高效液相色谱法测定清消口服液中绿原酸的含量
作者：马守栋 马守江 申庆亮 刘心臣
单位：马守栋 马守江 申庆亮(中国人民解放军第91医院 兖州272000)；刘心臣(山东荷泽医学专科学校)
关键词：反相高效液相色谱法；绿原酸；清消口服液
中国医院药学杂志990308 摘要 目的:建立一种测定清消口服液中绿原酸含量的方法。方法:RP-HPLC法。采用Hypersit C18柱(5 μm，3.9×150 mm)，甲醇-水-冰醋酸(17∶180∶3.1)为流动相，流速1.4 ml.min-1，紫外检测波长327 nm。结果:线性范围0.064～1.28 μg，r=0.9995，回收率在99%以上。结论:本法测定清消口服液中绿原酸的含量，操作简便，结果准确。
Determination of chlorogenic acid in Qingxiao oral solution by RP-HPLC
, http://www.100md.com
Ma Shoudong,Ma Shoujiang,Shen Qingliang
(The Ninty First Hospital of PLA,Yanzhou 272000)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a method for the determination of the Chlorogenic acid in Qingxiao oral solution.METHODS:The Chlorogenic acid was seperated on a Hypersil ODS C18 column(3.9×150 mm) and detected at 327 nm,using methanol-water-acetic acid(17∶180∶3.1) as the mobile phase.RESULTS:The calibration curve was linear(r=0.999 5) within the range of 64 ng to 1 280 ng.The average recovery was more than 99%.CONCLUSIONS:The method was sample and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS RP-HPLC,chlorogenic acid,Qingxiao oral solution
清消口服液由金银花、钩藤、王不留行等十几味中药制成，具有较强的清热、消炎功效，是我院应用20余年的验方。为进一步开发利用该制剂，本文建立了测定金银花中有效成分绿原酸在清消口服液中含量的质量控制方法：RP-HPLC法。
1 仪器与试药
HP-1100高效液相色谱仪(美国惠普公司)；绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；清消口服液(本院中药研究室制备批号)；甲醇(色谱纯，浙江黄岩化工厂)；其它化学试剂均为国产，AR级。
2 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS C18(5 μm,3.9 mm×150 mm)，柱温为室温；流动相：甲醇-水-冰醋酸(17∶180∶3.1)，流速1.4 ml.min-1；紫外检测波长327 nm。
, 百拇医药
3 供试品溶液的制备
精密量取清消口服液0.2 ml于10 ml量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，弃去初滤液2 ml，取续滤液即得。
4 阴性对照液的制备
精密量取不含金银花的阴性样品液0.2 ml，按制备供试品溶液的方法，制备阴性对照液。
5 绿原酸对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品3.2 mg于小烧杯中，以热水溶解，稍冷，定量移入10 ml量瓶中，冷到室温，加水至刻度，摇匀，即得。在上述色谱条件下，供试品液、阴性对照液及绿原酸对照品液的色谱图均见图1。
图 1 HPLC色谱图
, 百拇医药 a 供试液 b 阴性对照液 c 绿原酸对照品 d 绿原酸峰
6 线性范围的考察
精密量取绿原酸对照品液0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml，分别于10 ml量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。精密进样20 μl，以进样量X(μg)对峰面积Y回归，得回归方程：Y=1 747.91 X+0.0020,r=0.9995。
7 精密度测定
取同一供试品液，重复进样，测定日内、日间精密度。结果日内RSD为0.41%(n=6)，日间RSD为1.89%(n=5)。
8 回收率测定
精密量取清消口服液适量，数份，分别于10 ml量瓶中，分别加入不同量的绿原酸对照品适量，按供试品液的制备方法制样。外标法测定绿原酸的量，计算回收率，结果见表1。
, 百拇医药
表 1 回收率测定结果(n=5) 加入量/μg
测得量/μg
回收率/%
RSD/%
25.60
25.64
100.17
1.91
76.80
76.59
99.73
2.09
, 百拇医药
102.40
102.43
100.03
2.11
9 样品测定
取5批清消口服液，按上述方法制备供试液。精密进样20 μl，外标法计算绿原酸的含量，结果见表2。表 2 样品测定结果(n=5) 批 号
含量/mg.ml-1
RSD/%
970217
0.431
, http://www.100md.com 1.73
970322
0.423
1.84
970427
0.461
1.68
970618
0.472
1.97
971022
0.481
1.81
, http://www.100md.com
10 讨论
10.1 在参考有关文献[1～3]的基础上，经多次实验，较好地掌握了使用的流动相及流速，在该条件下，待测成分峰型较好，且与相邻峰达到了基线分离。
10.2 考虑到清消口服液在制备过程中经多次醇沉、水沉等处理，其中的杂质成分已大部分除去，故本文采用的样品预处理方法较简单：原口服液以水稀释、微孔滤膜过滤后直接进样。进样后得到的色谱图进一步说明该样品预处理方法的可行性。
10.3 通过对20批清消口服液的含量测定，已确定清消口服液中绿原酸的含量标准：0.394～0.482 mg.ml-1，本文所测5批样品，其中绿原酸含量均在规定范围内。
10.4 本方法样品预处理简单、经济，回收率高，重现性好，可作为清消口服液的质量控制方法。
参考文献
1 阎东海.提取三要素在金银花提取过程中对绿原酸提出率及稳定性的相关性研究.中国中药杂志，1994，19(9)：545
2 刘 健，刘晨江，赵志鸿.高效液相色谱法测定清肝利胆冲剂中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：124
3 张 丹等.HPLC测定金银花、茵陈及其10种中成药中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：83
(1998年5月17日收稿), 百拇医药
单位：马守栋 马守江 申庆亮(中国人民解放军第91医院 兖州272000)；刘心臣(山东荷泽医学专科学校)
关键词：反相高效液相色谱法；绿原酸；清消口服液
中国医院药学杂志990308 摘要 目的:建立一种测定清消口服液中绿原酸含量的方法。方法:RP-HPLC法。采用Hypersit C18柱(5 μm，3.9×150 mm)，甲醇-水-冰醋酸(17∶180∶3.1)为流动相，流速1.4 ml.min-1，紫外检测波长327 nm。结果:线性范围0.064～1.28 μg，r=0.9995，回收率在99%以上。结论:本法测定清消口服液中绿原酸的含量，操作简便，结果准确。
Determination of chlorogenic acid in Qingxiao oral solution by RP-HPLC
, http://www.100md.com
Ma Shoudong,Ma Shoujiang,Shen Qingliang
(The Ninty First Hospital of PLA,Yanzhou 272000)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a method for the determination of the Chlorogenic acid in Qingxiao oral solution.METHODS:The Chlorogenic acid was seperated on a Hypersil ODS C18 column(3.9×150 mm) and detected at 327 nm,using methanol-water-acetic acid(17∶180∶3.1) as the mobile phase.RESULTS:The calibration curve was linear(r=0.999 5) within the range of 64 ng to 1 280 ng.The average recovery was more than 99%.CONCLUSIONS:The method was sample and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS RP-HPLC,chlorogenic acid,Qingxiao oral solution
清消口服液由金银花、钩藤、王不留行等十几味中药制成，具有较强的清热、消炎功效，是我院应用20余年的验方。为进一步开发利用该制剂，本文建立了测定金银花中有效成分绿原酸在清消口服液中含量的质量控制方法：RP-HPLC法。
1 仪器与试药
HP-1100高效液相色谱仪(美国惠普公司)；绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；清消口服液(本院中药研究室制备批号)；甲醇(色谱纯，浙江黄岩化工厂)；其它化学试剂均为国产，AR级。
2 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS C18(5 μm,3.9 mm×150 mm)，柱温为室温；流动相：甲醇-水-冰醋酸(17∶180∶3.1)，流速1.4 ml.min-1；紫外检测波长327 nm。
, 百拇医药
3 供试品溶液的制备
精密量取清消口服液0.2 ml于10 ml量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，弃去初滤液2 ml，取续滤液即得。
4 阴性对照液的制备
精密量取不含金银花的阴性样品液0.2 ml，按制备供试品溶液的方法，制备阴性对照液。
5 绿原酸对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品3.2 mg于小烧杯中，以热水溶解，稍冷，定量移入10 ml量瓶中，冷到室温，加水至刻度，摇匀，即得。在上述色谱条件下，供试品液、阴性对照液及绿原酸对照品液的色谱图均见图1。
图 1 HPLC色谱图
, 百拇医药 a 供试液 b 阴性对照液 c 绿原酸对照品 d 绿原酸峰
6 线性范围的考察
精密量取绿原酸对照品液0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml，分别于10 ml量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。精密进样20 μl，以进样量X(μg)对峰面积Y回归，得回归方程：Y=1 747.91 X+0.0020,r=0.9995。
7 精密度测定
取同一供试品液，重复进样，测定日内、日间精密度。结果日内RSD为0.41%(n=6)，日间RSD为1.89%(n=5)。
8 回收率测定
精密量取清消口服液适量，数份，分别于10 ml量瓶中，分别加入不同量的绿原酸对照品适量，按供试品液的制备方法制样。外标法测定绿原酸的量，计算回收率，结果见表1。
, 百拇医药
表 1 回收率测定结果(n=5) 加入量/μg
测得量/μg
回收率/%
RSD/%
25.60
25.64
100.17
1.91
76.80
76.59
99.73
2.09
, 百拇医药
102.40
102.43
100.03
2.11
9 样品测定
取5批清消口服液，按上述方法制备供试液。精密进样20 μl，外标法计算绿原酸的含量，结果见表2。表 2 样品测定结果(n=5) 批 号
含量/mg.ml-1
RSD/%
970217
0.431
, http://www.100md.com 1.73
970322
0.423
1.84
970427
0.461
1.68
970618
0.472
1.97
971022
0.481
1.81
, http://www.100md.com
10 讨论
10.1 在参考有关文献[1～3]的基础上，经多次实验，较好地掌握了使用的流动相及流速，在该条件下，待测成分峰型较好，且与相邻峰达到了基线分离。
10.2 考虑到清消口服液在制备过程中经多次醇沉、水沉等处理，其中的杂质成分已大部分除去，故本文采用的样品预处理方法较简单：原口服液以水稀释、微孔滤膜过滤后直接进样。进样后得到的色谱图进一步说明该样品预处理方法的可行性。
10.3 通过对20批清消口服液的含量测定，已确定清消口服液中绿原酸的含量标准：0.394～0.482 mg.ml-1，本文所测5批样品，其中绿原酸含量均在规定范围内。
10.4 本方法样品预处理简单、经济，回收率高，重现性好，可作为清消口服液的质量控制方法。
参考文献
1 阎东海.提取三要素在金银花提取过程中对绿原酸提出率及稳定性的相关性研究.中国中药杂志，1994，19(9)：545
2 刘 健，刘晨江，赵志鸿.高效液相色谱法测定清肝利胆冲剂中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：124
3 张 丹等.HPLC测定金银花、茵陈及其10种中成药中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：83
(1998年5月17日收稿), 百拇医药