全自动血凝仪的使用体会
作者：周海燕
单位：浙江省诸暨市人民医院(诸暨 311800)
关键词：
右江民族医学院学报9904119 本院自1995年开始用ACL200全自动血凝仪测定凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、活性部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)。APTT测定作为内源性凝血系统、PT测定作为外源性凝血系统的过筛试验较玻片法测凝血时间有明显的优越性。现将本院几年来使用ACL200全自动血凝仪的体会总结如下：
1 材料与方法
1.1 材料 0.109mmol/L枸橼酸钠、ACL200全自动血凝仪、美国IL公司生产的PT-FIB、APTT、TT试剂、参比血浆、离心机、一次性塑料试管、分析盘、样品杯。
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1.2 方法 用0.109mmol/L枸橼酸钠0.21ml加1.8ml静脉血，混匀后，300r离心10min，取血浆0.5ml在ACL200全自动血凝仪上测定PT-FIB、APTT、TT。
2 结果
全自动血凝仪法测PT的结果可以以秒(s)、活动度(%)、比率(R/INR)表示，APTT、TT的结果以秒(s)，比率(R/INR)表示。全自动血凝仪可以测凝血因子，对缺乏因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等的标本，均可显示出来。而玻片法测凝血时间从毛细血管采血，由于采血过程中常可混入较多的组织液，即使缺乏因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等，也很难从凝血时间中显示出来，结果只能以秒(s)表示。
3 体会
3.1 标本采集的要求 要求抗凝比例适当，血球压积>55%或<20%，可使浆的抗凝比例不合适。此时，按下列公式使用抗凝剂：0.00185×血(ml)×(100-Hct)。标本要求无污染，且标本要及时分离，普通离心机3000r×10min。标本宜在2h内测定。时间过久Ⅴ因子可能在室温中消失，以及Ⅶ因子可在冷的条件下活化。如采血量过少、血凝时，则应退回标本，要求重抽。混浊、黄疸、高血脂、严重溶血可影响结果。血红蛋白(Hb)和胆红素(Bil)等对凝血分析仪测定纤维蛋白原(Fg)有影响。Hb对Fg测定的回归方程为y=-2.387x(y=Hb对Fg测定的干扰量g/L，x=Hb浓度mmol/L)。Bil对Fg测定干扰的回归方程为y=-0.002856x+0.1224(y=Bil对Fg测定的干扰量g/L，x=Bil浓度μmol/L)。对于明显溶血或黄疸的标本，需同时测定标本的Hb或胆红素深度浓度，然后用上述回归公式计算出干扰量来给以校正，使结果真正反映标本中Fg的含量。
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3.2 试剂的使用与保存 PT-FIB、APTT、TT试剂从冰箱取出后使用之前，均需在15～25℃预温30min，用前轻轻混匀，不可剧烈摇动。这些试剂价格昂贵，因此，试剂的节约问题显得非常重要。我们用样品杯盛试剂来代替试剂船(因试剂船的底面积大)的方法用于小样本的检测(一次检测少于5个样品)。不过此法得注意仪器吸样针的吸样情况，如果试剂不够吸得随时加上。PT-FIB试剂在15℃条件下可稳定保存1天，在2～8℃可保存5天。APTT试剂在15℃条件下可保存2天，在2～8℃可保存15天。TT的试剂原液在2～8℃可保存15天。参比血浆在15～25℃至少可保存4h，在-20℃至少可保存24h。试剂不用时，随时放冰箱保存。
3.3 分析盘的利用 为了最大限度地利用分析盘，用做组合测试的分析盘仍用来做组合测试，用做单项测试的分析盘仍用来做单项测试。
3.4 异常结果的处理 当PT、APTT、TT结果显示No Coag时，说明样品在读取时间内未凝集，用延长时间程序再做。确证无凝集形成，以>249s报告APTT，以>169s报告PT。当PT、APTT、TT显示Coag Error时，即为是已经凝集的样品或者FIB<1.77μmol/L。当PT、FIB、APTT、TT定标血浆值打黑框时，说明定标血浆值超过了PT参考值的±9%，R值和INR值均不给出，超过了FIB参考值的±20%，不给出标本的FIB值；超过了APTT参考值的±15%，R值不给出，超过了TT参考值的±20%，R值不给出，当FIB标本值>23.6μmol/L时，结果打黑框。当FIB标本值打***时，说明FIB>26.5μmol/L，以上两种情况，均应将标本用稀释1∶1稀释标本后重测。当标本FIB值在11.8～23.6μmol/L时，结果打黑框，或当定标血浆值正常，标本PT值给出却不给出标本的FIB值。上两种情况，如果PT时间非常长，凝集不稳定，用延长时间做。定标血浆值正常，标本PT给出s，%，R/INR值，却不给出标本的FIB值，说明光散射超过了放大器的最大限度。①试剂与血浆反应液非常混浊超过了读数界限。②当标本凝固时，曲线超过了读数界限，用标本稀释液1∶1稀释标本后重做。
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3.5 参考值的建立 每个实验室建立自己的参考值，一般选用20或更多的代表参考人群的个体进行测定，以其均值±2SD作为参考范围。根据下列条件选择代表参考人群的个体，选择18～45岁数量相近的男性及女性，应仔细的筛选去掉服下列药物的人员，激素、抗生素、避孕药、降压药；采血前不能有剧烈运动；采血应空腹或只服少量无脂类食物，可得到无混浊满意的标本。用上述的参考人群，其PT范围在10～14s，APTT26.5～36.5s，TT13～18s。各实验室应根据所用仪器、试剂、采血方法及所用抗凝剂建立正常参考值。
3.6 仪器的保养 每个工作日的开始及完结时，冲洗仪器1次。每天用蒸馏水冲洗及清理试剂池。每周用0.1N HCl清洁仪器所有表面、样品盘及分析组合，然后用蒸馏水过清。不要用0.1N HCl或水清洁光路和感应器。每两星期用棉花棒清洁产色通道之滤光片、卤素灯之光学表面、发光二极管感应器、发光二极管光学末端表现、分析转盘之20个小孔。每月清洁隔尘网、检查取样针之高度。
参考文献
1 董建中，王鸿利.标本采集对血栓与止血实验的影响.上海医学检验杂志，1996；11(4)：256
2 楼金叶，叶华平，俞锡林.血红蛋白与胆红素对凝血分析仪测定纤维蛋白原的影响.临床检验杂志，1996；2(14)：109
(1998-11-05收稿), 百拇医药
单位：浙江省诸暨市人民医院(诸暨 311800)
关键词：
右江民族医学院学报9904119 本院自1995年开始用ACL200全自动血凝仪测定凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、活性部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)。APTT测定作为内源性凝血系统、PT测定作为外源性凝血系统的过筛试验较玻片法测凝血时间有明显的优越性。现将本院几年来使用ACL200全自动血凝仪的体会总结如下：
1 材料与方法
1.1 材料 0.109mmol/L枸橼酸钠、ACL200全自动血凝仪、美国IL公司生产的PT-FIB、APTT、TT试剂、参比血浆、离心机、一次性塑料试管、分析盘、样品杯。
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1.2 方法 用0.109mmol/L枸橼酸钠0.21ml加1.8ml静脉血，混匀后，300r离心10min，取血浆0.5ml在ACL200全自动血凝仪上测定PT-FIB、APTT、TT。
2 结果
全自动血凝仪法测PT的结果可以以秒(s)、活动度(%)、比率(R/INR)表示，APTT、TT的结果以秒(s)，比率(R/INR)表示。全自动血凝仪可以测凝血因子，对缺乏因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等的标本，均可显示出来。而玻片法测凝血时间从毛细血管采血，由于采血过程中常可混入较多的组织液，即使缺乏因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等，也很难从凝血时间中显示出来，结果只能以秒(s)表示。
3 体会
3.1 标本采集的要求 要求抗凝比例适当，血球压积>55%或<20%，可使浆的抗凝比例不合适。此时，按下列公式使用抗凝剂：0.00185×血(ml)×(100-Hct)。标本要求无污染，且标本要及时分离，普通离心机3000r×10min。标本宜在2h内测定。时间过久Ⅴ因子可能在室温中消失，以及Ⅶ因子可在冷的条件下活化。如采血量过少、血凝时，则应退回标本，要求重抽。混浊、黄疸、高血脂、严重溶血可影响结果。血红蛋白(Hb)和胆红素(Bil)等对凝血分析仪测定纤维蛋白原(Fg)有影响。Hb对Fg测定的回归方程为y=-2.387x(y=Hb对Fg测定的干扰量g/L，x=Hb浓度mmol/L)。Bil对Fg测定干扰的回归方程为y=-0.002856x+0.1224(y=Bil对Fg测定的干扰量g/L，x=Bil浓度μmol/L)。对于明显溶血或黄疸的标本，需同时测定标本的Hb或胆红素深度浓度，然后用上述回归公式计算出干扰量来给以校正，使结果真正反映标本中Fg的含量。
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3.2 试剂的使用与保存 PT-FIB、APTT、TT试剂从冰箱取出后使用之前，均需在15～25℃预温30min，用前轻轻混匀，不可剧烈摇动。这些试剂价格昂贵，因此，试剂的节约问题显得非常重要。我们用样品杯盛试剂来代替试剂船(因试剂船的底面积大)的方法用于小样本的检测(一次检测少于5个样品)。不过此法得注意仪器吸样针的吸样情况，如果试剂不够吸得随时加上。PT-FIB试剂在15℃条件下可稳定保存1天，在2～8℃可保存5天。APTT试剂在15℃条件下可保存2天，在2～8℃可保存15天。TT的试剂原液在2～8℃可保存15天。参比血浆在15～25℃至少可保存4h，在-20℃至少可保存24h。试剂不用时，随时放冰箱保存。
3.3 分析盘的利用 为了最大限度地利用分析盘，用做组合测试的分析盘仍用来做组合测试，用做单项测试的分析盘仍用来做单项测试。
3.4 异常结果的处理 当PT、APTT、TT结果显示No Coag时，说明样品在读取时间内未凝集，用延长时间程序再做。确证无凝集形成，以>249s报告APTT，以>169s报告PT。当PT、APTT、TT显示Coag Error时，即为是已经凝集的样品或者FIB<1.77μmol/L。当PT、FIB、APTT、TT定标血浆值打黑框时，说明定标血浆值超过了PT参考值的±9%，R值和INR值均不给出，超过了FIB参考值的±20%，不给出标本的FIB值；超过了APTT参考值的±15%，R值不给出，超过了TT参考值的±20%，R值不给出，当FIB标本值>23.6μmol/L时，结果打黑框。当FIB标本值打***时，说明FIB>26.5μmol/L，以上两种情况，均应将标本用稀释1∶1稀释标本后重测。当标本FIB值在11.8～23.6μmol/L时，结果打黑框，或当定标血浆值正常，标本PT值给出却不给出标本的FIB值。上两种情况，如果PT时间非常长，凝集不稳定，用延长时间做。定标血浆值正常，标本PT给出s，%，R/INR值，却不给出标本的FIB值，说明光散射超过了放大器的最大限度。①试剂与血浆反应液非常混浊超过了读数界限。②当标本凝固时，曲线超过了读数界限，用标本稀释液1∶1稀释标本后重做。
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3.5 参考值的建立 每个实验室建立自己的参考值，一般选用20或更多的代表参考人群的个体进行测定，以其均值±2SD作为参考范围。根据下列条件选择代表参考人群的个体，选择18～45岁数量相近的男性及女性，应仔细的筛选去掉服下列药物的人员，激素、抗生素、避孕药、降压药；采血前不能有剧烈运动；采血应空腹或只服少量无脂类食物，可得到无混浊满意的标本。用上述的参考人群，其PT范围在10～14s，APTT26.5～36.5s，TT13～18s。各实验室应根据所用仪器、试剂、采血方法及所用抗凝剂建立正常参考值。
3.6 仪器的保养 每个工作日的开始及完结时，冲洗仪器1次。每天用蒸馏水冲洗及清理试剂池。每周用0.1N HCl清洁仪器所有表面、样品盘及分析组合，然后用蒸馏水过清。不要用0.1N HCl或水清洁光路和感应器。每两星期用棉花棒清洁产色通道之滤光片、卤素灯之光学表面、发光二极管感应器、发光二极管光学末端表现、分析转盘之20个小孔。每月清洁隔尘网、检查取样针之高度。
参考文献
1 董建中，王鸿利.标本采集对血栓与止血实验的影响.上海医学检验杂志，1996；11(4)：256
2 楼金叶，叶华平，俞锡林.血红蛋白与胆红素对凝血分析仪测定纤维蛋白原的影响.临床检验杂志，1996；2(14)：109
(1998-11-05收稿), 百拇医药