高效液相色谱法测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量
作者：华丽群
单位：武汉 430062 湖北大学校医院
关键词：消痒涂膜剂；黄芩苷；聚酰胺柱层析；高效液相色谱法
中国现代应用药学990431 摘要 目的：测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量。方法：采用聚酰胺柱层析分离提取，高效液相色谱法测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量，以C18为固定相，甲醇-水-磷酸(53∶47∶0.2)为流动相，检测波长276nm。结果：线性范围0.09～0.45μg，平均回收率为94.77%，RSD=0.58%。结论：方法准确、可靠、重现性好。
Determination of baicalin in sheet Xiaoyangtumo by high performance liquid chromatography
, http://www.100md.com
Hua Liqun(Hua LQ)(Hubei University Hospital,Wuhan 430062)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for determination of baicalin in sheet Xiaoyangtumo.METHOD:Baicalin in sheet Xiaoyangtumo was extracted by polyacrylamide column chromatography and determined by high performance liquid chromatography with ODS column.The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid(53∶47∶0.2,v/v).Detection wavelength was at 276nm.RESULTS:The linear range of baicalin was 0.09～0.45μg and the average recovery was 94.77% with RSD=0.58%.CONCLUSION:The method is accurate and reliable with good reproducibity.
, http://www.100md.com
KEY WORDS Xiaoyangtmo,baicalin,polyacrylamide column chromatography,HPLC
消痒涂膜剂是由黄芩、马齿苋、蛇床子、苦参等4味中药经提取，再加聚乙烯醇(PVA)组成的复方液体制剂。具有清热、燥湿、止痒之功效。经临床观察，对湿疹、皮炎疗效甚好。为了控制其质量，保证临床用药安全有效，对处方中主药之一黄芩进行了质量控制，以高效液相色谱法测定黄芩苷含量。方法准确、可靠、重现性好。现报道如下。
1 仪器与试剂
LC-9A HPLC色谱仪(日本岛津)；SPD-6AV紫外可变检测器；C-R4数据处理机。黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯。水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 处方及制备方法
, http://www.100md.com
2.1 处方：黄芩80g,马齿苋80g,苦参80g,蛇床子60g,PVA2.4g,共制成120ml。
2.2 制备方法：按处方称取黄芩、马齿苋、苦参、蛇床子，水煎2次，每次1.5h,煎煮液浓缩至2∶1(生药∶煎液)放冷，加95%乙醇至含醇量为50%，边加边搅拌，沉降48h。取上清液回收乙醇至无醇味，加水至2∶1,沉降24h。水浴蒸发浓缩至40ml。将2.4g PVA溶于80ml水中，水浴加热(不超过100℃)成透明溶液，加入上述浓缩液至120ml,搅拌均匀，即得。
3 方法与结果
3.1 对照品溶液：精密称取黄芩苷对照品适量，以甲醇溶解并定量稀释制成0.045mg/ml的溶液。
3.2 样品溶液：精密量取样品及缺黄芩的空白样品各2ml,分别置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，分别精密吸取1ml加在聚酰胺柱上(0.5g柱层析用聚酰胺以60%乙醇湿法上柱，水冲洗备用，柱内径1.0cm),先用水20ml以8滴/min的速度洗脱，弃之水洗液，再用60%乙醇以8滴/min速度洗脱，收集洗脱液25ml,即得样品溶液或空白样品溶液。
, 百拇医药
3.3 标准曲线的制作：精密吸取对照品溶液1,2,3,4和5ml分别置10ml量瓶中，以甲醇定容。分别吸取20μl进样，测峰面积。色谱条件:CLC-ODS C18柱(6.0×150mm)、流动相为甲醇-水-磷酸(53∶47∶0.2),流速1ml/min。柱温室温，检测波长276nm。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，用最小二乘法进行计算，回归方程为:Y=301366.67X-4471.52,r=0.9992。表明黄芩苷在0.09～0.45μg范围内线性关系良好。
3.4 对照品、样品及空白样品溶液HPLC图谱：取对照品溶液3ml,用甲醇稀释至10ml,分别吸取该溶液和上述样品溶液，及空白样品溶液各20μl进样测定，测得HPLC色谱，见图1。
图1 HPLC图谱
A-对照品；B-样品；C-空白样品
, 百拇医药
3.5 稳定性试验：分别精密吸取样品溶液20μl,每小时进样1次，测定黄芩苷峰面积，连续6h,以后12h,24h分别测定1次，结果峰面积基本不变，平均RSD为2.15%。
3.6 精密度试验：精密吸取对照品溶液3ml,于10ml量瓶中，加甲醇定容，取20μl进样测定峰面积。同日内进样5次，测定日内差异，连续5d，每天进样1次，测定日间差异。结果日内RSD为1.21%，日间RSD为1.78%。
3.7 重现性试验：取同一批号样品6份，分别照样品溶液项下的方法进行操作，即得6份同一样品的供试溶液，分别吸取20μl进样测定峰面积，平均峰面积为78473.8,RSD=2.12%。
3.8 回收率试验：将不同浓度的对照品溶液加入到一定量的空白样品溶液中，以下同样品溶液“加水稀……”项下操作，即得空白加样液。吸取20μl进样测峰面积，以标准曲线法计算回收率，结果见表1。
, 百拇医药
表1 回收率试验(n=3) 编号
加样量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
(%)
RSD
(%)
1
3.82
3.61
, 百拇医药
94.50
2
4.74
4.52
95.36
3
5.27
5.02
95.26
94.77
0.58
4
4.34
, http://www.100md.com
4.11
94.70
5
4.52
4.25
94.03
3.9 样品含量测定：准确吸取样品溶液20μl,按上述条件进样测峰面积，积分值代入标准曲线中进行计算，结果见表2。表2 样品含量测定 编 号
含量(mg/ml)
平均含量(mg/ml)
RSD(%)
1
, 百拇医药
3.75 3.79 3.71
3.75
1.07
2
3.81 3.84 3.89
3.85
1.05
3
4.12 4.17 4.13
4.14
0.64
4 讨 论
, http://www.100md.com
4.1 黄芩苷是一种黄酮苷，采用聚酰胺颗粒柱层析，可以去掉部分杂质。从色谱图及回收率可见样品中其它成分对黄芩苷的测定无干扰。
4.2 黄芩苷测定方法有紫外分光光度法[1]、薄层扫描法[2]、HPLC法[3]等。本文采用HPLC法进行测定。实验发现，分离结果与磷酸的量关系甚大，采用本文流动相分离效果较好。
4.3 本实验准确可靠、重现性好，根据实验结果，暂定本品每1ml黄芩苷含量不得低于3.0mg。
参考文献
[1] 石淑琴，郭君，阚志君.二阶导数光谱法测定双黄连注射剂中黄芩苷的含量.中成药，1992，14(5)∶10.
[2] 吕方军.薄层扫描法测定银黄注射液中绿原酸与黄芩苷的含量.药物分析杂志，1988，8(4)∶236.
[3] 齐彦敏.反相HPLC法测定清肺止泻冲剂黄芩苷的含量.中国中药杂志，1995，20(10)∶607.
收稿日期：1998-04-13, 百拇医药
单位：武汉 430062 湖北大学校医院
关键词：消痒涂膜剂；黄芩苷；聚酰胺柱层析；高效液相色谱法
中国现代应用药学990431 摘要 目的：测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量。方法：采用聚酰胺柱层析分离提取，高效液相色谱法测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量，以C18为固定相，甲醇-水-磷酸(53∶47∶0.2)为流动相，检测波长276nm。结果：线性范围0.09～0.45μg，平均回收率为94.77%，RSD=0.58%。结论：方法准确、可靠、重现性好。
Determination of baicalin in sheet Xiaoyangtumo by high performance liquid chromatography
, http://www.100md.com
Hua Liqun(Hua LQ)(Hubei University Hospital,Wuhan 430062)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for determination of baicalin in sheet Xiaoyangtumo.METHOD:Baicalin in sheet Xiaoyangtumo was extracted by polyacrylamide column chromatography and determined by high performance liquid chromatography with ODS column.The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid(53∶47∶0.2,v/v).Detection wavelength was at 276nm.RESULTS:The linear range of baicalin was 0.09～0.45μg and the average recovery was 94.77% with RSD=0.58%.CONCLUSION:The method is accurate and reliable with good reproducibity.
, http://www.100md.com
KEY WORDS Xiaoyangtmo,baicalin,polyacrylamide column chromatography,HPLC
消痒涂膜剂是由黄芩、马齿苋、蛇床子、苦参等4味中药经提取，再加聚乙烯醇(PVA)组成的复方液体制剂。具有清热、燥湿、止痒之功效。经临床观察，对湿疹、皮炎疗效甚好。为了控制其质量，保证临床用药安全有效，对处方中主药之一黄芩进行了质量控制，以高效液相色谱法测定黄芩苷含量。方法准确、可靠、重现性好。现报道如下。
1 仪器与试剂
LC-9A HPLC色谱仪(日本岛津)；SPD-6AV紫外可变检测器；C-R4数据处理机。黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯。水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 处方及制备方法
, http://www.100md.com
2.1 处方：黄芩80g,马齿苋80g,苦参80g,蛇床子60g,PVA2.4g,共制成120ml。
2.2 制备方法：按处方称取黄芩、马齿苋、苦参、蛇床子，水煎2次，每次1.5h,煎煮液浓缩至2∶1(生药∶煎液)放冷，加95%乙醇至含醇量为50%，边加边搅拌，沉降48h。取上清液回收乙醇至无醇味，加水至2∶1,沉降24h。水浴蒸发浓缩至40ml。将2.4g PVA溶于80ml水中，水浴加热(不超过100℃)成透明溶液，加入上述浓缩液至120ml,搅拌均匀，即得。
3 方法与结果
3.1 对照品溶液：精密称取黄芩苷对照品适量，以甲醇溶解并定量稀释制成0.045mg/ml的溶液。
3.2 样品溶液：精密量取样品及缺黄芩的空白样品各2ml,分别置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，分别精密吸取1ml加在聚酰胺柱上(0.5g柱层析用聚酰胺以60%乙醇湿法上柱，水冲洗备用，柱内径1.0cm),先用水20ml以8滴/min的速度洗脱，弃之水洗液，再用60%乙醇以8滴/min速度洗脱，收集洗脱液25ml,即得样品溶液或空白样品溶液。
, 百拇医药
3.3 标准曲线的制作：精密吸取对照品溶液1,2,3,4和5ml分别置10ml量瓶中，以甲醇定容。分别吸取20μl进样，测峰面积。色谱条件:CLC-ODS C18柱(6.0×150mm)、流动相为甲醇-水-磷酸(53∶47∶0.2),流速1ml/min。柱温室温，检测波长276nm。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，用最小二乘法进行计算，回归方程为:Y=301366.67X-4471.52,r=0.9992。表明黄芩苷在0.09～0.45μg范围内线性关系良好。
3.4 对照品、样品及空白样品溶液HPLC图谱：取对照品溶液3ml,用甲醇稀释至10ml,分别吸取该溶液和上述样品溶液，及空白样品溶液各20μl进样测定，测得HPLC色谱，见图1。
图1 HPLC图谱
A-对照品；B-样品；C-空白样品
, 百拇医药
3.5 稳定性试验：分别精密吸取样品溶液20μl,每小时进样1次，测定黄芩苷峰面积，连续6h,以后12h,24h分别测定1次，结果峰面积基本不变，平均RSD为2.15%。
3.6 精密度试验：精密吸取对照品溶液3ml,于10ml量瓶中，加甲醇定容，取20μl进样测定峰面积。同日内进样5次，测定日内差异，连续5d，每天进样1次，测定日间差异。结果日内RSD为1.21%，日间RSD为1.78%。
3.7 重现性试验：取同一批号样品6份，分别照样品溶液项下的方法进行操作，即得6份同一样品的供试溶液，分别吸取20μl进样测定峰面积，平均峰面积为78473.8,RSD=2.12%。
3.8 回收率试验：将不同浓度的对照品溶液加入到一定量的空白样品溶液中，以下同样品溶液“加水稀……”项下操作，即得空白加样液。吸取20μl进样测峰面积，以标准曲线法计算回收率，结果见表1。
, 百拇医药
表1 回收率试验(n=3) 编号
加样量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
(%)
RSD
(%)
1
3.82
3.61
, 百拇医药
94.50
2
4.74
4.52
95.36
3
5.27
5.02
95.26
94.77
0.58
4
4.34
, http://www.100md.com
4.11
94.70
5
4.52
4.25
94.03
3.9 样品含量测定：准确吸取样品溶液20μl,按上述条件进样测峰面积，积分值代入标准曲线中进行计算，结果见表2。表2 样品含量测定 编 号
含量(mg/ml)
平均含量(mg/ml)
RSD(%)
1
, 百拇医药
3.75 3.79 3.71
3.75
1.07
2
3.81 3.84 3.89
3.85
1.05
3
4.12 4.17 4.13
4.14
0.64
4 讨 论
, http://www.100md.com
4.1 黄芩苷是一种黄酮苷，采用聚酰胺颗粒柱层析，可以去掉部分杂质。从色谱图及回收率可见样品中其它成分对黄芩苷的测定无干扰。
4.2 黄芩苷测定方法有紫外分光光度法[1]、薄层扫描法[2]、HPLC法[3]等。本文采用HPLC法进行测定。实验发现，分离结果与磷酸的量关系甚大，采用本文流动相分离效果较好。
4.3 本实验准确可靠、重现性好，根据实验结果，暂定本品每1ml黄芩苷含量不得低于3.0mg。
参考文献
[1] 石淑琴，郭君，阚志君.二阶导数光谱法测定双黄连注射剂中黄芩苷的含量.中成药，1992，14(5)∶10.
[2] 吕方军.薄层扫描法测定银黄注射液中绿原酸与黄芩苷的含量.药物分析杂志，1988，8(4)∶236.
[3] 齐彦敏.反相HPLC法测定清肺止泻冲剂黄芩苷的含量.中国中药杂志，1995，20(10)∶607.
收稿日期：1998-04-13, 百拇医药