蒸馏水硝酸盐与亚硝酸盐检测试剂稳定因素的考察
作者：孙佩芳 夏卫华 赵其荣 李秀荣*
单位：中国人民解放军北京军区总医院 北京 100700
关键词：
中国医院药学杂志990535
1995年版中华人民共和国药典对蒸馏水检测增加了硝酸盐与亚硝酸盐检查，在检测时发现试剂贮存容器、温度、时间对试剂质量有影响，使检测结果不稳定，为了保证检测结果准确无误，对影响对氨基苯磺酸-α-萘胺试液的因素进行了考察。
1 检测原理
在酸性溶液中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再与α-萘胺起偶合反应，生成紫红色偶氮染料，显色深浅与亚硝酸盐含量成正比。加入锌粉的目的是将硝酸盐还原成亚硝酸盐。反应式如下：
, http://www.100md.com
2 试药与试液的制备
2.1试药 锌粉(上海硫酸厂)；醋酸 36%(天津化学试剂厂)；对氨基苯磺酸 (北京化工厂)；α-萘胺(北京长城化学试剂厂)；亚硝酸钠、硝酸钾(北京红星化工厂)。以上试药均为分析纯。
2.2 试液配制方法
2.2.1 对氨基苯磺酸-α-萘胺试液 按1995年版中国药典二部附录XVB试液[1]配制。
2.2.2 固体对氨基苯磺酸-α-萘胺 称取对氨基苯磺酸10 g，α-萘胺1 g，置105℃干燥2 h放冷的分析纯酒石酸89 g，置乳钵中充分研细、混匀，置棕色瓶内密塞保存。
2.2.3 亚硝酸钠标准液制备 精密称取105℃干燥4 h的亚硝酸钠0.246 2 g，置1 000 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 ml，置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，将此液稀释10倍，则1.0 ml含10-4 mg亚硝酸盐氮。
, 百拇医药
2.2.4 硝酸钾标准液制备 精密称取105℃干燥4 h硝酸钾0.721 6 g，置1 000 ml量瓶中，加水溶解至刻度，摇匀，精密吸取50 ml，置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。则1.0 ml含0.01 mg硝酸盐氮。
3 方法与结果
3.1试液灵敏度检测方法与结果
3.1.1 亚硝酸盐氮灵敏度检测方法及结果 取刻度线高低相同的10 ml具塞试管12支，分为2组，每组6支，分别依次加入亚硝酸钠标准液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml，一组用蒸馏水将每管稀释至8.0 ml，另一组稀释至10 ml;8.0 ml组加入液体对氨基苯磺酸-α-萘胺试液2.0 ml；10 ml组加入固体对氨基苯磺酸-α-萘胺2小匙，密塞摇匀，15 min后按比色规则观察两组溶液显色结果。结果显示两种试剂使溶液变成微红色的亚硝酸盐氮浓度为0.001 mg.L-1,结果见表1。
, 百拇医药
表1 亚硝酸盐氮灵敏度测定结果 试剂类别
浓 度/mg.L-1
0.000
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
固体试剂
-
+
+
, 百拇医药
+
+
+
液体试剂
-
+
+
+
+
+
注：- 无变化 + 显微红色
3.1.2 硝酸盐氮灵敏度检测方法及结果 分组操作方法同亚硝酸钠标准液，加入硝酸钾标准液的量分别为0.0，0.1，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，加入对氨基苯磺酸试液前各管加入葡萄糖锌粉一小匙(约40 mg)，结果两组溶液均在含硝酸盐氮0.5 mg.L-1时显微红色，结果见表2。
, 百拇医药
表2 硝酸盐灵敏度测定结果 试剂类别
浓 度/mg.L-1
0.0
0.1
0.3
0.4
0.5
0.6
固体试剂
-
-
-
, 百拇医药
-
+
+
液体试剂
-
-
-
-
+
+
3.1.3 影响试剂质量因素考察 按文献[1.2]配制固、液体试剂，分别贮于白色与茶色试剂瓶内置室温、冰箱保存，分别于0，1，2，3，4，5，6，9，12月进行颜色观察，试剂颜色变化情况见表3，4。表3 液体试剂在不同条件下贮存结果 贮存条件
, 百拇医药
时 间/月
0
1
2
3
4
5
6
9
12
白瓶室温
-
-
-
, 百拇医药
+
+
+
+
++
++
茶瓶室温
-
-
-
-
-
-
+
, http://www.100md.com
+
+
白瓶冰箱
-
-
-
-
+
+
+
++
++
茶瓶冰箱
-
, 百拇医药
-
-
-
-
-
-
-
-
表4 固体试剂在不同条件下贮存结果 贮存条件
时 间/月
0
1
2
, 百拇医药
3
4
5
6
9
12
白瓶室温
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, http://www.100md.com
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茶瓶室温
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白瓶冰箱
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
-
-
-
-
茶瓶冰箱
-
-
-
-
-
, 百拇医药
-
-
-
-
注：- 无变化 + 颜色加深 ++ 棕红色
结果显示液体试剂白色瓶室温存3个月颜色加深，冰箱内贮存最长也不能超过4个月，茶色瓶室温存6个月发生变色，冰箱贮存可以使用12个月，而固体试剂无论何种情况均未发生变化，1995年7月14日配制的试剂至今还在应用，外观未见异常。
3.2 固、液体试剂对四种水检测结果比较 按1995年版中国药典蒸馏水检测方法[3]中硝酸盐与亚硝酸盐检查法检测，自来水、电渗析水、去离子水、五效蒸馏水结果见表5，表6。
表5 两种试剂对4种水检测结果 名 称
, 百拇医药
固体试剂
液体试剂
自来水
++
++
电渗析水
+
+
去离子水
-
-
五效蒸镏水
-
, 百拇医药 -
注：- 无色 + 微红色 ++ 粉红色表6 固、液体试剂贮存12个月对水检测结果比较 水 名 称
固体试剂
液体试剂
0月
12月
0月
12月
五效蒸镏水
-
-
-
, 百拇医药 +
去离子去
-
-
-
+
电渗析水
++
++
++
++
常 水
+++
+++
, 百拇医药
+++
+++
注：- 无变化 + 微黄色 ++ 微红色 +++棕红色4 讨论
4.1 影响蒸馏水硝酸盐与亚硝酸盐检测结果因素 对氨基苯磺酸-α-萘胺试剂的质量影响检测结果，因其易受贮存容器、时间、温度等因素影响，故在实际工作中应引起重视。液体试剂应贮存于茶色瓶中室温或冰箱贮存，室内贮存不宜超过6个月，冰箱贮存可使用一年，使用时注意观察试剂颜色变化，发现异常应重新配制；配成固体试剂装入茶色瓶内室温密塞保存可以长期应用，每次加入两小匙(约60 mg)，十分方便，两种试剂的检测结果一致。
4.2 反应时间 经过实际测定固、液体试剂对亚硝酸盐氮的灵敏度均为0.001 mg.L-1，对硝酸盐氮的灵敏度为0.5 mg.L-1，由于反应受温度、时间影响较大，比色时间以加入试剂反应15 min为准。
, 百拇医药
4.3 锌粉的加入量 加入量过多出现黑色沉淀影响比色，为了保证准确可用注射用葡萄糖粉稀释，即取锌粉一份加39份注射用葡萄糖粉，在乳钵中研细混匀，每次加入一小匙(约40 mg)效果极佳。
* 张家口市第一附属医院
参考文献
1 中国药典.第二部.1995，附录XVB：167
2 随庆云编.水质及常见毒物快速检验法.人民军医出版社，1983：10-15
3 中国药典.第二部1995：997
(1998年1月29日收稿), 百拇医药(作者：孙佩芳 夏卫华 赵其荣 李秀荣*)
单位：中国人民解放军北京军区总医院 北京 100700
关键词：
中国医院药学杂志990535
1995年版中华人民共和国药典对蒸馏水检测增加了硝酸盐与亚硝酸盐检查，在检测时发现试剂贮存容器、温度、时间对试剂质量有影响，使检测结果不稳定，为了保证检测结果准确无误，对影响对氨基苯磺酸-α-萘胺试液的因素进行了考察。
1 检测原理
在酸性溶液中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再与α-萘胺起偶合反应，生成紫红色偶氮染料，显色深浅与亚硝酸盐含量成正比。加入锌粉的目的是将硝酸盐还原成亚硝酸盐。反应式如下：
, http://www.100md.com
2 试药与试液的制备
2.1试药 锌粉(上海硫酸厂)；醋酸 36%(天津化学试剂厂)；对氨基苯磺酸 (北京化工厂)；α-萘胺(北京长城化学试剂厂)；亚硝酸钠、硝酸钾(北京红星化工厂)。以上试药均为分析纯。
2.2 试液配制方法
2.2.1 对氨基苯磺酸-α-萘胺试液 按1995年版中国药典二部附录XVB试液[1]配制。
2.2.2 固体对氨基苯磺酸-α-萘胺 称取对氨基苯磺酸10 g，α-萘胺1 g，置105℃干燥2 h放冷的分析纯酒石酸89 g，置乳钵中充分研细、混匀，置棕色瓶内密塞保存。
2.2.3 亚硝酸钠标准液制备 精密称取105℃干燥4 h的亚硝酸钠0.246 2 g，置1 000 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 ml，置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，将此液稀释10倍，则1.0 ml含10-4 mg亚硝酸盐氮。
, 百拇医药
2.2.4 硝酸钾标准液制备 精密称取105℃干燥4 h硝酸钾0.721 6 g，置1 000 ml量瓶中，加水溶解至刻度，摇匀，精密吸取50 ml，置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。则1.0 ml含0.01 mg硝酸盐氮。
3 方法与结果
3.1试液灵敏度检测方法与结果
3.1.1 亚硝酸盐氮灵敏度检测方法及结果 取刻度线高低相同的10 ml具塞试管12支，分为2组，每组6支，分别依次加入亚硝酸钠标准液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml，一组用蒸馏水将每管稀释至8.0 ml，另一组稀释至10 ml;8.0 ml组加入液体对氨基苯磺酸-α-萘胺试液2.0 ml；10 ml组加入固体对氨基苯磺酸-α-萘胺2小匙，密塞摇匀，15 min后按比色规则观察两组溶液显色结果。结果显示两种试剂使溶液变成微红色的亚硝酸盐氮浓度为0.001 mg.L-1,结果见表1。
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表1 亚硝酸盐氮灵敏度测定结果 试剂类别
浓 度/mg.L-1
0.000
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
固体试剂
-
+
+
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+
+
+
液体试剂
-
+
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注：- 无变化 + 显微红色
3.1.2 硝酸盐氮灵敏度检测方法及结果 分组操作方法同亚硝酸钠标准液，加入硝酸钾标准液的量分别为0.0，0.1，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，加入对氨基苯磺酸试液前各管加入葡萄糖锌粉一小匙(约40 mg)，结果两组溶液均在含硝酸盐氮0.5 mg.L-1时显微红色，结果见表2。
, 百拇医药
表2 硝酸盐灵敏度测定结果 试剂类别
浓 度/mg.L-1
0.0
0.1
0.3
0.4
0.5
0.6
固体试剂
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液体试剂
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3.1.3 影响试剂质量因素考察 按文献[1.2]配制固、液体试剂，分别贮于白色与茶色试剂瓶内置室温、冰箱保存，分别于0，1，2，3，4，5，6，9，12月进行颜色观察，试剂颜色变化情况见表3，4。表3 液体试剂在不同条件下贮存结果 贮存条件
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时 间/月
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白瓶室温
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, 百拇医药
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茶瓶室温
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, http://www.100md.com
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白瓶冰箱
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茶瓶冰箱
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, 百拇医药
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表4 固体试剂在不同条件下贮存结果 贮存条件
时 间/月
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茶瓶室温
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白瓶冰箱
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茶瓶冰箱
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注：- 无变化 + 颜色加深 ++ 棕红色
结果显示液体试剂白色瓶室温存3个月颜色加深，冰箱内贮存最长也不能超过4个月，茶色瓶室温存6个月发生变色，冰箱贮存可以使用12个月，而固体试剂无论何种情况均未发生变化，1995年7月14日配制的试剂至今还在应用，外观未见异常。
3.2 固、液体试剂对四种水检测结果比较 按1995年版中国药典蒸馏水检测方法[3]中硝酸盐与亚硝酸盐检查法检测，自来水、电渗析水、去离子水、五效蒸馏水结果见表5，表6。
表5 两种试剂对4种水检测结果 名 称
, 百拇医药
固体试剂
液体试剂
自来水
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电渗析水
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去离子水
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五效蒸镏水
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注：- 无色 + 微红色 ++ 粉红色表6 固、液体试剂贮存12个月对水检测结果比较 水 名 称
固体试剂
液体试剂
0月
12月
0月
12月
五效蒸镏水
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去离子去
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电渗析水
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常 水
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注：- 无变化 + 微黄色 ++ 微红色 +++棕红色4 讨论
4.1 影响蒸馏水硝酸盐与亚硝酸盐检测结果因素 对氨基苯磺酸-α-萘胺试剂的质量影响检测结果，因其易受贮存容器、时间、温度等因素影响，故在实际工作中应引起重视。液体试剂应贮存于茶色瓶中室温或冰箱贮存，室内贮存不宜超过6个月，冰箱贮存可使用一年，使用时注意观察试剂颜色变化，发现异常应重新配制；配成固体试剂装入茶色瓶内室温密塞保存可以长期应用，每次加入两小匙(约60 mg)，十分方便，两种试剂的检测结果一致。
4.2 反应时间 经过实际测定固、液体试剂对亚硝酸盐氮的灵敏度均为0.001 mg.L-1，对硝酸盐氮的灵敏度为0.5 mg.L-1，由于反应受温度、时间影响较大，比色时间以加入试剂反应15 min为准。
, 百拇医药
4.3 锌粉的加入量 加入量过多出现黑色沉淀影响比色，为了保证准确可用注射用葡萄糖粉稀释，即取锌粉一份加39份注射用葡萄糖粉，在乳钵中研细混匀，每次加入一小匙(约40 mg)效果极佳。
* 张家口市第一附属医院
参考文献
1 中国药典.第二部.1995，附录XVB：167
2 随庆云编.水质及常见毒物快速检验法.人民军医出版社，1983：10-15
3 中国药典.第二部1995：997
(1998年1月29日收稿), 百拇医药(作者：孙佩芳 夏卫华 赵其荣 李秀荣*)