胎盘催乳素在米非司酮抗早孕流产后刮出物组织中的分布
作者：梁元晶 许晴 诸定寿 房敬燕
单位：首都医科大学生殖医学研究中心 梁元晶 许 晴 诸定寿；首都医科大学宣武医院妇产科 房敬燕
关键词：胎盘催乳素；子宫内膜；滋养层；米非司酮
首都医科大学学报990401 提要： 对米非司酮抗早孕流产后子宫出血的30例患者的刮出内膜组织，用免疫细胞化学方法显示胎盘催乳素(hPL)。结果：刮出组织含有正常子宫内膜组织、残留蜕膜组织和少量绒毛膜绒毛。hPL阳性物质分布于残留绒毛滋养层细胞、子宫内膜和蜕膜中的滋养层碎片及滋养层细胞芽，在残留蜕膜组织中还可见很多hPL阳性细胞(绒毛外滋养层细胞)。药流后刮出组织hPL阳性细胞的显示有助于及时发现侵入母体组织细胞的增生和癌变。
中图分类号： R169.42
The Distribution of Human Placental Lactogen in Abstracted Endometrial Tissue after Mifepristone Induced Abortion
, 百拇医药
Liang Yuanjing, Xu Qing, Zhu Dingshou
Reproductive Medical Center, Capital University of Medical Sciences
Fang Jingyan
Department of Gynecology and Obstetrics, Xuanwu Hospital Capital University of Medical Sciences
Abstract：30 patients were treated by abstracted endometrium because bleeding after mifepristone induced abortion. The sections of abstracted endometra were showed by immunocytochemical method. The abstracted tissue contained normal endometrium, remaining decidua and a small amount of chorion villi. hPL located in trophoblasts of remaining chorion villi, trophoblastic pieces and trophoblastic bulbs of the endometrium and decidua. There were a lot of hPL positive extravillous trophoblasts in remaining decidua. The trophoblastic bulbs and extravillous trophoblasts could transfer to distant placees and become cancer cells. To show hPL positive cell in abstracted tissues would help us to detect trophoblastic proliferating and trophoblastic cancer at the right time.
, 百拇医药
Key words：human placental lactogen; endometrium; trophoblast; mifepristone
米非司酮(商品名RU486)是一类孕激素拮抗剂，主要通过竞争蜕膜中的孕酮受体(PR)而阻断孕酮(P)的作用，使蜕膜变性坏死和出血。因蜕膜坏死造成胎盘绒毛膜变性坏死，胎盘营养缺乏、发育受阻而流产[1]。米非司酮配伍米索前列醇抗早孕的完全流产率达90%以上，目前存在的主要问题是有些患者流产后阴道出血较多，研究认为出血的原因是胎盘成分残留于子宫中[2～4]。残留组织含蜕膜和绒毛成分，前者是一类发育成熟而不会再增殖组织，后者是一类胚胎性组织，易分裂、增殖、侵入血管而转移，也可能发生癌变。胎盘催乳素(hPL)是滋养层细胞特有的胎盘激素，它既存在于合体滋养层细胞，也存在于侵入蜕膜的绒毛外滋养层细胞[5]。用免疫组织化学方法显示药流后刮出组织中的hPL有助于及时发现侵入母体组织的滋养层细胞的增殖与癌变。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 取材
首都医科大学宣武医院妇产科1998年4～12月收治的应用米非司酮配伍米索前列醇药流后子宫出血患者30例。年龄均小于40岁，停经天数小于49 d，经B超探测宫腔内胎囊直径≤3 cm，而且均无心血管、血液和内分泌系统疾病，无肝肾功能异常，未应用任何甾体药物，无宫内节育器，无长期服药史，无烟酒嗜好。
服药方法：空腹1次顿服米非司酮150 mg，72 h后空腹顿服米索前列醇600 mg。
药物流产时见到完整绒毛囊排出，流产后阴道流血偏多(≥1倍月经量)或阴道出血时间过长(出血40 d以上)的病例，作刮宫治疗，将刮出组织固定于10%甲醛中。
1.2 方法
, http://www.100md.com
所有组织用石蜡包埋，切成5 μm切片。HE染色作组织病理学研究。免疫细胞化学方法检测组织中的hPL阳性细胞的分布。
免疫细胞化学试剂：标记的链酶亲和素-生物素法(labelled streptavidin biotin method, LSAB法即SP试剂盒)。兔抗-hPL抗体(一抗)、生物素标记的羊抗兔IgG(二抗)和过氧化物酶标记的链酶亲和素，购于中山生物技术有限公司(美国Zymed产品分装)。
免疫组织化学方法：①切片经二甲苯脱蜡，各级乙醇下行入水；②3%过氧化氢孵育5 min(消除内源性过氧化物酶)；③10%正常山羊血清(PBS稀释)，室温(20 ℃)10 min；④倾去血清加一抗(稀释度1∶50)，室温，30 min；⑤PBS洗2次，每次5 min，二抗(生物素标记的IgG，1∶100)，室温，30 min；⑥PBS 2×5 min，辣根过氧化物酶标记的亲和素(1∶100)，室温，30 min；⑦PBS 2×5 min，DAB显色，5 min；⑧常规法脱水，二甲苯透明，树胶封片；⑨阴性对照：以PBS代替一抗；阳性对照：药流流出的绒毛膜绒毛。
, 百拇医药
光学显微镜观察，细胞内棕黄色物为hPL。
2 结果
2.1 刮出组织成分
刮出组织中含有子宫内膜组织，孕时未排尽残留蜕膜组织和一些绒毛膜绒毛。子宫内膜中有腺体、基质细胞和血管，间质中常见较多炎性细胞。腺体和间质常显示出不同步发育。蜕膜组织中的蜕膜细胞变性坏死，血管淤血。少量绒毛膜绒毛残存于蜕膜中，处于变性坏死阶段。
2.2 hPL在刮出组织中的表达
绒毛膜绒毛：绒毛的滋养层细胞hPL呈强阳性反应，轴心结缔组织呈阴性(图1)。
图1 米非司酮抗早孕后刮出组织 A残留蜕膜组织(变性坏死中) B残留绒毛膜绒毛 ×400
, 百拇医药
滋养层细胞碎片：蜕膜组织中存在一些结构模糊的腺样组织，hPL呈阳性反应，为滋养层碎片(图2)。
图2 弥散于蜕膜中的滋养层细胞碎片 hPL呈强阳性(▲) ×40
绒毛外滋养层细胞：有些蜕膜组织中弥散着hPL阳性细胞。细胞为单核，形态不一，有圆形、椭圆形和不规则形，似蜕膜细胞或成纤维细胞。hPL位于胞质，胞核呈阴性。这些细胞称为绒毛外滋养层细胞，是介于细胞滋养层和合体滋养层间的一类特殊细胞。
绒毛外滋养层细胞可位于蜕膜细胞间，也可在血管壁和血管腔内见到(图3)。细胞的不同定位可以认为它们可出入血管而转移。
图3 侵入子宫内膜血管腔的绒毛外滋养层细胞 hPL呈阳性反应(▲) ×400
子宫内膜组织：子宫内膜和残留蜕膜间可见一些hPL阳性细胞。
, 百拇医药
3 讨论
hCG(绒毛膜促性腺激素)、hPL和SP1(胎盘特异糖蛋白)是胎盘滋养层细胞所特有的3种糖蛋白，一般情况下母体组织不含有这些蛋白。因此，用它们显示子宫刮出组织可作为母体和胎儿成分的鉴别[6，7]。
我们曾经证明，hCG只定位于合体细胞滋养层，hPL和SP1既位于合体滋养层也位于弥散在蜕膜中的绒毛外滋养层细胞。hPL阳性度高于SP1[8]。本研究选用hPL显示米非司酮抗早孕后刮出组织中滋养层细胞获得同样结果。
刮出组织中的hPL阳性细胞以4种形式存在，第1类为绒毛浅层合体滋养层细胞，它们位于蜕膜外，并处于变性坏死中，一般不会增殖和癌变，也不会继续侵入内膜而转移。第2类是弥散于蜕膜(或子宫内膜)中的滋养层细胞碎片，这些侵入蜕膜、处于变性坏死阶段的细胞也不会增殖和癌变。第3类为滋养层细胞芽，这是一类极其幼稚和增生活跃的细胞，它们可以在残留蜕膜中增生，也可以迁移至内膜和远处，致成不良结果。第4类为绒毛外滋养层细胞，这类细胞也是一类幼稚细胞，它们也可进出血管，而它们是否会增生及癌变，它们分泌的hPL有何功能，有待进一步研究。
, 百拇医药
北京市教委资助解剖学重点实验室完成课题 首都医科大学和北京市卫生局基础临床结合基金资助课题
参考文献
1 贺昌海,吴学哲,戴德英.米非司酮配伍米索前列醇临床抗早孕随机比较实验.中国计划生育杂志,1992,2:29
2 Chan Y F, Ho P C. Blood loss in termination of early pregnancy by mifepristone and gerneprost. Contraception, 1993,17:85
3 许毓芬,金毓翠.药物流产后子宫刮出物的组织学观察.中华妇产科杂志,1994,29:739
4 丘晓燕,豫增,李大全.米非司酮抗早孕后子宫出血量与子宫腔组织学观察.生殖与避孕,1997,17:82～85
, 百拇医药
5 诸定寿,史小林,王兴翠.人早孕期蜕膜和绒毛外滋养层细胞的免疫组织化学研究.生殖与避孕,1991,11(1):12～26
6 诸定寿,Dean L, Moyer.用免疫组织化学方法鉴别异位妊娠和正常妊娠.首都医学院学报,1988,9(4):254～258
7 房敬燕,路欣,许晴,等.药物流产后子宫刮出物的组织病理学和免疫组织化学研究.首都医科大学学报,1999,20(2):89～91
8 刘芬哲,诸定寿,许晴.子宫肌瘤、子宫内膜、蜕膜及绒毛膜hCG和hPL的测定.首都医科大学学报,1996,17(4):286～290
收稿日期：1998-11-19, 百拇医药
单位：首都医科大学生殖医学研究中心 梁元晶 许 晴 诸定寿；首都医科大学宣武医院妇产科 房敬燕
关键词：胎盘催乳素；子宫内膜；滋养层；米非司酮
首都医科大学学报990401 提要： 对米非司酮抗早孕流产后子宫出血的30例患者的刮出内膜组织，用免疫细胞化学方法显示胎盘催乳素(hPL)。结果：刮出组织含有正常子宫内膜组织、残留蜕膜组织和少量绒毛膜绒毛。hPL阳性物质分布于残留绒毛滋养层细胞、子宫内膜和蜕膜中的滋养层碎片及滋养层细胞芽，在残留蜕膜组织中还可见很多hPL阳性细胞(绒毛外滋养层细胞)。药流后刮出组织hPL阳性细胞的显示有助于及时发现侵入母体组织细胞的增生和癌变。
中图分类号： R169.42
The Distribution of Human Placental Lactogen in Abstracted Endometrial Tissue after Mifepristone Induced Abortion
, 百拇医药
Liang Yuanjing, Xu Qing, Zhu Dingshou
Reproductive Medical Center, Capital University of Medical Sciences
Fang Jingyan
Department of Gynecology and Obstetrics, Xuanwu Hospital Capital University of Medical Sciences
Abstract：30 patients were treated by abstracted endometrium because bleeding after mifepristone induced abortion. The sections of abstracted endometra were showed by immunocytochemical method. The abstracted tissue contained normal endometrium, remaining decidua and a small amount of chorion villi. hPL located in trophoblasts of remaining chorion villi, trophoblastic pieces and trophoblastic bulbs of the endometrium and decidua. There were a lot of hPL positive extravillous trophoblasts in remaining decidua. The trophoblastic bulbs and extravillous trophoblasts could transfer to distant placees and become cancer cells. To show hPL positive cell in abstracted tissues would help us to detect trophoblastic proliferating and trophoblastic cancer at the right time.
, 百拇医药
Key words：human placental lactogen; endometrium; trophoblast; mifepristone
米非司酮(商品名RU486)是一类孕激素拮抗剂，主要通过竞争蜕膜中的孕酮受体(PR)而阻断孕酮(P)的作用，使蜕膜变性坏死和出血。因蜕膜坏死造成胎盘绒毛膜变性坏死，胎盘营养缺乏、发育受阻而流产[1]。米非司酮配伍米索前列醇抗早孕的完全流产率达90%以上，目前存在的主要问题是有些患者流产后阴道出血较多，研究认为出血的原因是胎盘成分残留于子宫中[2～4]。残留组织含蜕膜和绒毛成分，前者是一类发育成熟而不会再增殖组织，后者是一类胚胎性组织，易分裂、增殖、侵入血管而转移，也可能发生癌变。胎盘催乳素(hPL)是滋养层细胞特有的胎盘激素，它既存在于合体滋养层细胞，也存在于侵入蜕膜的绒毛外滋养层细胞[5]。用免疫组织化学方法显示药流后刮出组织中的hPL有助于及时发现侵入母体组织的滋养层细胞的增殖与癌变。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 取材
首都医科大学宣武医院妇产科1998年4～12月收治的应用米非司酮配伍米索前列醇药流后子宫出血患者30例。年龄均小于40岁，停经天数小于49 d，经B超探测宫腔内胎囊直径≤3 cm，而且均无心血管、血液和内分泌系统疾病，无肝肾功能异常，未应用任何甾体药物，无宫内节育器，无长期服药史，无烟酒嗜好。
服药方法：空腹1次顿服米非司酮150 mg，72 h后空腹顿服米索前列醇600 mg。
药物流产时见到完整绒毛囊排出，流产后阴道流血偏多(≥1倍月经量)或阴道出血时间过长(出血40 d以上)的病例，作刮宫治疗，将刮出组织固定于10%甲醛中。
1.2 方法
, http://www.100md.com
所有组织用石蜡包埋，切成5 μm切片。HE染色作组织病理学研究。免疫细胞化学方法检测组织中的hPL阳性细胞的分布。
免疫细胞化学试剂：标记的链酶亲和素-生物素法(labelled streptavidin biotin method, LSAB法即SP试剂盒)。兔抗-hPL抗体(一抗)、生物素标记的羊抗兔IgG(二抗)和过氧化物酶标记的链酶亲和素，购于中山生物技术有限公司(美国Zymed产品分装)。
免疫组织化学方法：①切片经二甲苯脱蜡，各级乙醇下行入水；②3%过氧化氢孵育5 min(消除内源性过氧化物酶)；③10%正常山羊血清(PBS稀释)，室温(20 ℃)10 min；④倾去血清加一抗(稀释度1∶50)，室温，30 min；⑤PBS洗2次，每次5 min，二抗(生物素标记的IgG，1∶100)，室温，30 min；⑥PBS 2×5 min，辣根过氧化物酶标记的亲和素(1∶100)，室温，30 min；⑦PBS 2×5 min，DAB显色，5 min；⑧常规法脱水，二甲苯透明，树胶封片；⑨阴性对照：以PBS代替一抗；阳性对照：药流流出的绒毛膜绒毛。
, 百拇医药
光学显微镜观察，细胞内棕黄色物为hPL。
2 结果
2.1 刮出组织成分
刮出组织中含有子宫内膜组织，孕时未排尽残留蜕膜组织和一些绒毛膜绒毛。子宫内膜中有腺体、基质细胞和血管，间质中常见较多炎性细胞。腺体和间质常显示出不同步发育。蜕膜组织中的蜕膜细胞变性坏死，血管淤血。少量绒毛膜绒毛残存于蜕膜中，处于变性坏死阶段。
2.2 hPL在刮出组织中的表达
绒毛膜绒毛：绒毛的滋养层细胞hPL呈强阳性反应，轴心结缔组织呈阴性(图1)。
图1 米非司酮抗早孕后刮出组织 A残留蜕膜组织(变性坏死中) B残留绒毛膜绒毛 ×400
, 百拇医药
滋养层细胞碎片：蜕膜组织中存在一些结构模糊的腺样组织，hPL呈阳性反应，为滋养层碎片(图2)。
图2 弥散于蜕膜中的滋养层细胞碎片 hPL呈强阳性(▲) ×40
绒毛外滋养层细胞：有些蜕膜组织中弥散着hPL阳性细胞。细胞为单核，形态不一，有圆形、椭圆形和不规则形，似蜕膜细胞或成纤维细胞。hPL位于胞质，胞核呈阴性。这些细胞称为绒毛外滋养层细胞，是介于细胞滋养层和合体滋养层间的一类特殊细胞。
绒毛外滋养层细胞可位于蜕膜细胞间，也可在血管壁和血管腔内见到(图3)。细胞的不同定位可以认为它们可出入血管而转移。
图3 侵入子宫内膜血管腔的绒毛外滋养层细胞 hPL呈阳性反应(▲) ×400
子宫内膜组织：子宫内膜和残留蜕膜间可见一些hPL阳性细胞。
, 百拇医药
3 讨论
hCG(绒毛膜促性腺激素)、hPL和SP1(胎盘特异糖蛋白)是胎盘滋养层细胞所特有的3种糖蛋白，一般情况下母体组织不含有这些蛋白。因此，用它们显示子宫刮出组织可作为母体和胎儿成分的鉴别[6，7]。
我们曾经证明，hCG只定位于合体细胞滋养层，hPL和SP1既位于合体滋养层也位于弥散在蜕膜中的绒毛外滋养层细胞。hPL阳性度高于SP1[8]。本研究选用hPL显示米非司酮抗早孕后刮出组织中滋养层细胞获得同样结果。
刮出组织中的hPL阳性细胞以4种形式存在，第1类为绒毛浅层合体滋养层细胞，它们位于蜕膜外，并处于变性坏死中，一般不会增殖和癌变，也不会继续侵入内膜而转移。第2类是弥散于蜕膜(或子宫内膜)中的滋养层细胞碎片，这些侵入蜕膜、处于变性坏死阶段的细胞也不会增殖和癌变。第3类为滋养层细胞芽，这是一类极其幼稚和增生活跃的细胞，它们可以在残留蜕膜中增生，也可以迁移至内膜和远处，致成不良结果。第4类为绒毛外滋养层细胞，这类细胞也是一类幼稚细胞，它们也可进出血管，而它们是否会增生及癌变，它们分泌的hPL有何功能，有待进一步研究。
, 百拇医药
北京市教委资助解剖学重点实验室完成课题 首都医科大学和北京市卫生局基础临床结合基金资助课题
参考文献
1 贺昌海,吴学哲,戴德英.米非司酮配伍米索前列醇临床抗早孕随机比较实验.中国计划生育杂志,1992,2:29
2 Chan Y F, Ho P C. Blood loss in termination of early pregnancy by mifepristone and gerneprost. Contraception, 1993,17:85
3 许毓芬,金毓翠.药物流产后子宫刮出物的组织学观察.中华妇产科杂志,1994,29:739
4 丘晓燕,豫增,李大全.米非司酮抗早孕后子宫出血量与子宫腔组织学观察.生殖与避孕,1997,17:82～85
, 百拇医药
5 诸定寿,史小林,王兴翠.人早孕期蜕膜和绒毛外滋养层细胞的免疫组织化学研究.生殖与避孕,1991,11(1):12～26
6 诸定寿,Dean L, Moyer.用免疫组织化学方法鉴别异位妊娠和正常妊娠.首都医学院学报,1988,9(4):254～258
7 房敬燕,路欣,许晴,等.药物流产后子宫刮出物的组织病理学和免疫组织化学研究.首都医科大学学报,1999,20(2):89～91
8 刘芬哲,诸定寿,许晴.子宫肌瘤、子宫内膜、蜕膜及绒毛膜hCG和hPL的测定.首都医科大学学报,1996,17(4):286～290
收稿日期：1998-11-19, 百拇医药