红花总黄素抑制血小板激活因子所致毛细血管通透性增加的研究*
作者：吴伟 金鸣 杨树东 李金荣
单位：北京市心肺血管疾病研究所(100029)
关键词：红花总黄花素；血小板激活因子；毛细血管通透性
红花总黄素抑制血小板激活因子所致 毛细血管通透性增加的研究
摘要 本文研究了红花总黄素(SY)拮抗血小板激活因子(PAF)诱导的小鼠毛细血管通透性增加的作用。小鼠随机分为正常动物空白对照组(A)，模型动物对照组(B)，模型动物大剂量(C)，中剂量(D)，低剂量(E)药物组共五组(n=12)。A，B组腹注NS，C，D，E组腹腔注射SY；30min后，各组尾静脉注射伊文斯蓝；尾注后30min，A组腿部肌肉注射NS，B，C，D，E组肌注PAF造模；肌注30min后处死小鼠。提取腿部肌肉中的染料，测定提取液620nm的吸收度反映毛细血管通透性。比色结果：A组0.080±0.045，B组0.456±0.156(与A组比较，P<0.01)，C组(100mg/kgSY)0.222±0.071，D组(70mg/kgSY)0.322±0.135，E组(50mg/kgSY)0.342±0.129，(C，D，E，组与B组比较依次为，P<0.01，0.05，0.05)，提示SY具有明显抑制PAF诱发的小鼠毛细血管通透性增加的作用，并且这种作用随着SY剂量增加而加强。
, 百拇医药
Studyon the Inhibition of Safflor
Yellow Against the Increase of Mouse
Capillary Permeability Induced by
Platelet Activating Factor
Wu We,Jin Ming,Yang Shudong,et al.
Beijing Institute of Heart and Lung Blood Vessel Diseases(100029)
Abstract The inhibition of Safflor Yellow (SY)on the increase of the capillary permeability induced by platelet activating factor (PA F) in mice was investigated with Evans blue(EB) permeating colorimetry.The mice were divided randomly(n=12) into five groups:normal control group(A),PAF damaged group(B),SY high dose group(C),SY middle dose group(D)and SY low dose group(E). SY was injected intraperitoneally in group C,D,E and NS was injected the same wa y in group A,B; 30min later,in each group,EB was injected intravenously and 30mi n later PAF was injected into the leg muscle to make the PAF damaged model(group B,C,D,E),NS was given intramuscularly to the ones in group A; 30min after intra muscular injection,the mice were killed and the EB was extraced from the muscle with fomamide,then the absorbance at 620nm was determined.The results were showe d as follows:group A:0.080±0.045,group B: 0.456±0.156(compared with group A,P <0.01),group C(100mg/kg SY):0.222±0.071,group D(70mg/kg SY):0.322±0.135,gr o up E(50mg/kg SY):0.342±0.129.(group C,D,E compared with group B individually, P<0.01,0.05,0.05).It was by showed these data that the inhibition effect of S Y against mouse capillary permeability increase induced by platelet activating f actor(PAF) was dosage dependent.
, 百拇医药
Key words: Safflor Yellow;Platelet activating factor; Capillary Permeability
血小板激活因子(PAF)是一炎症介质，具广泛的生物活性。它可诱发白细胞趋化，粘附及呼吸爆发等反应，使组织毛细血管通透性增加，并可促进血小板聚集和释放，收缩冠脉，抑制心肌收缩力，促进微循环障碍等，在许多心血管疾病的病理过程中起了重要的中介作用[1]。红花为最常用的活血化瘀药之一，具抗血栓，抗心肌缺血，改善微循环[2]，抗氧化[3]等多种心血管药理作用，但其抗PAF所致毛细血管通透性增加的作用尚未见报道。我们发现红花水提液具抑制PAF诱发的血小板聚集的作用，该水提液经硅胶柱层析可分得若干黄色具抗PAF作用的部位[4]。红花水溶性成分主要为红花黄色素，为了探讨红花总黄色素拮抗PAF的作用，我们观察了红花总黄色素抑制PAF诱发的小鼠毛细血管通透性增高的作用。
, 百拇医药
材料与方法
仪器 7230型分光光度计。
动物 雄性1级健康昆明小鼠，35.7±2.4g，军事医学科学院动物室提供。
试剂及药材 红花生药经北京中医药大学鉴定，为菊科植物CarthamustinctoriusL.的干燥花，以硅胶吸附法[5]制备为红花总黄色素水溶液。牛血清白蛋白(BSA)为上海丽珠东风生物技术有限公司产品，PAF为Sigma公司产品，伊文斯蓝为Serva公司进口分装，其余试剂均为国产分析纯级。
红花总黄色素对PAF所致小鼠毛细血管通透性增高的影响的试验方法：小鼠按体重分层随机分为5组：1.正常动物空白对照组；2.通透性增高模型动物对照组；3.模型动物大剂量(100mg/kg)药物组；4.模型动物中剂量(70mg/kg)药物组；5.模型动物低剂量(50mg/kg)药物组；每组12只。第1、2组动物腹腔注射生理盐水，第3～5组动物均腹腔注射给药。腹腔注射30min后，所有动物均给尾静脉注射伊文斯蓝生理盐水溶液(浓度为20g/L)2ml/kg。30min后，第2～5组右侧后腿肌肉注射含0.25%BSA的PAF生理盐水溶液(PAF浓度为1.91×10-8mol/L)50ul，第一组则注射不含PAF的0.25%BSA生理盐水溶液50ul。30min后处死所有动物，分别取两则后腿质量相等的肌肉，注意使剪下肌肉包括所有变蓝区域，两侧肌肉分别剪碎后各加2ml甲酰胺，置56°C水浴提取24hr。取其上清液，用分光光度计于620nm处，以左侧肌肉提取液为空白管，测定其右侧提取液的吸收度。
, http://www.100md.com
数据处理方法 数据进行方差齐性检验，以方差分析法及q检验法，t’检验法进行统计分析。
结 果
结果如表1所示，红花总黄色素拮抗PAF所致小鼠毛细血管通透性增高的作用与其剂量有明显的关系。
表1 红花总黄色素对PAF所致小鼠毛细血管通透性增高的影响
药物剂量(mg/kg)
吸收度
正常动物空白对照组---
0.080±0.045
通透性增高模型动物对照组---
0.456±0.156△△
, 百拇医药
通透性增高模型动物低剂量药物组
50
0.342±0.129▲
通透性增高模型动物中剂量药物组
70
0.322±0.135▲
通透性增高模型动物大剂量药物组
100
0.222±0.071▲▲
注 n=12；±SD；与正常动物空白对照组比较，△△P<0.01；与通透性增高模型动物对照组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01 讨 论
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红花为一常用的活血化瘀药，用于治疗心脑血管疾病已有数千年的历史。红花黄色素为红花主要水溶性成分，具抗血栓，抑制ADP等诱发的血小板聚集，改善微循环等作用[2]。我们发现，红花水溶性成分具明显的抑制PAF诱发的家兔血小板聚集的作用[4]，并认为该作用的机理可能为红花黄色素的PAF受体拮抗剂作用。PAF为一重要的炎症介质，它可使渗出增加，诱发毛细血管通透性增高。本文实验结果表明：红花总黄素抑制PAF诱导的毛细血管通透性增加具量效关系，提示其经整体吸收后亦具拮抗PAF的作用。
红花黄色素主要为黄酮甙类成分[2]，据报道槲皮素等多种黄酮类成分具明显的抗PAF作用[6]，提示它们可能有共同的机制，该作用及本文报道红花总黄色素抑制PAF诱发小鼠毛细血管通透性增加的作用均可能为PAF受体拮抗作用的机理，但红花总黄色素的这种机理还有待受体结合实验的证实。
在动脉粥样硬化，心肌缺血等血液循环障碍的病理过程中，PAF起了重要的介导作用[7]，红花用于治疗此类疾病以水煎液入药，提示红花黄色素抗PAF的作用可能为一重要机理。此外红花黄色素尚具抗血栓，改善微循环等多种心血管药理活性，且红花水提液具有抗心肌缺血的作用[2]。红花药源丰富，易于种植，红花黄色素提取工艺简单，产率高，毒性低，故将红花黄色素开发的前景较好，若开发成功，可产生可观的经济效益与明显的社会效益。
, http://www.100md.com
*本课题为国家自然科学基金，北京市跨世纪科技人才工程及北京市高科技实验室课题资助项目，国家自然科学基金项目编号39670884
参考文献
1 于自强，李少华.血小板激活因子与炎症.基础医学与临床，1992，12(3)：14～18.
2 阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用.第1版，北京：学苑出版社，1993，330～336.
3 金鸣，李金荣，蔡亚欣，等.红花水溶性成分抗氧化作用的研究.心肺血管病杂志，1998，17(4)：277～279.
4 杨树东，李金荣，蔡亚欣，等.红花水溶性成分的分离及其对血小板激活因子的拮抗作用.心肺血管病杂志，1996，15(4)：198.
5 金鸣，李家实，王玉芹，等.红花总黄色素及其制备方法和应用.中华人民共和国专利局发明专利申请号：98125121.8.
6 Shu Huey Tzeng,Wun chang Ko,Fengq Nien,Ko,Che Ming,Tng.Inhibintion of platele t aggregation by flavonoids.Thrombosis Research 1991,64:91～100.
7 韩雅玲.血小板激活因子与冠心病.国外医学，心血管疾病分册，1993，20(4)：195～1 98.
(1999-02-12收稿)
(1999-09-10修回), http://www.100md.com
单位：北京市心肺血管疾病研究所(100029)
关键词：红花总黄花素；血小板激活因子；毛细血管通透性
红花总黄素抑制血小板激活因子所致 毛细血管通透性增加的研究
摘要 本文研究了红花总黄素(SY)拮抗血小板激活因子(PAF)诱导的小鼠毛细血管通透性增加的作用。小鼠随机分为正常动物空白对照组(A)，模型动物对照组(B)，模型动物大剂量(C)，中剂量(D)，低剂量(E)药物组共五组(n=12)。A，B组腹注NS，C，D，E组腹腔注射SY；30min后，各组尾静脉注射伊文斯蓝；尾注后30min，A组腿部肌肉注射NS，B，C，D，E组肌注PAF造模；肌注30min后处死小鼠。提取腿部肌肉中的染料，测定提取液620nm的吸收度反映毛细血管通透性。比色结果：A组0.080±0.045，B组0.456±0.156(与A组比较，P<0.01)，C组(100mg/kgSY)0.222±0.071，D组(70mg/kgSY)0.322±0.135，E组(50mg/kgSY)0.342±0.129，(C，D，E，组与B组比较依次为，P<0.01，0.05，0.05)，提示SY具有明显抑制PAF诱发的小鼠毛细血管通透性增加的作用，并且这种作用随着SY剂量增加而加强。
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Studyon the Inhibition of Safflor
Yellow Against the Increase of Mouse
Capillary Permeability Induced by
Platelet Activating Factor
Wu We,Jin Ming,Yang Shudong,et al.
Beijing Institute of Heart and Lung Blood Vessel Diseases(100029)
Abstract The inhibition of Safflor Yellow (SY)on the increase of the capillary permeability induced by platelet activating factor (PA F) in mice was investigated with Evans blue(EB) permeating colorimetry.The mice were divided randomly(n=12) into five groups:normal control group(A),PAF damaged group(B),SY high dose group(C),SY middle dose group(D)and SY low dose group(E). SY was injected intraperitoneally in group C,D,E and NS was injected the same wa y in group A,B; 30min later,in each group,EB was injected intravenously and 30mi n later PAF was injected into the leg muscle to make the PAF damaged model(group B,C,D,E),NS was given intramuscularly to the ones in group A; 30min after intra muscular injection,the mice were killed and the EB was extraced from the muscle with fomamide,then the absorbance at 620nm was determined.The results were showe d as follows:group A:0.080±0.045,group B: 0.456±0.156(compared with group A,P <0.01),group C(100mg/kg SY):0.222±0.071,group D(70mg/kg SY):0.322±0.135,gr o up E(50mg/kg SY):0.342±0.129.(group C,D,E compared with group B individually, P<0.01,0.05,0.05).It was by showed these data that the inhibition effect of S Y against mouse capillary permeability increase induced by platelet activating f actor(PAF) was dosage dependent.
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Key words: Safflor Yellow;Platelet activating factor; Capillary Permeability
血小板激活因子(PAF)是一炎症介质，具广泛的生物活性。它可诱发白细胞趋化，粘附及呼吸爆发等反应，使组织毛细血管通透性增加，并可促进血小板聚集和释放，收缩冠脉，抑制心肌收缩力，促进微循环障碍等，在许多心血管疾病的病理过程中起了重要的中介作用[1]。红花为最常用的活血化瘀药之一，具抗血栓，抗心肌缺血，改善微循环[2]，抗氧化[3]等多种心血管药理作用，但其抗PAF所致毛细血管通透性增加的作用尚未见报道。我们发现红花水提液具抑制PAF诱发的血小板聚集的作用，该水提液经硅胶柱层析可分得若干黄色具抗PAF作用的部位[4]。红花水溶性成分主要为红花黄色素，为了探讨红花总黄色素拮抗PAF的作用，我们观察了红花总黄色素抑制PAF诱发的小鼠毛细血管通透性增高的作用。
, 百拇医药
材料与方法
仪器 7230型分光光度计。
动物 雄性1级健康昆明小鼠，35.7±2.4g，军事医学科学院动物室提供。
试剂及药材 红花生药经北京中医药大学鉴定，为菊科植物CarthamustinctoriusL.的干燥花，以硅胶吸附法[5]制备为红花总黄色素水溶液。牛血清白蛋白(BSA)为上海丽珠东风生物技术有限公司产品，PAF为Sigma公司产品，伊文斯蓝为Serva公司进口分装，其余试剂均为国产分析纯级。
红花总黄色素对PAF所致小鼠毛细血管通透性增高的影响的试验方法：小鼠按体重分层随机分为5组：1.正常动物空白对照组；2.通透性增高模型动物对照组；3.模型动物大剂量(100mg/kg)药物组；4.模型动物中剂量(70mg/kg)药物组；5.模型动物低剂量(50mg/kg)药物组；每组12只。第1、2组动物腹腔注射生理盐水，第3～5组动物均腹腔注射给药。腹腔注射30min后，所有动物均给尾静脉注射伊文斯蓝生理盐水溶液(浓度为20g/L)2ml/kg。30min后，第2～5组右侧后腿肌肉注射含0.25%BSA的PAF生理盐水溶液(PAF浓度为1.91×10-8mol/L)50ul，第一组则注射不含PAF的0.25%BSA生理盐水溶液50ul。30min后处死所有动物，分别取两则后腿质量相等的肌肉，注意使剪下肌肉包括所有变蓝区域，两侧肌肉分别剪碎后各加2ml甲酰胺，置56°C水浴提取24hr。取其上清液，用分光光度计于620nm处，以左侧肌肉提取液为空白管，测定其右侧提取液的吸收度。
, http://www.100md.com
数据处理方法 数据进行方差齐性检验，以方差分析法及q检验法，t’检验法进行统计分析。
结 果
结果如表1所示，红花总黄色素拮抗PAF所致小鼠毛细血管通透性增高的作用与其剂量有明显的关系。
表1 红花总黄色素对PAF所致小鼠毛细血管通透性增高的影响
药物剂量(mg/kg)
吸收度
正常动物空白对照组---
0.080±0.045
通透性增高模型动物对照组---
0.456±0.156△△
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通透性增高模型动物低剂量药物组
50
0.342±0.129▲
通透性增高模型动物中剂量药物组
70
0.322±0.135▲
通透性增高模型动物大剂量药物组
100
0.222±0.071▲▲
注 n=12；±SD；与正常动物空白对照组比较，△△P<0.01；与通透性增高模型动物对照组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01 讨 论
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红花为一常用的活血化瘀药，用于治疗心脑血管疾病已有数千年的历史。红花黄色素为红花主要水溶性成分，具抗血栓，抑制ADP等诱发的血小板聚集，改善微循环等作用[2]。我们发现，红花水溶性成分具明显的抑制PAF诱发的家兔血小板聚集的作用[4]，并认为该作用的机理可能为红花黄色素的PAF受体拮抗剂作用。PAF为一重要的炎症介质，它可使渗出增加，诱发毛细血管通透性增高。本文实验结果表明：红花总黄素抑制PAF诱导的毛细血管通透性增加具量效关系，提示其经整体吸收后亦具拮抗PAF的作用。
红花黄色素主要为黄酮甙类成分[2]，据报道槲皮素等多种黄酮类成分具明显的抗PAF作用[6]，提示它们可能有共同的机制，该作用及本文报道红花总黄色素抑制PAF诱发小鼠毛细血管通透性增加的作用均可能为PAF受体拮抗作用的机理，但红花总黄色素的这种机理还有待受体结合实验的证实。
在动脉粥样硬化，心肌缺血等血液循环障碍的病理过程中，PAF起了重要的介导作用[7]，红花用于治疗此类疾病以水煎液入药，提示红花黄色素抗PAF的作用可能为一重要机理。此外红花黄色素尚具抗血栓，改善微循环等多种心血管药理活性，且红花水提液具有抗心肌缺血的作用[2]。红花药源丰富，易于种植，红花黄色素提取工艺简单，产率高，毒性低，故将红花黄色素开发的前景较好，若开发成功，可产生可观的经济效益与明显的社会效益。
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*本课题为国家自然科学基金，北京市跨世纪科技人才工程及北京市高科技实验室课题资助项目，国家自然科学基金项目编号39670884
参考文献
1 于自强，李少华.血小板激活因子与炎症.基础医学与临床，1992，12(3)：14～18.
2 阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用.第1版，北京：学苑出版社，1993，330～336.
3 金鸣，李金荣，蔡亚欣，等.红花水溶性成分抗氧化作用的研究.心肺血管病杂志，1998，17(4)：277～279.
4 杨树东，李金荣，蔡亚欣，等.红花水溶性成分的分离及其对血小板激活因子的拮抗作用.心肺血管病杂志，1996，15(4)：198.
5 金鸣，李家实，王玉芹，等.红花总黄色素及其制备方法和应用.中华人民共和国专利局发明专利申请号：98125121.8.
6 Shu Huey Tzeng,Wun chang Ko,Fengq Nien,Ko,Che Ming,Tng.Inhibintion of platele t aggregation by flavonoids.Thrombosis Research 1991,64:91～100.
7 韩雅玲.血小板激活因子与冠心病.国外医学，心血管疾病分册，1993，20(4)：195～1 98.
(1999-02-12收稿)
(1999-09-10修回), http://www.100md.com