肾康片质量标准的研究
作者：石 娟 李 艳 陈慧娟 常 春 岐 琳
单位：
关键词：肾康片；质量标准；薄层色谱法；黄芪甲苷
中国现代应用药学990217摘要 目的：研究肾康片的质量标准并控制该制剂的质量。方法：用薄层色谱法鉴别了肾康片中的黄芪、山茱萸、桑寄生及丹参，用薄层色谱法限量检查了该制剂中的乌头碱，用双波长薄层扫描法测定了该制剂中黄芪甲苷的含量。结果：乌头碱限量符合中国药典规定，黄芪甲苷的平均回收率为97.5%，其RSD为1.43%(n=5)。结论：本文的结果显示出这些方法可用于控制该制剂的质量，方法灵敏、简便、专属、准确。
Study on quality standard for Shenkang tablets(Radix astragall,fructus corni,etc.)
, 百拇医药
Shi Juan(Shi J),Li Yan(Li Y),Chen Huijuan(Chen HJ),et al(Xian Medical University,School of Pharmacy,Xian 710061)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study quality standard of shenkang tablets and to control its quality.METHODS:Radix Astragali、Fructus、Corni、Herba Taxilli and Radix Salviae Miltiorrhizae in Shenkang tablets were identified with TLC;The amount of aconitine in Radix Aconiti Lateralis Preparata was also limited with TLC;Astragaloside in Shenkang tablets was determined with Dual Wavelength TLCS.RESULTS:Limit of the amount of aconitine accorded with general rule of Chinese pharmacopoeia.The average recovery of astragaloside was 97.5% with RSD 1.43%(n=5).CONCLUSION:The results show that these methods could be used in controlling quality of Shenkang tablets and these methods are sensitive,simple,specific and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS Shenkang tablets,quality standard,TLC,astragaloside
1 仪器与试剂
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)；紫外灯(上海顾村电光仪器厂)；微量进样器(上海安亭微量进样器厂)。
黄芪甲苷、熊果酸、槲皮素、原儿茶醛及乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所)；肾康片(西安国药厂)；药材(西安市药材公司)。
薄层板制备：取青岛海洋化工厂生产的硅胶G+0.3%CMC-Na(或0.5% NaOH)按1∶3混合研匀，涂布成0.5mm厚的薄层板，阴干,105℃活化1h,置干燥器内备用。
实验所用试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
, 百拇医药
2.1 黄芪的鉴别：取本品6片，剥去糖衣，研细。照含量测定供试品溶液制备方法制备供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。精密称取黄芪甲苷对照品10.14mg,用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，制成每1ml中含1.014mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5μl,分别点样于同一硅胶G-0.3% CMC-Na薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)(10℃以下放置过夜)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5min,供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，阴性对照无干扰，结果见图1。
图1 黄芪TLC图谱
1-阴性对照；2-黄芪甲苷；3-样品
2.2 山茱萸的鉴别：取本品6片，剥去糖衣，研细。加乙醚适量，置水浴上回流2h,提取液回收乙醚至干，残留物用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次15ml(约浸泡2min),倾去石油醚，残留物加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液微热使溶解，移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液各4μl，熊果酸对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G-0.3%CMC-Na薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃烘5～7min,供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点，结果见图2
, 百拇医药
图2 山茱萸TLC图谱
1-阴性对照；2-熊果酸；3-样品
2.3 桑寄生的鉴别：取本品20片，剥去糖衣，研细。加甲醇-水(1∶1)60ml,加热回流1h,趁热过滤，滤液浓缩至约20ml后，加水10ml稀释，再加稀硫酸约0.5ml,煮沸回流1h后，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次30ml,合并乙酸乙酯液，浓缩至约1ml,作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取槲皮素对照品，加醋酸乙酯溶解，制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各6μl,槲皮素对照品溶液5μl,分别点于同一用0.5%NaOH制成的硅胶G薄层板上，以甲苯(水饱和)-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% AlCl3乙醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同的荧光斑点，阴性对照无干扰，结果见图3。
, 百拇医药
图3 桑寄生TLC图谱
1-阴性对照；2-槲皮素；3-样品
2.4 丹参的鉴别：取本品30片，剥去糖衣，研细。加70%乙醇60ml,振摇溶解，放置12h,过滤，滤液挥去乙醇，加水适量，用稀HCl调pH为2,用乙酸乙酯萃取4次(15,15,10,10ml),将乙酸乙酯提取液合并，蒸干，残渣用乙醇溶解并定容至2ml,作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取原儿茶醛对照品，用乙醇制成每1ml含1.5mg的溶液作为对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液各5μl,原儿茶醛对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G-0.3%CMC-Na薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2% FeCl3乙醇溶液，热风吹至显色清晰。供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图4。
3 限量检查附子中乌头碱
, 百拇医药
取本品111片，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚150ml,振摇10min,加氨试液10ml,振摇30min,放置2h,分取醚层，蒸干，加无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液各6μl,乌头碱对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G-0.3%CMC-Na薄层板上，以苯-醋酸乙酯-二乙胺(7∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，斑点颜色应浅于对照品斑点，阴性对照无干扰，结果见图5。
图4 丹参TLC图谱
1-阴性对照；2-原儿茶醛；3-样品
图5 附子TLC图谱
1-阴性对照；2-乌头碱；3-样品
, 百拇医药
4 黄芪甲苷含量测定
4.1 色谱条件：硅胶G-0.3% CMC-Na薄层板，展开剂：氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)(10℃以下放置过夜)的下层溶液,λS=530nm,λR=700nm,SX=3,狭缝宽度1.2×1.2mm2,双波长反射法锯齿扫描。
4.2 供试品溶液及对照品溶液的制备：取本品10片，剥去糖衣，精密称定，研匀。取约6片重，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，再加适量甲醇，回流4h,提取液浓缩至干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次(20,20,20ml),合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次(20,20ml),弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加5ml水使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm,长12cm),以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，用70%乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品10.14mg,用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，制成每1ml中含1.014mg的溶液，作为对照品溶液。
, 百拇医药
4.3 线性关系考察：精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(1.014mg/ml),在同一薄层板上分别点1,2,3,5,7μl,照黄芪鉴别条件展开，显色后，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照扫描条件扫描测定，以峰面积积分值为纵坐标，以点样量为横坐标绘制标准曲线，得到直线回归方程为:A=5660.99+1918.17c,r=0.9988(n=3)。结果表明：黄芪甲苷在1.014～7.098μg范围内线性关系良好。因线性方程不过原点，故采用外标两点法测定。
4.4 精密度试验：在同一块薄层板上点5个相同量的黄芪甲苷对照品斑点(4μl),测得板内峰面积积分值的RSD为1.23%。
4.5 重复性试验：在同一块薄层板上点5个相同量的供试品斑点(15μl),测得板内峰面积积分值的RSD为0.79%。
4.6 斑点稳定性试验：取黄芪甲苷对照品溶液点于薄层板上，依法操作，在1，2，4h分别扫描测定，结果表明在4h内斑点稳定。
, 百拇医药
4.7 样品测定：精密吸取供试品溶液15μl及对照品溶液3,5μl分别交叉点于同一薄层板上，依法展开和测定。测得3批样品的结果见表1。表1 肾康片中黄芪甲苷含量测定结果(n=5) 批 号
黄芪甲苷含量(%)
RSD(%)
950516
0.0219
0.63
96118-1
0.0178
1.30
96118-2
, http://www.100md.com
0.0176
1.88
4.8 回收率考察：取同一批号的样品6份，每份约1.05g,精密称定，其中5份中精密加入黄芪甲苷对照品溶液(1.014mg/ml)0.2ml,另一份不加对照品溶液，照供试品溶液制备方法制备，定容至2ml,点样量均为15μl，展开，显色，扫描，测定，回收率测定结果见表2。表2 回收率测定结果 对照品加入
量(μg)
对照品回收
量(μg)
回收率
(%)
平均回收率
, 百拇医药
(%)
RSD
(%)
202.8
197.5
97.4
202.8
199.1
98.2
202.8
195.7
96.5
97.5
, 百拇医药
1.43
202.8
201.8
99.5
202.8
194.7
96.0
5 讨 论
采用薄层色谱法对肾康片中的几种主药进行了鉴别、检查和含量测定，操作简便、分离效果满意，为质量控制提供了较好的方法。
黄芪为肾康片的君药，因而选择黄芪中黄芪甲苷的含量测定作为该药的定量指标。附子为有毒药材，对其中乌头碱进行了限量检查。
温度对黄芪甲苷薄层色谱结果影响很大。实验结果表明温度在18～28℃为宜，温度过高过低都会产生拖尾，且斑点清晰度也受到影响，不利于定量测定。收稿日期：1998-03-31, 百拇医药
单位：
关键词：肾康片；质量标准；薄层色谱法；黄芪甲苷
中国现代应用药学990217摘要 目的：研究肾康片的质量标准并控制该制剂的质量。方法：用薄层色谱法鉴别了肾康片中的黄芪、山茱萸、桑寄生及丹参，用薄层色谱法限量检查了该制剂中的乌头碱，用双波长薄层扫描法测定了该制剂中黄芪甲苷的含量。结果：乌头碱限量符合中国药典规定，黄芪甲苷的平均回收率为97.5%，其RSD为1.43%(n=5)。结论：本文的结果显示出这些方法可用于控制该制剂的质量，方法灵敏、简便、专属、准确。
Study on quality standard for Shenkang tablets(Radix astragall,fructus corni,etc.)
, 百拇医药
Shi Juan(Shi J),Li Yan(Li Y),Chen Huijuan(Chen HJ),et al(Xian Medical University,School of Pharmacy,Xian 710061)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study quality standard of shenkang tablets and to control its quality.METHODS:Radix Astragali、Fructus、Corni、Herba Taxilli and Radix Salviae Miltiorrhizae in Shenkang tablets were identified with TLC;The amount of aconitine in Radix Aconiti Lateralis Preparata was also limited with TLC;Astragaloside in Shenkang tablets was determined with Dual Wavelength TLCS.RESULTS:Limit of the amount of aconitine accorded with general rule of Chinese pharmacopoeia.The average recovery of astragaloside was 97.5% with RSD 1.43%(n=5).CONCLUSION:The results show that these methods could be used in controlling quality of Shenkang tablets and these methods are sensitive,simple,specific and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS Shenkang tablets,quality standard,TLC,astragaloside
1 仪器与试剂
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)；紫外灯(上海顾村电光仪器厂)；微量进样器(上海安亭微量进样器厂)。
黄芪甲苷、熊果酸、槲皮素、原儿茶醛及乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所)；肾康片(西安国药厂)；药材(西安市药材公司)。
薄层板制备：取青岛海洋化工厂生产的硅胶G+0.3%CMC-Na(或0.5% NaOH)按1∶3混合研匀，涂布成0.5mm厚的薄层板，阴干,105℃活化1h,置干燥器内备用。
实验所用试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
, 百拇医药
2.1 黄芪的鉴别：取本品6片，剥去糖衣，研细。照含量测定供试品溶液制备方法制备供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。精密称取黄芪甲苷对照品10.14mg,用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，制成每1ml中含1.014mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5μl,分别点样于同一硅胶G-0.3% CMC-Na薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)(10℃以下放置过夜)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5min,供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，阴性对照无干扰，结果见图1。
图1 黄芪TLC图谱
1-阴性对照；2-黄芪甲苷；3-样品
2.2 山茱萸的鉴别：取本品6片，剥去糖衣，研细。加乙醚适量，置水浴上回流2h,提取液回收乙醚至干，残留物用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次15ml(约浸泡2min),倾去石油醚，残留物加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液微热使溶解，移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液各4μl，熊果酸对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G-0.3%CMC-Na薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃烘5～7min,供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点，结果见图2
, 百拇医药
图2 山茱萸TLC图谱
1-阴性对照；2-熊果酸；3-样品
2.3 桑寄生的鉴别：取本品20片，剥去糖衣，研细。加甲醇-水(1∶1)60ml,加热回流1h,趁热过滤，滤液浓缩至约20ml后，加水10ml稀释，再加稀硫酸约0.5ml,煮沸回流1h后，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次30ml,合并乙酸乙酯液，浓缩至约1ml,作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取槲皮素对照品，加醋酸乙酯溶解，制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各6μl,槲皮素对照品溶液5μl,分别点于同一用0.5%NaOH制成的硅胶G薄层板上，以甲苯(水饱和)-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% AlCl3乙醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同的荧光斑点，阴性对照无干扰，结果见图3。
, 百拇医药
图3 桑寄生TLC图谱
1-阴性对照；2-槲皮素；3-样品
2.4 丹参的鉴别：取本品30片，剥去糖衣，研细。加70%乙醇60ml,振摇溶解，放置12h,过滤，滤液挥去乙醇，加水适量，用稀HCl调pH为2,用乙酸乙酯萃取4次(15,15,10,10ml),将乙酸乙酯提取液合并，蒸干，残渣用乙醇溶解并定容至2ml,作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取原儿茶醛对照品，用乙醇制成每1ml含1.5mg的溶液作为对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液各5μl,原儿茶醛对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G-0.3%CMC-Na薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2% FeCl3乙醇溶液，热风吹至显色清晰。供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图4。
3 限量检查附子中乌头碱
, 百拇医药
取本品111片，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚150ml,振摇10min,加氨试液10ml,振摇30min,放置2h,分取醚层，蒸干，加无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取缺味配制的模拟制剂，同法制备，作为阴性对照溶液。再取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液各6μl,乌头碱对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G-0.3%CMC-Na薄层板上，以苯-醋酸乙酯-二乙胺(7∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，斑点颜色应浅于对照品斑点，阴性对照无干扰，结果见图5。
图4 丹参TLC图谱
1-阴性对照；2-原儿茶醛；3-样品
图5 附子TLC图谱
1-阴性对照；2-乌头碱；3-样品
, 百拇医药
4 黄芪甲苷含量测定
4.1 色谱条件：硅胶G-0.3% CMC-Na薄层板，展开剂：氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)(10℃以下放置过夜)的下层溶液,λS=530nm,λR=700nm,SX=3,狭缝宽度1.2×1.2mm2,双波长反射法锯齿扫描。
4.2 供试品溶液及对照品溶液的制备：取本品10片，剥去糖衣，精密称定，研匀。取约6片重，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，再加适量甲醇，回流4h,提取液浓缩至干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次(20,20,20ml),合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次(20,20ml),弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加5ml水使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm,长12cm),以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，用70%乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品10.14mg,用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，制成每1ml中含1.014mg的溶液，作为对照品溶液。
, 百拇医药
4.3 线性关系考察：精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(1.014mg/ml),在同一薄层板上分别点1,2,3,5,7μl,照黄芪鉴别条件展开，显色后，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照扫描条件扫描测定，以峰面积积分值为纵坐标，以点样量为横坐标绘制标准曲线，得到直线回归方程为:A=5660.99+1918.17c,r=0.9988(n=3)。结果表明：黄芪甲苷在1.014～7.098μg范围内线性关系良好。因线性方程不过原点，故采用外标两点法测定。
4.4 精密度试验：在同一块薄层板上点5个相同量的黄芪甲苷对照品斑点(4μl),测得板内峰面积积分值的RSD为1.23%。
4.5 重复性试验：在同一块薄层板上点5个相同量的供试品斑点(15μl),测得板内峰面积积分值的RSD为0.79%。
4.6 斑点稳定性试验：取黄芪甲苷对照品溶液点于薄层板上，依法操作，在1，2，4h分别扫描测定，结果表明在4h内斑点稳定。
, 百拇医药
4.7 样品测定：精密吸取供试品溶液15μl及对照品溶液3,5μl分别交叉点于同一薄层板上，依法展开和测定。测得3批样品的结果见表1。表1 肾康片中黄芪甲苷含量测定结果(n=5) 批 号
黄芪甲苷含量(%)
RSD(%)
950516
0.0219
0.63
96118-1
0.0178
1.30
96118-2
, http://www.100md.com
0.0176
1.88
4.8 回收率考察：取同一批号的样品6份，每份约1.05g,精密称定，其中5份中精密加入黄芪甲苷对照品溶液(1.014mg/ml)0.2ml,另一份不加对照品溶液，照供试品溶液制备方法制备，定容至2ml,点样量均为15μl，展开，显色，扫描，测定，回收率测定结果见表2。表2 回收率测定结果 对照品加入
量(μg)
对照品回收
量(μg)
回收率
(%)
平均回收率
, 百拇医药
(%)
RSD
(%)
202.8
197.5
97.4
202.8
199.1
98.2
202.8
195.7
96.5
97.5
, 百拇医药
1.43
202.8
201.8
99.5
202.8
194.7
96.0
5 讨 论
采用薄层色谱法对肾康片中的几种主药进行了鉴别、检查和含量测定，操作简便、分离效果满意，为质量控制提供了较好的方法。
黄芪为肾康片的君药，因而选择黄芪中黄芪甲苷的含量测定作为该药的定量指标。附子为有毒药材，对其中乌头碱进行了限量检查。
温度对黄芪甲苷薄层色谱结果影响很大。实验结果表明温度在18～28℃为宜，温度过高过低都会产生拖尾，且斑点清晰度也受到影响，不利于定量测定。收稿日期：1998-03-31, 百拇医药