口服药品中大肠菌群与大肠杆菌检出率比较试验
作者：杜平华 朱世真
单位：山东省青岛市药品检验所
关键词：口服药品；卫生标准；大肠杆菌；大肠菌群
海峡药学990392 摘要 目前我国口服药品卫生标准规定为1克(ml)不得检出大肠杆菌，与国际上药品微生物限度标准及我国食品卫生标准存在一定的差距。为此，我们对60批样品进行大肠杆菌和大肠菌群检出率进行考查，结果表明大肠菌群作为口服药品控制菌将使药品有更高的安全性。
大肠杆菌为肠杆菌科埃希氏菌属的一个种[1]，我国把它作为药品卫生标准的指示菌，该菌除乳糖发酵外，还需做生化试验进行鉴定，如靛基质、甲基红、V-P、枸橼酸盐利用试验[2]。由于细菌受环境影响，可发生变异，尤其是中药，往往出现漏检及假阳性，所以大肠杆菌及其检验结果不能代表药品的卫生状况。大肠菌群是肠杆菌科一群能发酵乳糖产酸、产气的需气和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，它们都是来源于人畜粪便，故国际上以大肠菌群作为药品、食品、饮料等污染的指示菌。我们对60批药材、原料及口服药品进行了二法检出率比较，结果有明显差异。
, 百拇医药
1 试验材料
1.1 样品 药材10批，中成药39批，西药8批，饲料3批。以上样品全部由青岛市药品检验所提供。
1.2 培养基 胆盐乳糖培养基(单料、双料)；EMB琼脂培养基；蛋白胨水培养基；磷酸盐葡萄糖胨水培养基；枸橼酸盐培养基；乳糖发酵培养基。以上培养基均按中国药典1995年版附录配制。
2 试验方法
2.1 供试液制备：按1995版《中国药典》[4]供试液制备方法，将样品制成1∶10供试液。2.1.1 大肠杆菌检查：按1995版《中国药典》“微生物限度检查法”大肠杆菌检查。2.1.2 大肠菌群检查：①将上述1∶10供试液10倍稀释成1∶100，取相当于供试品量的1.0g(ml)、0.1g(ml)、0.01g(ml)的供试液接种。即1∶10供试液10ml接种于双料乳糖发酵培养基管3支，取1∶10、1∶100供试液各1ml接种于单料乳糖发酵管各3支，各管置36±1℃培养24h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。②分离培养：将所有产气发酵管分别划线接种于EMB琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，观察菌落形态，并做革兰氏染色和重发酵试验。③挑取EMB平板上可疑大肠杆菌群落至少3～5个进行革兰氏染色，同时分别接种于乳糖发酵管中。各管置36±1℃培养24～48h，观察产气情况。凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，可报告检出大肠菌群。根据检出的管数查表，可得大肠菌群的最大可能数。
, 百拇医药
3 检验结果(见表1)。
表1 样品中大肠杆菌、大肠菌群检测结果
样品数(批)
检出数
未检出
检出率(%)
大肠杆菌
60
9
51
15.0
大肠菌群
60
, 百拇医药
19
41
31.7
(P<0.01)
4 小结 60批共检出大肠杆菌的有9批，大肠菌群检验阳性的有19批，检出率各为31.7%与15.0%(P<0.01)，有极显著性差异，其中9批大肠菌群检出阳性，而大肠杆菌由于生化试验结果不符合IMViC试验，结果为-+-+。
大肠杆菌和大肠菌群同时检出的有9批，检出率为15.0%。
从以上试验结果表明大肠杆菌检验不能真正代表药品的卫生状况，以大肠菌群检验作为口服药品卫生标准的指示菌，将使药品有更高的安全性。
参考文献
1.郑钧镛等：药品微生物学及检验技术，人民卫生出版社，北京，1989；2∶282
2.药品卫生检验方法：中华人民共和国卫生部，1990；12.21
3.李影林等：临床微生物学及检验，吉林科学技术出版社，吉林，1991；9.1∶213
4.中华人民共和国药典：1995年版附录, 百拇医药
单位：山东省青岛市药品检验所
关键词：口服药品；卫生标准；大肠杆菌；大肠菌群
海峡药学990392 摘要 目前我国口服药品卫生标准规定为1克(ml)不得检出大肠杆菌，与国际上药品微生物限度标准及我国食品卫生标准存在一定的差距。为此，我们对60批样品进行大肠杆菌和大肠菌群检出率进行考查，结果表明大肠菌群作为口服药品控制菌将使药品有更高的安全性。
大肠杆菌为肠杆菌科埃希氏菌属的一个种[1]，我国把它作为药品卫生标准的指示菌，该菌除乳糖发酵外，还需做生化试验进行鉴定，如靛基质、甲基红、V-P、枸橼酸盐利用试验[2]。由于细菌受环境影响，可发生变异，尤其是中药，往往出现漏检及假阳性，所以大肠杆菌及其检验结果不能代表药品的卫生状况。大肠菌群是肠杆菌科一群能发酵乳糖产酸、产气的需气和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，它们都是来源于人畜粪便，故国际上以大肠菌群作为药品、食品、饮料等污染的指示菌。我们对60批药材、原料及口服药品进行了二法检出率比较，结果有明显差异。
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1 试验材料
1.1 样品 药材10批，中成药39批，西药8批，饲料3批。以上样品全部由青岛市药品检验所提供。
1.2 培养基 胆盐乳糖培养基(单料、双料)；EMB琼脂培养基；蛋白胨水培养基；磷酸盐葡萄糖胨水培养基；枸橼酸盐培养基；乳糖发酵培养基。以上培养基均按中国药典1995年版附录配制。
2 试验方法
2.1 供试液制备：按1995版《中国药典》[4]供试液制备方法，将样品制成1∶10供试液。2.1.1 大肠杆菌检查：按1995版《中国药典》“微生物限度检查法”大肠杆菌检查。2.1.2 大肠菌群检查：①将上述1∶10供试液10倍稀释成1∶100，取相当于供试品量的1.0g(ml)、0.1g(ml)、0.01g(ml)的供试液接种。即1∶10供试液10ml接种于双料乳糖发酵培养基管3支，取1∶10、1∶100供试液各1ml接种于单料乳糖发酵管各3支，各管置36±1℃培养24h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。②分离培养：将所有产气发酵管分别划线接种于EMB琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，观察菌落形态，并做革兰氏染色和重发酵试验。③挑取EMB平板上可疑大肠杆菌群落至少3～5个进行革兰氏染色，同时分别接种于乳糖发酵管中。各管置36±1℃培养24～48h，观察产气情况。凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，可报告检出大肠菌群。根据检出的管数查表，可得大肠菌群的最大可能数。
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3 检验结果(见表1)。
表1 样品中大肠杆菌、大肠菌群检测结果
样品数(批)
检出数
未检出
检出率(%)
大肠杆菌
60
9
51
15.0
大肠菌群
60
, 百拇医药
19
41
31.7
(P<0.01)
4 小结 60批共检出大肠杆菌的有9批，大肠菌群检验阳性的有19批，检出率各为31.7%与15.0%(P<0.01)，有极显著性差异，其中9批大肠菌群检出阳性，而大肠杆菌由于生化试验结果不符合IMViC试验，结果为-+-+。
大肠杆菌和大肠菌群同时检出的有9批，检出率为15.0%。
从以上试验结果表明大肠杆菌检验不能真正代表药品的卫生状况，以大肠菌群检验作为口服药品卫生标准的指示菌，将使药品有更高的安全性。
参考文献
1.郑钧镛等：药品微生物学及检验技术，人民卫生出版社，北京，1989；2∶282
2.药品卫生检验方法：中华人民共和国卫生部，1990；12.21
3.李影林等：临床微生物学及检验，吉林科学技术出版社，吉林，1991；9.1∶213
4.中华人民共和国药典：1995年版附录, 百拇医药