空心胶囊中残留氯乙醇的测定方法改进
作者：钱 江 应必文
单位：宁波 宁波市药品检验所
关键词：氯乙醇；大口径毛细管柱；溶剂效应
中国现代应用药学990223摘要 目的：改进空心胶囊中残留氯乙醇的测定方法。方法：利用大口径毛细管柱的“溶剂效应”技术，进行测定。结果：色谱图重现性佳，分离效果好。结论：对氯乙醇的测定中，采用大口径毛细管柱分离效果优于固定液为聚乙二醇-1500的填充柱。
An improved a method for determination of chloroethanol residue in vacant capsules
Qian Jiang(Qian J),Ying Biwen(Ying BW)(Ningbo Institute for Drug Control,Ningbo 315040)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：To improve the method for determination of chloroethanol residue in vacant capsules.METHOD:The determination is based on “solvent effect” by wide-bore capillary column.RESULTS:The method is highly reproducible and the separation can be completed effectively.CONCLUSION:In the determination of chloroethanol,the wide-bore capillary column is better than packed column with stationary phases PEG-1500.
KEY WORDS chloroethanol,wide-bore capillary column,solvent effect
, 百拇医药
氯乙醇为空心胶囊用环氧乙烷消毒过程衍生的有机物质，已证明为亲肝性毒物。卫生部药品标准二部第五册中空心胶囊氯乙醇是采用填充柱气相色谱法测定。因固定液聚乙二醇-1500分子量较小，注入水为溶剂的供试液后，固定液随水峰流失，形成一个很大的拖尾“水峰”。氯乙醇峰往往是在其“水峰”上，常被“水峰”所掩盖，造成测定困难。而且老化时间长，固定液流失快，柱的使用寿命短，测定的重现性差。本文试图用大口径毛细管柱代替填充柱测定氯乙醇的残留量，结果重现性及分离效果均令人满意。
1 仪器和试药
GC-14A气相色谱仪(日本岛津)；DL-800色谱工作站(大连化物所)；氯乙醇(北京化工厂)化学纯；正己烷(宜兴第二化学试剂厂)分析纯。
2 实验方法和结果
2.1 色谱条件
, http://www.100md.com 色谱柱：SE-54大口径弹性石英毛细管柱0.53×30m,1.2μm(Alltech公司)；柱温:53℃;汽化室温度:160℃；FID检测器温度:250℃;量程:101;载气N2:3.2ml/min;补充气N2:60ml/min；燃烧气H2:0.8kg f/cm2;空气:0.5kg f/cm2;分流：关闭；冲洗气N2:17.6ml/min;进样量:0.3μl;AT=2;slope=500。
2.2 空白试验
在上述色谱条件下分别对蒸馏水(见图1)25ml正己烷用水2.0ml萃取水溶液(见图2)，各进样0.3μl，见色谱图。
2.3 样品分析结果
对照品溶液与供试品溶液配制均与部颁标准一致。各进样0.3μl，得到结果见图3及表1。
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 色谱条件选择：对稀溶液样品进行测定时，一般柱温选择比溶剂的沸点低15～30℃，即所谓毛细管柱的“溶剂效应”。但实际对氯乙醇测定时，发现柱温越低分离效果越好，而保留时间则更长，经逐步降温测试，选择柱温53℃较为适宜。柱温低，汽化室温度则不能过低。若在120℃时发现测定的重现性差，这是因为供试溶液中各组分汽化不完全，一些沸点较高的杂质积聚在汽化室，污染了汽化室。而汽化室温度过高，溶剂在柱内冷却冷凝时间长，削弱了溶剂效应使柱效下降。实验结果，汽化室温度为160℃相对填充柱来说，使用毛细管柱时检测室的温度要高的多。这样可以使载气和补充气的温度迅速上升，即使沸点较高的组分也不会污染检测器。这样既避免出现拖尾现象，又消除了过多的杂质堵塞FID检测器的喷嘴。同时，也防止出水峰时氢焰熄火，这样也就可以加大样品的进样量。我们选用的SE-54大口径毛细管柱是药物分析中采用较为普遍的弱极性柱子，我们还使用过固定液为OV-17的中等极性柱子，分离效果不佳。此外，大口径毛细管柱分析样品时，样品溶剂是极性的进样量不宜大于1μl进样量大，氢焰容易熄灭，进样小，又会加大进样误差。我们适当加大燃烧气(H2)的流量，使进样量达到0.3μl。
, http://www.100md.com
图1 蒸馏水色谱图
图2 正己烷的水萃取液色谱图
图3 对照品及供试品色谱图
表1 实验结果 对照品或样品
氯乙醇峰面积
x
对照品
5513
5364
5347
5408
980102
, http://www.100md.com
1948
1946
1905
1933
980103
2343
2358
2388
2363
980201
2076
2093
2111
, http://www.100md.com
2093
980202
2350
2444
2640
2478
3.2 溶剂对测定的影响：在色谱图中Ⅴ、Ⅶ二个峰是水中带来的杂质峰。我们对蒸馏水、HPLC用重蒸水、用高锰酸钾氧化的无氨蒸馏水，甚至对自来水都进行了比较实验，发现无论何种水Ⅴ、Ⅶ二个峰都存在，只是程度不同而已。我们认为这是由于水源受到易挥发的有机物污染，而且不被蒸馏和氧化除去。色谱图中除Ⅴ、Ⅶ二峰和氯乙醇峰(Ⅵ)之外，其余所有的峰(包括在8min以后出现的峰)都是由于正己烷中含有的杂质所带来的，这些峰会对分析造成很大干扰。为此我们重新精制市售正己烷：在正己烷中加入蒸馏水萃取，分离出正己烷，用无水硫酸钠脱水，并蒸出正己烷。这样得到的正己烷对测定的杂质峰会有所减少，但不能清除杂质峰。
, 百拇医药
另外，空心胶囊本身并不干扰氯乙醇的测定，甚至还会吸附部分正己烷中的杂质。
3.3 由于正己烷中的杂质较多，并且许多是沸点较高的有机物。虽然对一次分析不造成影响，但数次进样积累以后，会出现基线不稳或“鬼峰”，给分析造成很大干扰。因此，用程度升温的方法清洗柱内残留有机物。具体程序是在氯乙醇峰出现3min后，以每分钟25℃的速度升高柱温至180℃，保留3min，然后降低柱温至53℃。这样可以保持色谱图的一致性。
3.4 在毛细管柱测定氯乙醇时，氯乙醇峰与各个杂质峰均能比较清楚的分离。而用填充柱分析样品时，几个杂质峰与氯乙醇峰合并在一起，不能得到一个比较纯的峰。比较两法的准确性，毛细管柱的性能大大优于填充柱。随着毛细管柱价格的下降，又不需要自行制作，相信毛细管柱会受到更多的使用者的欢迎。
参考文献
[1] 卫生部药品标准(二部).第五册.1996∶39.
[2] 马剑文，韩永平，沈克温.现代药品检验学.人民军医出版社，1994∶350-402.
[3] M.L.李，F.J.杨，K.D.巴特尔.毛细管柱气相色谱法.化学工业出版社，1988.
收稿日期：1998-06-08, http://www.100md.com
单位：宁波 宁波市药品检验所
关键词：氯乙醇；大口径毛细管柱；溶剂效应
中国现代应用药学990223摘要 目的：改进空心胶囊中残留氯乙醇的测定方法。方法：利用大口径毛细管柱的“溶剂效应”技术，进行测定。结果：色谱图重现性佳，分离效果好。结论：对氯乙醇的测定中，采用大口径毛细管柱分离效果优于固定液为聚乙二醇-1500的填充柱。
An improved a method for determination of chloroethanol residue in vacant capsules
Qian Jiang(Qian J),Ying Biwen(Ying BW)(Ningbo Institute for Drug Control,Ningbo 315040)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：To improve the method for determination of chloroethanol residue in vacant capsules.METHOD:The determination is based on “solvent effect” by wide-bore capillary column.RESULTS:The method is highly reproducible and the separation can be completed effectively.CONCLUSION:In the determination of chloroethanol,the wide-bore capillary column is better than packed column with stationary phases PEG-1500.
KEY WORDS chloroethanol,wide-bore capillary column,solvent effect
, 百拇医药
氯乙醇为空心胶囊用环氧乙烷消毒过程衍生的有机物质，已证明为亲肝性毒物。卫生部药品标准二部第五册中空心胶囊氯乙醇是采用填充柱气相色谱法测定。因固定液聚乙二醇-1500分子量较小，注入水为溶剂的供试液后，固定液随水峰流失，形成一个很大的拖尾“水峰”。氯乙醇峰往往是在其“水峰”上，常被“水峰”所掩盖，造成测定困难。而且老化时间长，固定液流失快，柱的使用寿命短，测定的重现性差。本文试图用大口径毛细管柱代替填充柱测定氯乙醇的残留量，结果重现性及分离效果均令人满意。
1 仪器和试药
GC-14A气相色谱仪(日本岛津)；DL-800色谱工作站(大连化物所)；氯乙醇(北京化工厂)化学纯；正己烷(宜兴第二化学试剂厂)分析纯。
2 实验方法和结果
2.1 色谱条件
, http://www.100md.com 色谱柱：SE-54大口径弹性石英毛细管柱0.53×30m,1.2μm(Alltech公司)；柱温:53℃;汽化室温度:160℃；FID检测器温度:250℃;量程:101;载气N2:3.2ml/min;补充气N2:60ml/min；燃烧气H2:0.8kg f/cm2;空气:0.5kg f/cm2;分流：关闭；冲洗气N2:17.6ml/min;进样量:0.3μl;AT=2;slope=500。
2.2 空白试验
在上述色谱条件下分别对蒸馏水(见图1)25ml正己烷用水2.0ml萃取水溶液(见图2)，各进样0.3μl，见色谱图。
2.3 样品分析结果
对照品溶液与供试品溶液配制均与部颁标准一致。各进样0.3μl，得到结果见图3及表1。
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 色谱条件选择：对稀溶液样品进行测定时，一般柱温选择比溶剂的沸点低15～30℃，即所谓毛细管柱的“溶剂效应”。但实际对氯乙醇测定时，发现柱温越低分离效果越好，而保留时间则更长，经逐步降温测试，选择柱温53℃较为适宜。柱温低，汽化室温度则不能过低。若在120℃时发现测定的重现性差，这是因为供试溶液中各组分汽化不完全，一些沸点较高的杂质积聚在汽化室，污染了汽化室。而汽化室温度过高，溶剂在柱内冷却冷凝时间长，削弱了溶剂效应使柱效下降。实验结果，汽化室温度为160℃相对填充柱来说，使用毛细管柱时检测室的温度要高的多。这样可以使载气和补充气的温度迅速上升，即使沸点较高的组分也不会污染检测器。这样既避免出现拖尾现象，又消除了过多的杂质堵塞FID检测器的喷嘴。同时，也防止出水峰时氢焰熄火，这样也就可以加大样品的进样量。我们选用的SE-54大口径毛细管柱是药物分析中采用较为普遍的弱极性柱子，我们还使用过固定液为OV-17的中等极性柱子，分离效果不佳。此外，大口径毛细管柱分析样品时，样品溶剂是极性的进样量不宜大于1μl进样量大，氢焰容易熄灭，进样小，又会加大进样误差。我们适当加大燃烧气(H2)的流量，使进样量达到0.3μl。
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图1 蒸馏水色谱图
图2 正己烷的水萃取液色谱图
图3 对照品及供试品色谱图
表1 实验结果 对照品或样品
氯乙醇峰面积
x
对照品
5513
5364
5347
5408
980102
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1948
1946
1905
1933
980103
2343
2358
2388
2363
980201
2076
2093
2111
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2093
980202
2350
2444
2640
2478
3.2 溶剂对测定的影响：在色谱图中Ⅴ、Ⅶ二个峰是水中带来的杂质峰。我们对蒸馏水、HPLC用重蒸水、用高锰酸钾氧化的无氨蒸馏水，甚至对自来水都进行了比较实验，发现无论何种水Ⅴ、Ⅶ二个峰都存在，只是程度不同而已。我们认为这是由于水源受到易挥发的有机物污染，而且不被蒸馏和氧化除去。色谱图中除Ⅴ、Ⅶ二峰和氯乙醇峰(Ⅵ)之外，其余所有的峰(包括在8min以后出现的峰)都是由于正己烷中含有的杂质所带来的，这些峰会对分析造成很大干扰。为此我们重新精制市售正己烷：在正己烷中加入蒸馏水萃取，分离出正己烷，用无水硫酸钠脱水，并蒸出正己烷。这样得到的正己烷对测定的杂质峰会有所减少，但不能清除杂质峰。
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另外，空心胶囊本身并不干扰氯乙醇的测定，甚至还会吸附部分正己烷中的杂质。
3.3 由于正己烷中的杂质较多，并且许多是沸点较高的有机物。虽然对一次分析不造成影响，但数次进样积累以后，会出现基线不稳或“鬼峰”，给分析造成很大干扰。因此，用程度升温的方法清洗柱内残留有机物。具体程序是在氯乙醇峰出现3min后，以每分钟25℃的速度升高柱温至180℃，保留3min，然后降低柱温至53℃。这样可以保持色谱图的一致性。
3.4 在毛细管柱测定氯乙醇时，氯乙醇峰与各个杂质峰均能比较清楚的分离。而用填充柱分析样品时，几个杂质峰与氯乙醇峰合并在一起，不能得到一个比较纯的峰。比较两法的准确性，毛细管柱的性能大大优于填充柱。随着毛细管柱价格的下降，又不需要自行制作，相信毛细管柱会受到更多的使用者的欢迎。
参考文献
[1] 卫生部药品标准(二部).第五册.1996∶39.
[2] 马剑文，韩永平，沈克温.现代药品检验学.人民军医出版社，1994∶350-402.
[3] M.L.李，F.J.杨，K.D.巴特尔.毛细管柱气相色谱法.化学工业出版社，1988.
收稿日期：1998-06-08, http://www.100md.com