青黛与其一种伪品的鉴别
作者：徐贵丽 王应建 尹玉琴 邹 静
单位：徐贵丽 尹玉琴 邹 静(昆明 650032 成都军区昆明总医院药剂科)；王应建(系昆明市妇幼保健院药剂科进修生)
关键词：青黛；理化鉴别；吸收光谱；薄层层析
中国现代应用药学990410 摘要 目的：鉴别临床应用的一种可疑“青黛”的真伪。方法：采用显微、薄层层析、吸收光谱及理化鉴别法对其性状、显微及理化特性进行鉴别并与真品比较。结果：“青黛”从外形、颜色及一般化学性质上与真品不同；薄层层析按药典规定方法，“青黛”无斑点；吸收光谱鉴别真品在608nm有一最大吸收峰，伪品在400～800nm之间无吸收峰。进一步鉴别伪品中主要含有Fe2S3、FeS等对人体有害的掺假成分。结论：“青黛”为一种伪品，本法为青黛的真伪鉴别提供了依据。
Distinction between indigo naturalis and a false one
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Xu Guili(Xu GL),Wang Yinjian(Wang YJ),Yin Yuqing(Yin YQ),et al(Pharmacy of Kunming General Hospital of Chengdu Military Region,Kunming 650032)
ABSTRACT OBJECTIVE：To distinguish the “Indigo naturalis” applied in clinic.METHODS:The sample was studied by the microscopic characteristics,TLC,spectrophtometry and pharmacological properties of indigo naturalis.RESULTS:The shape,colour and general chemical characteristics of “Indigo naturalis” were different from genuine;there was no spots of “Indigo naturalis” on thin lager plate according the TLC method described in Chinese pharmacopoeia,the maximum absorption wave length of genuine was found at 608nm,but there is not any wavelenth absorbance at 400～800nm of “Indigo naturalis”.The main constituent of the fake were Fe2S3,FeS and so on.CONCLUSION:The sample was a false one.This research provide a way to distinguish indigo naturalis from the fakes.
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KEY WORDS Indigo naturalis,physicochemical identification,spectrophotometry,TLC
青黛为爵床科植物马蓝、蓼科植物蓼蓝或十字花科植物菘蓝的叶或茎叶经加工制得的干燥粉末或团块。具有清热解毒、凉血、定惊之功效。临床上常用于温毒发斑、血热吐、胸痛咳血、口疮、痄腮、喉痹、小儿惊痫。青黛为中国药典1995年版一部收载品种，系常用中药。近来我院中药房购进的青黛，临床疗效不佳，仔细观察其颜色略不同以往，故进行性状比较及真伪鉴别，发现确为伪劣品，现将方法介绍如下。
1 仪器与试样
仪器：岛津UV-2201紫外可见分光光度计；UV-4型多功能四用紫外线分析仪(上海科艺光学仪器厂)。
试样：青黛(云南省药材采购供应站，经鉴定由马蓝、菘蓝等组成)；伪品(本院中药房所购的青黛)；靛玉红、靛蓝对照品(中国药品生物制品检定所)。
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2 实验方法与结果
2.1 青黛与其伪品主要理化特性比较，见表1。
2.2 薄层色谱鉴定[1]
样品1：取靛蓝、靛玉红对照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
样品2：按药典规定，取青黛50mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤。
样品3：取伪品50mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤。
样品4：取伪品50mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤，提取液置热水浴上挥发至约剩0.5ml,含量比规定高10倍。
样品5：取伪品200mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤，提取液置热水浴上挥发至约剩0.5ml,用量比规定高400倍。
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取样品1，2和3各20μl,分别点样于同一块硅胶G薄层板上，置苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)溶液中展开，取出、晾干，样品1即标准对照品可见一清晰的纯蓝色斑点(Rf=0.5)及一清晰的紫红色斑点(Rf=0.3);样品2在与对照品靛蓝、靛玉红色谱相应的位置上，分别显相同的蓝色斑点和紫红色斑点，样品3展开后未见斑点，见图1；另取一块层析板，分别用样品1，4和5点样，展开后样品4无斑点，样品5分别在与靛蓝、靛玉红色谱相应的位置上显浅蓝色和浅紫红色斑点，见图2。
表1 青黛与其伪品主要理化性质比较
青 黛
伪 品
外形颜色
深蓝色细粉，质轻，易产生飞扬性粉尘，微有草腥气。显微镜下观察(10×40倍)为不规则无色及黑色颗粒，其中可见大量植物纤维，植物碎片及深蓝色片块状物
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黑色细粉，质重，不产生飞扬性粉尘，无嗅无味。显微镜下观察为不规则黑色颗粒及团块，其间可见长方形无色半透明结晶状物。偶见分散的深蓝色颗粒
水提取
青黛加蒸馏水后浮在水上面，振摇过滤，滤液为淡黄色
伪品加蒸馏水后呈块团状下沉，过滤后溶液近无色
氯仿提取
青黛在氯仿中浸泡后，振摇1min过滤，溶液呈蓝紫色，长时间放置(24h)后蓝色减弱，显紫红色
伪品溶液近无色，长时间放置(24h)后溶液变混浊
火焰灼烧
置坩锅中于无色火焰中灼烧，青黛在灼烧时产生紫色烟雾，灼烧后为淡棕色粉末。取青黛在火焰中直接灼烧(不用坩锅)，青黛产生淡紫色烟雾并燃烧，燃烧后无剩余灰分
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伪品在坩锅中灼烧不冒烟、灼烧后为黑色粉末。伪品在火焰中直接灼烧不冒烟，灼烧后大部分转变成灰色灰份
硝酸试验
取青黛0.5g于试管中，加硝酸至无气泡产生为止，反应结束后溶液为黄棕色，基本无残渣
伪品也产生气泡，反应结束后溶液近无色，且见大部分固体未被硝化
注：表中所有实验青黛和伪品同步进行
图1 青黛及其伪品的薄层色谱图
1-靛蓝、靛玉红标准对照；2-青黛真品；3-青黛伪品
2.3 青黛及其伪品的吸收光谱
图2 青黛及其伪品的薄层色谱图
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1-靛蓝、靛玉红标准对照；4-青黛伪品浓缩10倍；5-青黛伪品浓缩400倍
精密称取青黛及伪品各0.4g,分别置100ml锥形瓶中各加浓硫酸15ml,置80℃水浴中磺化1h,并时时振摇，取出放冷，分别移入各盛有50ml水的100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤(青黛为纯蓝色，伪品无色)。分别精密量取滤液各5ml,置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以水为空白，于400～800nm波长范围内扫描，结果青黛在608nm[1]波长处有最大吸收峰，伪品的吸收曲线与基线重合，无吸收。
2.4 伪劣品青黛的主要成份鉴别
从以上理化特性及其它鉴别结果可知，本研究所用“青黛”仅在浓度为药典规定浓度400倍时薄层层析才能检出青黛，其为一种伪劣品，主要含无机成份。进一步按文献方法[2]进行青黛及其伪品中无机阳离子及阴离子的系统分析。结果发现，在真品中仅含有CaCO3,见图3。而伪品中可能含有Fe2S3、FeS、SO-4、CaCO3等成份，见图4。
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图3 青黛无机成分鉴定示意图
图4 伪品无机成份鉴别示意图
3 讨 论
从以上测定结果可知，青黛从主要特性上与其伪品不同。首先从外形及颜色上有不同，但在无对照时不易鉴别，加之伪品在加酸后也可产气，易造成假象。但稍加试验就可发现，伪品在加酸产气后溶液的颜色与真品不同，真品溶液为黄棕色，伪品溶液近无色。在加氯仿及水后溶液的颜色青黛分别为紫蓝色和深蓝色，而伪品无色；在用火焰燃烧后真品可产生紫色烟雾，伪品不冒烟。以上为简易的鉴别方法，一般便可识别真伪。进一步用薄层色谱分析，在真品和伪品相同浓度下，真品可见纯蓝色和紫红色斑点，伪品无斑点。将伪品浓度浓缩为真品的400倍，才可见在与标准相同的位置上有斑点。本实验将真伪品分别按药典规定量磺化后，在400～800nm扫描，结果真品在608nm有一最大吸收峰，与规定一致[1];而伪品在400～800nm之间无任何吸收峰。从以上结果可肯定中药房所购“青黛”为伪劣品。从其不能被强酸硝化及灼烧等实验现象来看，伪品中主要含无机成分，经无机阴离子和阳离子系统分析，真品中可检出CaCO3,这是因为在青黛炮制时，加入石灰处理，故青黛成品中含少量的CaCO3;伪品中不仅含CaCO3,还含有Fe2S3、FeS、SO-4等成份，这与观察到的“青黛”外形主要为黑色细粉是吻合的,Fe2S3、FeS本身就是一种黑色的粉末状物质。“青黛”用这些成份掺假，不仅没有治疗作用，还有较强的毒性。
本研究对真伪青黛从一般简便鉴别法到仪器鉴别法都进行了探讨，方法准确可靠，可作为青黛的真伪品鉴别的一种方法。
参考文献
[1] 中国药典.一部.1995∶169.
[2] 余忠谊，邹学贤主编.分析化学.第2版.湖南：湖南科学技术出版社，1990∶5.
收稿日期：1998-07-24, 百拇医药
单位：徐贵丽 尹玉琴 邹 静(昆明 650032 成都军区昆明总医院药剂科)；王应建(系昆明市妇幼保健院药剂科进修生)
关键词：青黛；理化鉴别；吸收光谱；薄层层析
中国现代应用药学990410 摘要 目的：鉴别临床应用的一种可疑“青黛”的真伪。方法：采用显微、薄层层析、吸收光谱及理化鉴别法对其性状、显微及理化特性进行鉴别并与真品比较。结果：“青黛”从外形、颜色及一般化学性质上与真品不同；薄层层析按药典规定方法，“青黛”无斑点；吸收光谱鉴别真品在608nm有一最大吸收峰，伪品在400～800nm之间无吸收峰。进一步鉴别伪品中主要含有Fe2S3、FeS等对人体有害的掺假成分。结论：“青黛”为一种伪品，本法为青黛的真伪鉴别提供了依据。
Distinction between indigo naturalis and a false one
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Xu Guili(Xu GL),Wang Yinjian(Wang YJ),Yin Yuqing(Yin YQ),et al(Pharmacy of Kunming General Hospital of Chengdu Military Region,Kunming 650032)
ABSTRACT OBJECTIVE：To distinguish the “Indigo naturalis” applied in clinic.METHODS:The sample was studied by the microscopic characteristics,TLC,spectrophtometry and pharmacological properties of indigo naturalis.RESULTS:The shape,colour and general chemical characteristics of “Indigo naturalis” were different from genuine;there was no spots of “Indigo naturalis” on thin lager plate according the TLC method described in Chinese pharmacopoeia,the maximum absorption wave length of genuine was found at 608nm,but there is not any wavelenth absorbance at 400～800nm of “Indigo naturalis”.The main constituent of the fake were Fe2S3,FeS and so on.CONCLUSION:The sample was a false one.This research provide a way to distinguish indigo naturalis from the fakes.
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KEY WORDS Indigo naturalis,physicochemical identification,spectrophotometry,TLC
青黛为爵床科植物马蓝、蓼科植物蓼蓝或十字花科植物菘蓝的叶或茎叶经加工制得的干燥粉末或团块。具有清热解毒、凉血、定惊之功效。临床上常用于温毒发斑、血热吐、胸痛咳血、口疮、痄腮、喉痹、小儿惊痫。青黛为中国药典1995年版一部收载品种，系常用中药。近来我院中药房购进的青黛，临床疗效不佳，仔细观察其颜色略不同以往，故进行性状比较及真伪鉴别，发现确为伪劣品，现将方法介绍如下。
1 仪器与试样
仪器：岛津UV-2201紫外可见分光光度计；UV-4型多功能四用紫外线分析仪(上海科艺光学仪器厂)。
试样：青黛(云南省药材采购供应站，经鉴定由马蓝、菘蓝等组成)；伪品(本院中药房所购的青黛)；靛玉红、靛蓝对照品(中国药品生物制品检定所)。
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2 实验方法与结果
2.1 青黛与其伪品主要理化特性比较，见表1。
2.2 薄层色谱鉴定[1]
样品1：取靛蓝、靛玉红对照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
样品2：按药典规定，取青黛50mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤。
样品3：取伪品50mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤。
样品4：取伪品50mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤，提取液置热水浴上挥发至约剩0.5ml,含量比规定高10倍。
样品5：取伪品200mg,加氯仿5ml,振荡提取5min,过滤，提取液置热水浴上挥发至约剩0.5ml,用量比规定高400倍。
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取样品1，2和3各20μl,分别点样于同一块硅胶G薄层板上，置苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)溶液中展开，取出、晾干，样品1即标准对照品可见一清晰的纯蓝色斑点(Rf=0.5)及一清晰的紫红色斑点(Rf=0.3);样品2在与对照品靛蓝、靛玉红色谱相应的位置上，分别显相同的蓝色斑点和紫红色斑点，样品3展开后未见斑点，见图1；另取一块层析板，分别用样品1，4和5点样，展开后样品4无斑点，样品5分别在与靛蓝、靛玉红色谱相应的位置上显浅蓝色和浅紫红色斑点，见图2。
表1 青黛与其伪品主要理化性质比较
青 黛
伪 品
外形颜色
深蓝色细粉，质轻，易产生飞扬性粉尘，微有草腥气。显微镜下观察(10×40倍)为不规则无色及黑色颗粒，其中可见大量植物纤维，植物碎片及深蓝色片块状物
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黑色细粉，质重，不产生飞扬性粉尘，无嗅无味。显微镜下观察为不规则黑色颗粒及团块，其间可见长方形无色半透明结晶状物。偶见分散的深蓝色颗粒
水提取
青黛加蒸馏水后浮在水上面，振摇过滤，滤液为淡黄色
伪品加蒸馏水后呈块团状下沉，过滤后溶液近无色
氯仿提取
青黛在氯仿中浸泡后，振摇1min过滤，溶液呈蓝紫色，长时间放置(24h)后蓝色减弱，显紫红色
伪品溶液近无色，长时间放置(24h)后溶液变混浊
火焰灼烧
置坩锅中于无色火焰中灼烧，青黛在灼烧时产生紫色烟雾，灼烧后为淡棕色粉末。取青黛在火焰中直接灼烧(不用坩锅)，青黛产生淡紫色烟雾并燃烧，燃烧后无剩余灰分
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伪品在坩锅中灼烧不冒烟、灼烧后为黑色粉末。伪品在火焰中直接灼烧不冒烟，灼烧后大部分转变成灰色灰份
硝酸试验
取青黛0.5g于试管中，加硝酸至无气泡产生为止，反应结束后溶液为黄棕色，基本无残渣
伪品也产生气泡，反应结束后溶液近无色，且见大部分固体未被硝化
注：表中所有实验青黛和伪品同步进行
图1 青黛及其伪品的薄层色谱图
1-靛蓝、靛玉红标准对照；2-青黛真品；3-青黛伪品
2.3 青黛及其伪品的吸收光谱
图2 青黛及其伪品的薄层色谱图
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1-靛蓝、靛玉红标准对照；4-青黛伪品浓缩10倍；5-青黛伪品浓缩400倍
精密称取青黛及伪品各0.4g,分别置100ml锥形瓶中各加浓硫酸15ml,置80℃水浴中磺化1h,并时时振摇，取出放冷，分别移入各盛有50ml水的100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤(青黛为纯蓝色，伪品无色)。分别精密量取滤液各5ml,置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以水为空白，于400～800nm波长范围内扫描，结果青黛在608nm[1]波长处有最大吸收峰，伪品的吸收曲线与基线重合，无吸收。
2.4 伪劣品青黛的主要成份鉴别
从以上理化特性及其它鉴别结果可知，本研究所用“青黛”仅在浓度为药典规定浓度400倍时薄层层析才能检出青黛，其为一种伪劣品，主要含无机成份。进一步按文献方法[2]进行青黛及其伪品中无机阳离子及阴离子的系统分析。结果发现，在真品中仅含有CaCO3,见图3。而伪品中可能含有Fe2S3、FeS、SO-4、CaCO3等成份，见图4。
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图3 青黛无机成分鉴定示意图
图4 伪品无机成份鉴别示意图
3 讨 论
从以上测定结果可知，青黛从主要特性上与其伪品不同。首先从外形及颜色上有不同，但在无对照时不易鉴别，加之伪品在加酸后也可产气，易造成假象。但稍加试验就可发现，伪品在加酸产气后溶液的颜色与真品不同，真品溶液为黄棕色，伪品溶液近无色。在加氯仿及水后溶液的颜色青黛分别为紫蓝色和深蓝色，而伪品无色；在用火焰燃烧后真品可产生紫色烟雾，伪品不冒烟。以上为简易的鉴别方法，一般便可识别真伪。进一步用薄层色谱分析，在真品和伪品相同浓度下，真品可见纯蓝色和紫红色斑点，伪品无斑点。将伪品浓度浓缩为真品的400倍，才可见在与标准相同的位置上有斑点。本实验将真伪品分别按药典规定量磺化后，在400～800nm扫描，结果真品在608nm有一最大吸收峰，与规定一致[1];而伪品在400～800nm之间无任何吸收峰。从以上结果可肯定中药房所购“青黛”为伪劣品。从其不能被强酸硝化及灼烧等实验现象来看，伪品中主要含无机成分，经无机阴离子和阳离子系统分析，真品中可检出CaCO3,这是因为在青黛炮制时，加入石灰处理，故青黛成品中含少量的CaCO3;伪品中不仅含CaCO3,还含有Fe2S3、FeS、SO-4等成份，这与观察到的“青黛”外形主要为黑色细粉是吻合的,Fe2S3、FeS本身就是一种黑色的粉末状物质。“青黛”用这些成份掺假，不仅没有治疗作用，还有较强的毒性。
本研究对真伪青黛从一般简便鉴别法到仪器鉴别法都进行了探讨，方法准确可靠，可作为青黛的真伪品鉴别的一种方法。
参考文献
[1] 中国药典.一部.1995∶169.
[2] 余忠谊，邹学贤主编.分析化学.第2版.湖南：湖南科学技术出版社，1990∶5.
收稿日期：1998-07-24, 百拇医药