高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩苷含量
作者：王凯祥 陈圆晰
单位：杭州 杭州尖峰德康药业有限公司
关键词：小柴胡冲剂；黄芩苷；高效液相色谱
中国现代应用药学990218摘要 目的：建立高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩苷含量的方法。方法：采用超声法提取小柴胡冲剂中黄芩苷，高效液相色谱法测定含量。结果：本方法线性方程为：Y=2332X+2743,r=0.9995，线性范围2.31～148μg/ml,精密度试验：RSD=3.37%(n=5)平均加样回收率为97.84%。结论：HPLC法可作为小柴胡冲剂中黄芩苷含量测定方法，本实验为该产的质量控制提供了实验依据。
Determination of baicalin in Xiaochaihu granules by high performance liquid chromatography
, 百拇医药
Wang Kaixiang(Wang KX),Cheng Yuanxi(Cheng YX)(Jianfeng Dekang Pharmaceutical Manufacture,Hangzhou 310023)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an convenient and efficient method for analysis of baicalin in Xiaochaihu granules.METHOD:Baicalin in Xiaochaihu granules was extracted with methanol by ultrasonication,and separated by chromatograph with a C18 column(150mm×6.0mm id) using mobile phase consisting of methanol/50mmol KH2PO4 buffer pH 2.4(50∶50 v/v).The flow rate was 1.0ml/min and UV detection at 275nm.RESULTS:The regression equation was Y=2332X+2743,r=0.9995(2.31～148μg/ml).The average recovery is 97.84% with a RSD 2.51%.CONCLUSION:The proposed method is simple,rapid and accurate for the determination of Baicalin in Xiaochaihu granules.
, 百拇医药
KEY WORDS baicalin,granules,high performance liquid chromatography
小柴胡汤是东汉名医张仲景氏《伤寒论》中的名方，临床主要用于治疗外感疾病邪犯少阳者，具有解表散热、疏肝和胃功效。小柴胡冲剂是根据此古方研制的四类中药，而黄芩是方中主要组分之一。为了更好地控制该药的生产质量，我们选择黄芩的有效成分黄芩苷为指标，建立了高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩苷含量的方法，以进一步完善质量控制体系。
1 仪器与试剂
日本岛津LC-6A、SPD-6AV紫外可见检测器，英谱色谱工作站。黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(含量测定用)，甲醇为色谱纯，其余试剂及药品均为分析纯。
2 方法与结果
, 百拇医药 2.1 色谱条件
色谱柱：CLC-ODS 150mm×6.0mm ID，流动相：甲醇-50mmol磷酸二氢钾缓冲液pH2.4(50∶50)，检测波长275nm，柱温：45℃,流速:1ml/min。
2.2 系统适用性试验
取“标准曲线”项下对照品连续进样5针，黄芩苷的保留时间约为6.1min,峰面积相对标准偏差RSD小于2%,日间RSD小于2.3%。测定峰与其它峰的分离度大于1.5，达到基线分离。柱效以黄芩苷峰计算，理论板数为2884。
2.3 标准曲线制备
精密称取黄芩苷对照品7.4mg于25ml量瓶中，以甲醇溶解定容作为标准贮备液，然后甲醇逐倍稀释。进样10μl,得一系列峰面积值，以浓度对面积作图，其回归方程为:Y=2332X+2743,r=0.9995，线性范围2.31～148μg/ml。黄芩苷标准品色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 黄芩苷标准品色谱图
2.4 样品测定
小柴胡冲剂适量，研成细粉。取约100mg精密称定于25ml量瓶中。加入甲醇至近刻度后，超声提取1h,冷却至室温后用甲醇定容于25ml。滤纸滤过，弃去初滤液，取滤液进样10μl。共测定5个批号样品，结果见表1，样品色谱图见图2。表1 小柴胡冲剂中黄芩苷含量 批号
含量(%)
971028
0.457
971103
0.431
971118
, 百拇医药
0.442
971110
0.488
971112
0.495
图2 样品色谱图
2.5 重复性试验
取同批号样品5份，按样品测定方法进样测定，结果显示，黄芩苷含量的相对标准偏差RSD=3.37%。结果见表2。
2.6 加样回收试验
精密称取样品细粉适量，定量加入黄芩苷对照品，依法测定，结果见表3。表2 精密度试验结果(n=5) 样品
, 百拇医药
含量(%)
RSD(%)
1
0.509
2
0.498
3
0.492
3.37
4
0.499
5
0.465
, 百拇医药
表3 加样回收试验结果(n=5) 制剂中量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
397
, 百拇医药
480
868
98.13
387
480
839
94.17
387
480
852
96.88
97.84
2.51
, 百拇医药
392
480
870
99.58
393
480
875
100.42
2.7 空白样品试验
按样品制备方法制备缺黄芩样品，进样，结果见图3。
图3 缺黄芩样品色谱图
3 讨 论
3.1 曾采用以碱水提取，酸化后以乙酸乙酯萃取，挥干溶剂，加定量甲醇溶解后进样的方法进行测定，但处理过程繁琐。小柴胡冲剂的主辅料为蔗糖，以甲醇为溶剂，经超声法提取，提取液颜色较浅，经滤过后可直接进样。
3.2 中成药中黄芩苷的测定方法很多，如分光光度法，薄层扫描法，二阶导数光谱法等。高效液相色谱法以其速度快、准确性高、分离效果好等优点，更适合制剂中黄芩苷含量测定。 收稿日期：1998-01-04, http://www.100md.com
单位：杭州 杭州尖峰德康药业有限公司
关键词：小柴胡冲剂；黄芩苷；高效液相色谱
中国现代应用药学990218摘要 目的：建立高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩苷含量的方法。方法：采用超声法提取小柴胡冲剂中黄芩苷，高效液相色谱法测定含量。结果：本方法线性方程为：Y=2332X+2743,r=0.9995，线性范围2.31～148μg/ml,精密度试验：RSD=3.37%(n=5)平均加样回收率为97.84%。结论：HPLC法可作为小柴胡冲剂中黄芩苷含量测定方法，本实验为该产的质量控制提供了实验依据。
Determination of baicalin in Xiaochaihu granules by high performance liquid chromatography
, 百拇医药
Wang Kaixiang(Wang KX),Cheng Yuanxi(Cheng YX)(Jianfeng Dekang Pharmaceutical Manufacture,Hangzhou 310023)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an convenient and efficient method for analysis of baicalin in Xiaochaihu granules.METHOD:Baicalin in Xiaochaihu granules was extracted with methanol by ultrasonication,and separated by chromatograph with a C18 column(150mm×6.0mm id) using mobile phase consisting of methanol/50mmol KH2PO4 buffer pH 2.4(50∶50 v/v).The flow rate was 1.0ml/min and UV detection at 275nm.RESULTS:The regression equation was Y=2332X+2743,r=0.9995(2.31～148μg/ml).The average recovery is 97.84% with a RSD 2.51%.CONCLUSION:The proposed method is simple,rapid and accurate for the determination of Baicalin in Xiaochaihu granules.
, 百拇医药
KEY WORDS baicalin,granules,high performance liquid chromatography
小柴胡汤是东汉名医张仲景氏《伤寒论》中的名方，临床主要用于治疗外感疾病邪犯少阳者，具有解表散热、疏肝和胃功效。小柴胡冲剂是根据此古方研制的四类中药，而黄芩是方中主要组分之一。为了更好地控制该药的生产质量，我们选择黄芩的有效成分黄芩苷为指标，建立了高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩苷含量的方法，以进一步完善质量控制体系。
1 仪器与试剂
日本岛津LC-6A、SPD-6AV紫外可见检测器，英谱色谱工作站。黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(含量测定用)，甲醇为色谱纯，其余试剂及药品均为分析纯。
2 方法与结果
, 百拇医药 2.1 色谱条件
色谱柱：CLC-ODS 150mm×6.0mm ID，流动相：甲醇-50mmol磷酸二氢钾缓冲液pH2.4(50∶50)，检测波长275nm，柱温：45℃,流速:1ml/min。
2.2 系统适用性试验
取“标准曲线”项下对照品连续进样5针，黄芩苷的保留时间约为6.1min,峰面积相对标准偏差RSD小于2%,日间RSD小于2.3%。测定峰与其它峰的分离度大于1.5，达到基线分离。柱效以黄芩苷峰计算，理论板数为2884。
2.3 标准曲线制备
精密称取黄芩苷对照品7.4mg于25ml量瓶中，以甲醇溶解定容作为标准贮备液，然后甲醇逐倍稀释。进样10μl,得一系列峰面积值，以浓度对面积作图，其回归方程为:Y=2332X+2743,r=0.9995，线性范围2.31～148μg/ml。黄芩苷标准品色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 黄芩苷标准品色谱图
2.4 样品测定
小柴胡冲剂适量，研成细粉。取约100mg精密称定于25ml量瓶中。加入甲醇至近刻度后，超声提取1h,冷却至室温后用甲醇定容于25ml。滤纸滤过，弃去初滤液，取滤液进样10μl。共测定5个批号样品，结果见表1，样品色谱图见图2。表1 小柴胡冲剂中黄芩苷含量 批号
含量(%)
971028
0.457
971103
0.431
971118
, 百拇医药
0.442
971110
0.488
971112
0.495
图2 样品色谱图
2.5 重复性试验
取同批号样品5份，按样品测定方法进样测定，结果显示，黄芩苷含量的相对标准偏差RSD=3.37%。结果见表2。
2.6 加样回收试验
精密称取样品细粉适量，定量加入黄芩苷对照品，依法测定，结果见表3。表2 精密度试验结果(n=5) 样品
, 百拇医药
含量(%)
RSD(%)
1
0.509
2
0.498
3
0.492
3.37
4
0.499
5
0.465
, 百拇医药
表3 加样回收试验结果(n=5) 制剂中量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
397
, 百拇医药
480
868
98.13
387
480
839
94.17
387
480
852
96.88
97.84
2.51
, 百拇医药
392
480
870
99.58
393
480
875
100.42
2.7 空白样品试验
按样品制备方法制备缺黄芩样品，进样，结果见图3。
图3 缺黄芩样品色谱图
3 讨 论
3.1 曾采用以碱水提取，酸化后以乙酸乙酯萃取，挥干溶剂，加定量甲醇溶解后进样的方法进行测定，但处理过程繁琐。小柴胡冲剂的主辅料为蔗糖，以甲醇为溶剂，经超声法提取，提取液颜色较浅，经滤过后可直接进样。
3.2 中成药中黄芩苷的测定方法很多，如分光光度法，薄层扫描法，二阶导数光谱法等。高效液相色谱法以其速度快、准确性高、分离效果好等优点，更适合制剂中黄芩苷含量测定。 收稿日期：1998-01-04, http://www.100md.com