孕产妇；婴儿，新生；血浆；胎血；色谱法，气相；花生四烯酸；二十二碳六烯酸类；长链脂肪酸
山西医科大学学报990102 摘要 用气相色谱法对正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸进行了分离测定，结果显示孕妇血浆中DHA百分含量为总脂肪酸的(1.806±1.344)%，脐血中AA、DHA含量显著高于母血，分别为1.8倍和3.5倍。
中图号 Q592.1
长链脂肪酸是生物膜的重要组成成分，它在膜的总脂肪酸中所占的比例含量代表着其营养水平并且决定膜的性质。DHA即4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(C22：6n-3)是人和动物生物膜中最重要的一种n-3长链多不饱和脂肪酸，在神经组织的可兴奋膜磷脂中含量尤为丰富，是维持脑和视网膜功能的必需物质。关于健康正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中的脂肪酸组成国内报道尚少，本文用气相色谱法对太原市区健康正常孕妇51人，妊娠期24～36周，年龄18～35岁，健康正常产妇20人，年龄25～29岁静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸进行了分离测定，结果显示孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸色谱峰均能达到很好分离，分离效果令人满意，完全能满足分析测定的要求。各脂肪酸出峰顺序为：C16∶0(PA)、C18∶0(SA)、C18∶1(OA)、C18∶2(LA)、C18∶3(LNA)、C18∶4(OEA)、C20∶4(AA)、C20∶5(EPA)、C22∶6(DHA)。
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1 实验部分
1.1 仪器与试剂 日本岛津产GC-9A气相色谱仪C-R3A数据处理机。脂肪酸甲酯标准品：C16∶0，C18∶0，C18∶1，C18∶2，C18∶3，C18∶4，C20∶4，C20∶5，C22∶6，均为Sigma公司产品。甲醇、氯仿、硫酸氢氧化钾、苯、石油醚、无水乙醇均为AR级试剂，水为双蒸水。
1.2 色谱条件 色谱柱为2.1m×
3.0mm玻璃柱，内填涂有色谱固定液为10%聚丁二酸二乙二醇酯(DEGS)，担体为Chromosorb-WHP(60～80目)，氢火焰离子化检测器FID，柱温采用程序升温法：100℃(1min)
200℃(20min)检测器及进样口温度：250℃。载气高纯N2，60ml/min，燃气H2，1kg/cm2，助燃气空气，0.5kg/cm2。根据保留时间定性，面积归一化法定量。
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1.3 定性定量分析 根据保留时间定性。各取一定量的脂肪酸甲酸标准品混合并稀释到一定浓度配制成混合标准溶液，进样做出标准色谱图(见图1)，分别与样品中各组分的保留时间进行对照，对9种主要长链脂肪酸进行定性。标准品中各脂肪酸的保留时间(min)为：C16∶0(8.52)、C18∶0(11.22)、C18∶1(12.29)、C18∶2(14.20)、C18∶3(17.25)、C18∶4(19.66)、C20∶4(26.42)、C20∶5(33.60)、C22∶6(59.13)。
图1 脂肪酸标准色谱图
定量分析在C-R3A数据处理机上进行，采用面积归一化法直接计算出各组分在脂肪酸总量中所占的重量百分比。
1.4 采样及样品前处理
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1.4.1 采集孕妇空腹静脉血3ml及时离心分离血浆-40℃冻存备分析用。婴儿娩出，脐带结扎后从胎儿侧采集脐血3ml，同时采集产妇肘静脉血3ml，血样及时离心分离血浆，-40℃冻存备分析用。
1.4.2 样品中脂质的提取[1] 用甲醇-氯仿(V∶V=1∶1)酸性条件下提取脂质，操作步骤如下：取血浆0.5ml
振荡0.5min，使蛋白沉淀
振荡2min
颠倒混和，猛烈振摇提取脂质
3000r/min离心5min，吸去上清液下层用滤纸过滤，过滤后用氯仿0.5ml冲洗滤纸一次，收集滤液于N2下吹干。
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1.4.3 脂肪酸的甲酯化 采用室温氢氧化钾-甲醇酯化法[2]。向上述残渣中加入沸程为30～60℃的1∶1苯-石油醚0.5ml使之溶解，加入0.4mol/L氢氧化钾-甲醇溶液0.5ml，混匀，室温静置10min沿管壁缓缓加入双蒸水使全部石油醚苯甲酯溶液升至液体上层，如不澄清，可加入1～2滴无水乙醇，吸出上清液，N2下浓缩后上机分析。
2 结果和讨论
本文用气相色谱法对正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸进行了分离测定，其中孕妇血浆中DHA百分含量为总脂肪酸的(1.806±1.344)%与国外有关正常人血中DHA水平[(2.0±0.6)%]报道接近[3]。孕产妇静脉血浆和新生儿脐血浆中二十碳五烯酸(EPA)经测定含量分别占其总脂肪酸的0.2%～0.3%和0.1%，含量很低，无显著差异，属正常范围且此含量不会对婴儿及新生儿的生长和智力发育产生不利影响。其余几种脂肪酸与正常人也较接近，无显著差异。在妊娠中晚期，正是胎儿神经系统发育的关键时期，也是DHA在胎儿脑和视网膜沉积的高峰期，胎儿对DHA的需要量很高，而其自身合成DHA的酶系统又不完全成熟，因而孕妇血中可能应含有较正常人更高水平的DHA，所以平时孕妇多食含DHA较高的食物如动物性食物，鱼贝类水产以及DHA类保健品等等，可有效提高血中DHA水平进而提高胎儿血循环中DHA的供给量。产妇血浆与新生儿脐血浆分析结果则显示：脐血中AA(二十碳四烯酸)，DHA(二十二碳六烯酸)含量显著高于母血(分别为1.8倍和3.5倍)与国外研究结果相一致，C16∶0，C18∶1，C18∶2均显著低于母血，C18∶0，C18∶3，C18∶4二者无显著差异。相关分析结果显示：脐血中C22∶6(DHA)含量与母血中DHA含量高度相关(r2＝0.76，P<0.001)，脐血中C20∶4(AA)含量与母血中AA含量相关有统计意义(P<0.05)，但相关性较小(r2＝0.34)。推测胎儿或胎盘组织可能具有利用这些脂肪酸的前体C18∶2(n-6)和C18∶3(n-3)合成AA、DHA的功能，或者母体血中AA、DHA优先通过胎盘满足胎儿发育的需要，这也表明了AA、DHA对胎儿发育的重要性。所以孕产妇应多食一些含DHA较高的食物或额外补充一定量的DHA类食品，有资料报道常食此类食物或食品人乳中DHA含量会显著增高，以满足胎儿及新生儿生长发育的需要。
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参考文献
1 徐惠珠，张伟利，陈瑞冠.气相色谱法测定人体血液中游离脂肪酸.营养学报，1986，8(2)：165～169
2 满洪升，刘晓芳，仲来福.大鼠肝细胞微粒体及线粒体的脂肪酸组成分析.色谱，1993，11(5)：287～289
3 Harris VS,Muzio F.Fish oil reduces postprandial triglyceride concentrations without accelerating lipid-emulsion removal rates.Am Clin Nutr. 1993， 58： 68～74
[1998-09-16收稿], 百拇医药
单位：张恩平 山西医科大学公共卫生学院分析中心 太原 030001；李红娟 山西医科大学公共卫生学院儿少卫生教研室)
关键词：孕产妇；婴儿，新生；血浆；胎血；色谱法，气相；花生四烯酸；二十二碳六烯酸类；长链脂肪酸
山西医科大学学报990102 摘要 用气相色谱法对正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸进行了分离测定，结果显示孕妇血浆中DHA百分含量为总脂肪酸的(1.806±1.344)%，脐血中AA、DHA含量显著高于母血，分别为1.8倍和3.5倍。
中图号 Q592.1
长链脂肪酸是生物膜的重要组成成分，它在膜的总脂肪酸中所占的比例含量代表着其营养水平并且决定膜的性质。DHA即4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(C22：6n-3)是人和动物生物膜中最重要的一种n-3长链多不饱和脂肪酸，在神经组织的可兴奋膜磷脂中含量尤为丰富，是维持脑和视网膜功能的必需物质。关于健康正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中的脂肪酸组成国内报道尚少，本文用气相色谱法对太原市区健康正常孕妇51人，妊娠期24～36周，年龄18～35岁，健康正常产妇20人，年龄25～29岁静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸进行了分离测定，结果显示孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸色谱峰均能达到很好分离，分离效果令人满意，完全能满足分析测定的要求。各脂肪酸出峰顺序为：C16∶0(PA)、C18∶0(SA)、C18∶1(OA)、C18∶2(LA)、C18∶3(LNA)、C18∶4(OEA)、C20∶4(AA)、C20∶5(EPA)、C22∶6(DHA)。
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1 实验部分
1.1 仪器与试剂 日本岛津产GC-9A气相色谱仪C-R3A数据处理机。脂肪酸甲酯标准品：C16∶0，C18∶0，C18∶1，C18∶2，C18∶3，C18∶4，C20∶4，C20∶5，C22∶6，均为Sigma公司产品。甲醇、氯仿、硫酸氢氧化钾、苯、石油醚、无水乙醇均为AR级试剂，水为双蒸水。
1.2 色谱条件 色谱柱为2.1m×
3.0mm玻璃柱，内填涂有色谱固定液为10%聚丁二酸二乙二醇酯(DEGS)，担体为Chromosorb-WHP(60～80目)，氢火焰离子化检测器FID，柱温采用程序升温法：100℃(1min)200℃(20min)检测器及进样口温度：250℃。载气高纯N2，60ml/min，燃气H2，1kg/cm2，助燃气空气，0.5kg/cm2。根据保留时间定性，面积归一化法定量。, 百拇医药
1.3 定性定量分析 根据保留时间定性。各取一定量的脂肪酸甲酸标准品混合并稀释到一定浓度配制成混合标准溶液，进样做出标准色谱图(见图1)，分别与样品中各组分的保留时间进行对照，对9种主要长链脂肪酸进行定性。标准品中各脂肪酸的保留时间(min)为：C16∶0(8.52)、C18∶0(11.22)、C18∶1(12.29)、C18∶2(14.20)、C18∶3(17.25)、C18∶4(19.66)、C20∶4(26.42)、C20∶5(33.60)、C22∶6(59.13)。
图1 脂肪酸标准色谱图
定量分析在C-R3A数据处理机上进行，采用面积归一化法直接计算出各组分在脂肪酸总量中所占的重量百分比。
1.4 采样及样品前处理
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1.4.1 采集孕妇空腹静脉血3ml及时离心分离血浆-40℃冻存备分析用。婴儿娩出，脐带结扎后从胎儿侧采集脐血3ml，同时采集产妇肘静脉血3ml，血样及时离心分离血浆，-40℃冻存备分析用。
1.4.2 样品中脂质的提取[1] 用甲醇-氯仿(V∶V=1∶1)酸性条件下提取脂质，操作步骤如下：取血浆0.5ml
振荡0.5min，使蛋白沉淀振荡2min颠倒混和，猛烈振摇提取脂质3000r/min离心5min，吸去上清液下层用滤纸过滤，过滤后用氯仿0.5ml冲洗滤纸一次，收集滤液于N2下吹干。, http://www.100md.com
1.4.3 脂肪酸的甲酯化 采用室温氢氧化钾-甲醇酯化法[2]。向上述残渣中加入沸程为30～60℃的1∶1苯-石油醚0.5ml使之溶解，加入0.4mol/L氢氧化钾-甲醇溶液0.5ml，混匀，室温静置10min沿管壁缓缓加入双蒸水使全部石油醚苯甲酯溶液升至液体上层，如不澄清，可加入1～2滴无水乙醇，吸出上清液，N2下浓缩后上机分析。
2 结果和讨论
本文用气相色谱法对正常孕产妇静脉血浆及新生儿脐血浆中9种主要长链脂肪酸进行了分离测定，其中孕妇血浆中DHA百分含量为总脂肪酸的(1.806±1.344)%与国外有关正常人血中DHA水平[(2.0±0.6)%]报道接近[3]。孕产妇静脉血浆和新生儿脐血浆中二十碳五烯酸(EPA)经测定含量分别占其总脂肪酸的0.2%～0.3%和0.1%，含量很低，无显著差异，属正常范围且此含量不会对婴儿及新生儿的生长和智力发育产生不利影响。其余几种脂肪酸与正常人也较接近，无显著差异。在妊娠中晚期，正是胎儿神经系统发育的关键时期，也是DHA在胎儿脑和视网膜沉积的高峰期，胎儿对DHA的需要量很高，而其自身合成DHA的酶系统又不完全成熟，因而孕妇血中可能应含有较正常人更高水平的DHA，所以平时孕妇多食含DHA较高的食物如动物性食物，鱼贝类水产以及DHA类保健品等等，可有效提高血中DHA水平进而提高胎儿血循环中DHA的供给量。产妇血浆与新生儿脐血浆分析结果则显示：脐血中AA(二十碳四烯酸)，DHA(二十二碳六烯酸)含量显著高于母血(分别为1.8倍和3.5倍)与国外研究结果相一致，C16∶0，C18∶1，C18∶2均显著低于母血，C18∶0，C18∶3，C18∶4二者无显著差异。相关分析结果显示：脐血中C22∶6(DHA)含量与母血中DHA含量高度相关(r2＝0.76，P<0.001)，脐血中C20∶4(AA)含量与母血中AA含量相关有统计意义(P<0.05)，但相关性较小(r2＝0.34)。推测胎儿或胎盘组织可能具有利用这些脂肪酸的前体C18∶2(n-6)和C18∶3(n-3)合成AA、DHA的功能，或者母体血中AA、DHA优先通过胎盘满足胎儿发育的需要，这也表明了AA、DHA对胎儿发育的重要性。所以孕产妇应多食一些含DHA较高的食物或额外补充一定量的DHA类食品，有资料报道常食此类食物或食品人乳中DHA含量会显著增高，以满足胎儿及新生儿生长发育的需要。
, http://www.100md.com
参考文献
1 徐惠珠，张伟利，陈瑞冠.气相色谱法测定人体血液中游离脂肪酸.营养学报，1986，8(2)：165～169
2 满洪升，刘晓芳，仲来福.大鼠肝细胞微粒体及线粒体的脂肪酸组成分析.色谱，1993，11(5)：287～289
3 Harris VS,Muzio F.Fish oil reduces postprandial triglyceride concentrations without accelerating lipid-emulsion removal rates.Am Clin Nutr. 1993， 58： 68～74
[1998-09-16收稿], 百拇医药