胶束电动毛细管电泳法测定柑橘属药材中柚皮苷和橙皮苷的含量
作者：杨瑛 王实强 彭源贵
单位：杨 瑛 王实强 彭源贵湖南省中医药研究院中药研究所(长沙410013)
关键词：胶束电动毛细管电泳法；芸香科柑橘属；中药材；柚皮苷；橙皮苷
中草药/990209 摘 要 建立了一种测定芸香科柑橘属药材中柚皮苷及橙皮苷含量的新方法，即以苯甲酸钠为内标物，采用胶束电动毛细管电泳法，可将上述药材中柚皮苷、橙皮苷和内标物较好分离。加样回收率柚皮苷为98.5%，橙皮苷为96.7%。该方法简便、准确、重现性好，可作为柚皮苷和橙皮苷的含量控制方法。
Determination of Naringin and Hesperidin in
Citrus by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography
, 百拇医药
Yang Ying, Wang Shiqiang and Peng Yuangui
(Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica, Changsha 410013)
Abstract A micellar electrokinetic capillary chromatographic method (MECC), using sodium benzoate as internal standard, for the determination of naringin and hesperidin in Chinese materia medica of Citrus L. was established. The recoverise of naringin and hesperidin were 98.5% and 96.7% respectively, which showed that this method is simple, accurate, and reproducible and can be used for the quality control of the Chenese medicine of Citrus L.
, 百拇医药
Key words Citrus L. MECC naringin hesperidin
芸香科柑橘属药用植物来源广泛，1995年版药典收载的中药材主要有6种，即化橘红、佛手、陈皮、青皮、枳实、枳壳。该属植物主要含挥发油及黄酮类成分，尤以柚皮苷和橙皮苷为其代表成分。上述两种成分有多种分析方法〔1～6〕。我们采用胶束电动毛细管电泳法同时测定芸香科柑橘属药材中柚皮苷和橙皮苷的含量，取得了较满意的结果。
1 仪器与试药
HP-3D高效毛细管电脉仪(惠普公司)，柚皮苷和橙皮苷购自中国药品生物制品检定所，6种药材购自本院中药房，所用化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 电泳条件：石英毛细管，直径50 μm，长度64.5 cm，有效长度56 cm；缓冲液pH＝9.0，0.02 mol/L的硼砂，0.05 mol/L十二烷基硫酸钠(SDS)，10%的乙腈，电压20 kV；温度25℃；检测波长λ＝213 nm；进样量为10 kPa.s。在上述条件下，各药材中柚皮苷、橙皮苷及内标物迁移时间分别为6.5、6.8和10.4 min。各成分分离较好，见图1。
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2.2 对照品溶液的配制：精称取柚皮苷和橙皮苷适量，用50%甲醇溶解，滴加氨水调pH值8～9，分别制成200 mg/L和92 mg/L的溶液。
2.3 内标溶液的配制：精密称取苯甲酸钠，加水溶解成200 mg/L的溶液，备用。
2.4 样品溶液的配制：化橘红、佛手剪成极细条，陈皮、青皮、枳实、枳壳等粉粹成细粉，过筛，分别称约0.5 g，置于50 mL容量瓶内，加50%甲醇超声提取30 min，放冷至室温，补充损失的溶剂，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.5 标准曲线与线性关系：分别吸取柚皮苷、橙皮苷、苯甲酸钠不同浓度的混合液，进样，以柚皮苷、橙皮苷的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。柚皮苷在200～1 000 μg、橙皮苷100～600 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程：柚皮苷为Y＝0.185X-0.824，r＝0.9995；橙皮苷为Y＝0.106X-0.994，r＝0.995。
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2.6 加样回收试验：以柚皮苷和橙皮苷含量较高的枳壳为代表，测定加样回收率。精确称取上述两种对照品适量，加入已知含量的枳壳药材0.25 g中，依上法操作，结果平均回收率：柚皮苷为98.5%，RSD%＝2.14；橙皮苷为96.7%，RSD%＝3.68(n＝5)。
2.7 样品测定：取上述6种药材每份约0.5 g，精密称定，按上述方法提取并测定3次，用内标峰面积法计算，各药材中柚皮苷和橙皮苷的含量见表1。
表1 各药材中柚皮苷和橙皮苷的含量(n＝3) 药材
学名
柚皮苷(%)
橙皮苷(%)
化橘红
Gitrus grandis (L.) Osbeck
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1.55
-*
佛 手
C.medica L.var.sarcodictylis Swingle
-*
-*
陈 皮
C.reticulata Blanco
0.32
3.36
青 皮
C.reticulata Blanco
, 百拇医药
-*
0.66
枳 壳
C.aurantium L.
6.98
3.10
枳 实
C.aurantium L.
1.05
0.99
*在上述对照品浓度范围内几乎测不出。3 讨论
3.1 芸香科柑橘属药材来源广泛，不同产地，药材名称不一，本文仅对95版药典内所载6个品种作一次含量测定方法的探讨，未进一步分析各品种与产地间的含量差异。
, 百拇医药
3.2 95版药典所载陈皮中橙皮苷的含量测定方法为分光光度法，操作较为繁冗，化橘红中柚皮苷含量测定采用HPLC法，理论塔板数要求不低于1 000，相比之下，本法前处理简单，分析速度快，样品需要量很小，使用很简单的缓冲液作为载体，几乎不产生废液，分析耗费低，柱效高，理论塔板数均达到100 000以上。分离效率要高两个数量级。在上述药材中，由于柚皮苷和橙皮苷含量差异较大，在HPLC法中同时测定，国内文献中未见报道。
3.3 在分离中性成分时于操作缓冲液中加入表面活性剂SDS，单个的表面活性剂分子之间聚集而成胶束，样品中各组分极性的差异而致胶束与中性分子间的相互作用有强有弱，从而引起各组分迁移速率的快慢达到分离的目的。
3.4 选择苯甲酸钠为内标物，在本法测定条件下，可与柚皮苷和橙皮苷分离完全，迁移时间相隔4 min，有利于内标物与上述药材中其它杂质峰的分离。
3.5 曾以枳壳为代表，选择不同前处理方法，结果采用甲醇回流法与用50%甲醇超声提取法结果较接近，而以水煮加热提取法为最低，约为超声法含量的85%。
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1-柚皮苷 2-橙皮苷 3-苯甲酸钠 a-化橘红 b-陈皮 c-青皮 d-枳实 e-枳壳 f-对照品
图1 胶束电动毛细管电泳图
致谢：本所生药室谢昭明助理研究员代作生药鉴定。
*Address:Yang Ying,Institute of Chinese Materia Medica ,Huan Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica,Changsha
作者简介：杨瑛，1986年湖南中医学院中药系毕业，学士学位，助理研究员。主要从事中药新药的制剂工艺和质量标准的研究工作。曾负责卫生部四类新药“八珍胶囊”的制剂学研究，三类新药“烧伤净软膏”的质量标准研究等。参与部、省级科研课题多项，获得省厅级中医科技进步奖三项。在国家级及部省级杂志上发表论文多篇。
, 百拇医药
参 考 文 献
[1] Kaito T, et al.薬剤学，1979，39：210
[2] 陈光表.药学通报，1981，16(8)：18
[3] 卢日刚.中成药研究，1987，(8)：8
[4] 李国权.中草药，1994，25(7)：359
[5] 王静竹，等.中国中药杂志，1994，19(7)：424
[6] 何燕萍，等.中草药，1997，28(4)：205
(1998-06-26收稿), 百拇医药
单位：杨 瑛 王实强 彭源贵湖南省中医药研究院中药研究所(长沙410013)
关键词：胶束电动毛细管电泳法；芸香科柑橘属；中药材；柚皮苷；橙皮苷
中草药/990209 摘 要 建立了一种测定芸香科柑橘属药材中柚皮苷及橙皮苷含量的新方法，即以苯甲酸钠为内标物，采用胶束电动毛细管电泳法，可将上述药材中柚皮苷、橙皮苷和内标物较好分离。加样回收率柚皮苷为98.5%，橙皮苷为96.7%。该方法简便、准确、重现性好，可作为柚皮苷和橙皮苷的含量控制方法。
Determination of Naringin and Hesperidin in
Citrus by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography
, 百拇医药
Yang Ying, Wang Shiqiang and Peng Yuangui
(Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica, Changsha 410013)
Abstract A micellar electrokinetic capillary chromatographic method (MECC), using sodium benzoate as internal standard, for the determination of naringin and hesperidin in Chinese materia medica of Citrus L. was established. The recoverise of naringin and hesperidin were 98.5% and 96.7% respectively, which showed that this method is simple, accurate, and reproducible and can be used for the quality control of the Chenese medicine of Citrus L.
, 百拇医药
Key words Citrus L. MECC naringin hesperidin
芸香科柑橘属药用植物来源广泛，1995年版药典收载的中药材主要有6种，即化橘红、佛手、陈皮、青皮、枳实、枳壳。该属植物主要含挥发油及黄酮类成分，尤以柚皮苷和橙皮苷为其代表成分。上述两种成分有多种分析方法〔1～6〕。我们采用胶束电动毛细管电泳法同时测定芸香科柑橘属药材中柚皮苷和橙皮苷的含量，取得了较满意的结果。
1 仪器与试药
HP-3D高效毛细管电脉仪(惠普公司)，柚皮苷和橙皮苷购自中国药品生物制品检定所，6种药材购自本院中药房，所用化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 电泳条件：石英毛细管，直径50 μm，长度64.5 cm，有效长度56 cm；缓冲液pH＝9.0，0.02 mol/L的硼砂，0.05 mol/L十二烷基硫酸钠(SDS)，10%的乙腈，电压20 kV；温度25℃；检测波长λ＝213 nm；进样量为10 kPa.s。在上述条件下，各药材中柚皮苷、橙皮苷及内标物迁移时间分别为6.5、6.8和10.4 min。各成分分离较好，见图1。
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2.2 对照品溶液的配制：精称取柚皮苷和橙皮苷适量，用50%甲醇溶解，滴加氨水调pH值8～9，分别制成200 mg/L和92 mg/L的溶液。
2.3 内标溶液的配制：精密称取苯甲酸钠，加水溶解成200 mg/L的溶液，备用。
2.4 样品溶液的配制：化橘红、佛手剪成极细条，陈皮、青皮、枳实、枳壳等粉粹成细粉，过筛，分别称约0.5 g，置于50 mL容量瓶内，加50%甲醇超声提取30 min，放冷至室温，补充损失的溶剂，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.5 标准曲线与线性关系：分别吸取柚皮苷、橙皮苷、苯甲酸钠不同浓度的混合液，进样，以柚皮苷、橙皮苷的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。柚皮苷在200～1 000 μg、橙皮苷100～600 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程：柚皮苷为Y＝0.185X-0.824，r＝0.9995；橙皮苷为Y＝0.106X-0.994，r＝0.995。
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2.6 加样回收试验：以柚皮苷和橙皮苷含量较高的枳壳为代表，测定加样回收率。精确称取上述两种对照品适量，加入已知含量的枳壳药材0.25 g中，依上法操作，结果平均回收率：柚皮苷为98.5%，RSD%＝2.14；橙皮苷为96.7%，RSD%＝3.68(n＝5)。
2.7 样品测定：取上述6种药材每份约0.5 g，精密称定，按上述方法提取并测定3次，用内标峰面积法计算，各药材中柚皮苷和橙皮苷的含量见表1。
表1 各药材中柚皮苷和橙皮苷的含量(n＝3) 药材
学名
柚皮苷(%)
橙皮苷(%)
化橘红
Gitrus grandis (L.) Osbeck
, http://www.100md.com
1.55
-*
佛 手
C.medica L.var.sarcodictylis Swingle
-*
-*
陈 皮
C.reticulata Blanco
0.32
3.36
青 皮
C.reticulata Blanco
, 百拇医药
-*
0.66
枳 壳
C.aurantium L.
6.98
3.10
枳 实
C.aurantium L.
1.05
0.99
*在上述对照品浓度范围内几乎测不出。3 讨论
3.1 芸香科柑橘属药材来源广泛，不同产地，药材名称不一，本文仅对95版药典内所载6个品种作一次含量测定方法的探讨，未进一步分析各品种与产地间的含量差异。
, 百拇医药
3.2 95版药典所载陈皮中橙皮苷的含量测定方法为分光光度法，操作较为繁冗，化橘红中柚皮苷含量测定采用HPLC法，理论塔板数要求不低于1 000，相比之下，本法前处理简单，分析速度快，样品需要量很小，使用很简单的缓冲液作为载体，几乎不产生废液，分析耗费低，柱效高，理论塔板数均达到100 000以上。分离效率要高两个数量级。在上述药材中，由于柚皮苷和橙皮苷含量差异较大，在HPLC法中同时测定，国内文献中未见报道。
3.3 在分离中性成分时于操作缓冲液中加入表面活性剂SDS，单个的表面活性剂分子之间聚集而成胶束，样品中各组分极性的差异而致胶束与中性分子间的相互作用有强有弱，从而引起各组分迁移速率的快慢达到分离的目的。
3.4 选择苯甲酸钠为内标物，在本法测定条件下，可与柚皮苷和橙皮苷分离完全，迁移时间相隔4 min，有利于内标物与上述药材中其它杂质峰的分离。
3.5 曾以枳壳为代表，选择不同前处理方法，结果采用甲醇回流法与用50%甲醇超声提取法结果较接近，而以水煮加热提取法为最低，约为超声法含量的85%。
, http://www.100md.com
1-柚皮苷 2-橙皮苷 3-苯甲酸钠 a-化橘红 b-陈皮 c-青皮 d-枳实 e-枳壳 f-对照品
图1 胶束电动毛细管电泳图
致谢：本所生药室谢昭明助理研究员代作生药鉴定。
*Address:Yang Ying,Institute of Chinese Materia Medica ,Huan Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica,Changsha
作者简介：杨瑛，1986年湖南中医学院中药系毕业，学士学位，助理研究员。主要从事中药新药的制剂工艺和质量标准的研究工作。曾负责卫生部四类新药“八珍胶囊”的制剂学研究，三类新药“烧伤净软膏”的质量标准研究等。参与部、省级科研课题多项，获得省厅级中医科技进步奖三项。在国家级及部省级杂志上发表论文多篇。
, 百拇医药
参 考 文 献
[1] Kaito T, et al.薬剤学，1979，39：210
[2] 陈光表.药学通报，1981，16(8)：18
[3] 卢日刚.中成药研究，1987，(8)：8
[4] 李国权.中草药，1994，25(7)：359
[5] 王静竹，等.中国中药杂志，1994，19(7)：424
[6] 何燕萍，等.中草药，1997，28(4)：205
(1998-06-26收稿), 百拇医药