反相高效液相色谱法测定气喘片中三组分的含量
作者：费艳秋 杨惠娣 陆国红 施安国 王平全
单位：上海第二医科大学附属仁济医院 上海200001
关键词：反相高效液相色谱法；气喘片；含量测定
中国医院药学杂志990310 摘要 目的:研究气喘片中3种主要成份的含量测定方法。方法:反相高效液相色谱法。结果:平均回收率(n=5)氨茶碱为101.1%，盐酸麻黄碱为97.0%，盐酸苯海拉明为100.8%，日间日内RSD均小于1.6%。结论:本法具有操作简便，重复性好，灵敏度高等特点。
Determination of three components in antiasthmatic tablet with RP-HPLC
Fei Yanqiu,Yang Huidi,Lu Guohong,Shi Anguo,Wang Pinquan (Division of Clinical Pharmacy of Renji Hospital Shanghai Second Medical University,Shanghai 200001)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE:To determine the content of Anti-asthmatic tablet.METHODS:RP-HPLC.RESULTS:The average recoveries of aminophylline,ephedrine hydrochloride and diphenhydramine hydrochloride were 101.1%，97.0% and 100.8% separately.RSD for within day and between days was less than 1.6%.CONCLUSIONS:The method was simple,accurate.
KEY WORDS RP-HPLC，anti-asthmaic tablet,content determination
气喘片是我院的一个传统自制制剂，主要用于治疗支气管哮喘，临床疗效较好，很受患者的欢迎。其主要成份为氨茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明。本文采用反相高效液相色谱系统，外标法测定片中三组分的含量。实验表明，本法具有操作方便的特点，分离度、回收率、精密度和准确度均较好。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
Millennium 2010系统、510双泵、Waters 486检测器、六通阀(美国Water公司)。氨茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明原料(上海九福药业公司赵巷分厂，批号分别为980114，971204，971218)，甲醇(上海吴泾化工厂，批号980106)为HPLC纯，三乙胺、磷酸均为分析纯，水为重蒸馏水。
2 处方
每片含氨茶碱0.5 g，盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明各0.025 g。
3 测定方法
3.1 色谱条件 色谱柱：Lichrosorb RP-C18柱，300 mm×3.9 mm，10 μm(中科院科申科技服务)；柱温：20 ℃；流动相：甲醇-0.2%三乙胺水溶液(1∶1)[1]，以50%磷酸调pH至6.6(色谱图1)(测苯海拉明时调至2.5，柱温加高至60 ℃，色谱图2)；六通阀后的载样圈体积为50 μl，流速1.0 ml.min-1，波长254 nm。
, 百拇医药
图 1 氨茶碱及麻黄碱色谱图
1 氨茶碱 2 麻黄碱
图 2 苯海拉明的色谱图
1 苯海拉明
3.2 线性关系考察 分别按处方比例精密称取氨茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明，同置于100 ml量瓶中，加水-甲醇(1∶1)的溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制成储备液，再配成一系列浓度的对照品溶液(氨茶碱：5.3×10-4～3.2×10-3 mg.ml-1；盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明：1.2×10-4～7.5×10-4 mg.ml-1。在上述色谱条件下分别精密进样10，50，50 μl，以浓度C对峰面积A进行线性回归，得回归方程为：氨茶碱A氨=2.28×106 C氨-1.92×105，r氨=0.999 2；盐酸麻黄碱A麻=1.22×106 C麻-1.39×104，r麻=1.000 0；盐酸苯海拉明A苯=3.58×105 C苯-5.41×103，r苯=0.999 9。
, 百拇医药
3.3 方法精密度 取上述储备液中间点所制成的测试液，连续进样10次，每次分别精密进样10，50，50 μl。氨茶碱、盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明的相对标准偏差(RSD)分别为0.98%，1.20%，1.12%。
3.4 日内差、日间差试验 氨茶碱、盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明高、中、低浓度的日内、日间RSD如表1所示。
表 1 日内、日间差测定结果(n=5) 浓度
氨茶碱
盐酸麻黄碱
盐酸苯海拉明
日内
RSD/%
日间
, 百拇医药
RSD/%
日内
RSD/%
日间
RSD/%
日内
RSD/%
日间
RSD/%
低
0.54
0.46
1.23
, 百拇医药
1.60
0.28
0.36
中
0.28
1.30
0.72
0.61
0.65
0.78
高
0.18
1.15
, http://www.100md.com
0.62
0.41
0.57
1.15
3.5 回收率试验 按处方量精密称取氨茶碱、盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明对照品及辅料适量。各组分在±10%范围内变动，制成5份不同浓度的样品。分别置于100 ml量瓶中，加上述溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释到刻度，过滤，弃去初滤液。每次分别精密进样10，50，50 μl滤液，外标法测定含量，计算回收率，结果见表2。表 2 回收率测定结果(n=5) 样品
加入量
mg
测得量
mg
, http://www.100md.com
平均回收率
%
RSD
%
氨茶碱
1
99.8
102.55
101.05
1.26
2
99.9
99.80
, 百拇医药
3
100.1
99.80
4
103.0
104.29
5
99.9
101.52
盐酸麻黄素
1
25.5
24.45
, http://www.100md.com
97.01
0.91
2
25.1
24.43
3
25.5
24.56
4
24.9
24.39
5
25.1
, 百拇医药
24.50
盐酸苯海拉明
1
25.8
26.05
100.83
1.14
2
26.3
26.42
3
27.0
26.89
, 百拇医药
4
24.9
25.02
5
25.3
25.98
3.6 样品含量测定 取不同批号的气喘片各10片，精密称定，研成粉末，分别精密称取相当于1片药片重量的粉末，置于100 ml容量瓶中，加上述溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释至刻度，过滤，弃去初滤液。每次分别精密进样10，50，50 μl滤液，外标法测定其百分标示量，结果见表3。表 3 样品测定结果(n=5) 批号
氨茶碱
盐酸麻黄碱
, 百拇医药
盐酸苯海拉明
RSD
RSD
RSD
%
%
%
961001
90.91
0.27
96.72
1.47
92.86
, 百拇医药
0.10
971001
92.09
0.70
101.57
1.21
98.76
0.45
971002
92.25
0.61
96.57
0.56
, 百拇医药
2.31
0.99
4 讨论
由于气喘片中氨茶碱和盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明的处方量相差很大，故采用两种进样量(10，50 μl)。
由于在前一种色谱条件下，盐酸苯海拉明在20 min内无法出峰，而它又对酸性较敏感，故通过调节pH和加高柱温来加快其出峰。
参考文献
1 姚小梅，李康乐.高效液相色谱法同时测定呋麻滴鼻液中两组分的含量.中国医院药学杂志，1996，16(2)：78
(1998年4月20日收稿), 百拇医药
单位：上海第二医科大学附属仁济医院 上海200001
关键词：反相高效液相色谱法；气喘片；含量测定
中国医院药学杂志990310 摘要 目的:研究气喘片中3种主要成份的含量测定方法。方法:反相高效液相色谱法。结果:平均回收率(n=5)氨茶碱为101.1%，盐酸麻黄碱为97.0%，盐酸苯海拉明为100.8%，日间日内RSD均小于1.6%。结论:本法具有操作简便，重复性好，灵敏度高等特点。
Determination of three components in antiasthmatic tablet with RP-HPLC
Fei Yanqiu,Yang Huidi,Lu Guohong,Shi Anguo,Wang Pinquan (Division of Clinical Pharmacy of Renji Hospital Shanghai Second Medical University,Shanghai 200001)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE:To determine the content of Anti-asthmatic tablet.METHODS:RP-HPLC.RESULTS:The average recoveries of aminophylline,ephedrine hydrochloride and diphenhydramine hydrochloride were 101.1%，97.0% and 100.8% separately.RSD for within day and between days was less than 1.6%.CONCLUSIONS:The method was simple,accurate.
KEY WORDS RP-HPLC，anti-asthmaic tablet,content determination
气喘片是我院的一个传统自制制剂，主要用于治疗支气管哮喘，临床疗效较好，很受患者的欢迎。其主要成份为氨茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明。本文采用反相高效液相色谱系统，外标法测定片中三组分的含量。实验表明，本法具有操作方便的特点，分离度、回收率、精密度和准确度均较好。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
Millennium 2010系统、510双泵、Waters 486检测器、六通阀(美国Water公司)。氨茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明原料(上海九福药业公司赵巷分厂，批号分别为980114，971204，971218)，甲醇(上海吴泾化工厂，批号980106)为HPLC纯，三乙胺、磷酸均为分析纯，水为重蒸馏水。
2 处方
每片含氨茶碱0.5 g，盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明各0.025 g。
3 测定方法
3.1 色谱条件 色谱柱：Lichrosorb RP-C18柱，300 mm×3.9 mm，10 μm(中科院科申科技服务)；柱温：20 ℃；流动相：甲醇-0.2%三乙胺水溶液(1∶1)[1]，以50%磷酸调pH至6.6(色谱图1)(测苯海拉明时调至2.5，柱温加高至60 ℃，色谱图2)；六通阀后的载样圈体积为50 μl，流速1.0 ml.min-1，波长254 nm。
, 百拇医药
图 1 氨茶碱及麻黄碱色谱图
1 氨茶碱 2 麻黄碱
图 2 苯海拉明的色谱图
1 苯海拉明
3.2 线性关系考察 分别按处方比例精密称取氨茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明，同置于100 ml量瓶中，加水-甲醇(1∶1)的溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制成储备液，再配成一系列浓度的对照品溶液(氨茶碱：5.3×10-4～3.2×10-3 mg.ml-1；盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明：1.2×10-4～7.5×10-4 mg.ml-1。在上述色谱条件下分别精密进样10，50，50 μl，以浓度C对峰面积A进行线性回归，得回归方程为：氨茶碱A氨=2.28×106 C氨-1.92×105，r氨=0.999 2；盐酸麻黄碱A麻=1.22×106 C麻-1.39×104，r麻=1.000 0；盐酸苯海拉明A苯=3.58×105 C苯-5.41×103，r苯=0.999 9。
, 百拇医药
3.3 方法精密度 取上述储备液中间点所制成的测试液，连续进样10次，每次分别精密进样10，50，50 μl。氨茶碱、盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明的相对标准偏差(RSD)分别为0.98%，1.20%，1.12%。
3.4 日内差、日间差试验 氨茶碱、盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明高、中、低浓度的日内、日间RSD如表1所示。
表 1 日内、日间差测定结果(n=5) 浓度
氨茶碱
盐酸麻黄碱
盐酸苯海拉明
日内
RSD/%
日间
, 百拇医药
RSD/%
日内
RSD/%
日间
RSD/%
日内
RSD/%
日间
RSD/%
低
0.54
0.46
1.23
, 百拇医药
1.60
0.28
0.36
中
0.28
1.30
0.72
0.61
0.65
0.78
高
0.18
1.15
, http://www.100md.com
0.62
0.41
0.57
1.15
3.5 回收率试验 按处方量精密称取氨茶碱、盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明对照品及辅料适量。各组分在±10%范围内变动，制成5份不同浓度的样品。分别置于100 ml量瓶中，加上述溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释到刻度，过滤，弃去初滤液。每次分别精密进样10，50，50 μl滤液，外标法测定含量，计算回收率，结果见表2。表 2 回收率测定结果(n=5) 样品
加入量
mg
测得量
mg
, http://www.100md.com
平均回收率
%
RSD
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氨茶碱
1
99.8
102.55
101.05
1.26
2
99.9
99.80
, 百拇医药
3
100.1
99.80
4
103.0
104.29
5
99.9
101.52
盐酸麻黄素
1
25.5
24.45
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97.01
0.91
2
25.1
24.43
3
25.5
24.56
4
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24.39
5
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24.50
盐酸苯海拉明
1
25.8
26.05
100.83
1.14
2
26.3
26.42
3
27.0
26.89
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4
24.9
25.02
5
25.3
25.98
3.6 样品含量测定 取不同批号的气喘片各10片，精密称定，研成粉末，分别精密称取相当于1片药片重量的粉末，置于100 ml容量瓶中，加上述溶剂适量，超声助溶，用溶剂稀释至刻度，过滤，弃去初滤液。每次分别精密进样10，50，50 μl滤液，外标法测定其百分标示量，结果见表3。表 3 样品测定结果(n=5) 批号
氨茶碱
盐酸麻黄碱
, 百拇医药
盐酸苯海拉明
RSD
RSD
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%
%
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90.91
0.27
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0.10
971001
92.09
0.70
101.57
1.21
98.76
0.45
971002
92.25
0.61
96.57
0.56
, 百拇医药
2.31
0.99
4 讨论
由于气喘片中氨茶碱和盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明的处方量相差很大，故采用两种进样量(10，50 μl)。
由于在前一种色谱条件下，盐酸苯海拉明在20 min内无法出峰，而它又对酸性较敏感，故通过调节pH和加高柱温来加快其出峰。
参考文献
1 姚小梅，李康乐.高效液相色谱法同时测定呋麻滴鼻液中两组分的含量.中国医院药学杂志，1996，16(2)：78
(1998年4月20日收稿), 百拇医药