高效液相色谱法测定血浆中氟哌啶醇浓度
作者：陈绍林 杨惠莉 韦锦文
单位：贵阳 550004 贵州省安宁医院精神卫生研究所
关键词：氟哌啶醇；高效液相色谱法
中国现代应用药学990519摘要 目的：建立高效液相色谱法测定血浆中氟哌啶醇浓度的方法。方法：以乙腈-甲醇-0.025mol/L磷酸二氢钾(45∶5∶50,v/v)为流动相，氯氟哌啶醇作内标，紫外波长248nm处检测。结果：血浆中氟哌啶醇的最低检测浓度为0.5ng/ml,平均提取回收率为86.6%±4.9%,线性范围1～50ng/ml(r=0.9998),日内和日间RSD分别小于8%和9%。结论：方法灵敏、快速、准确，可满足临床治疗药物的监测工作。
Determination of haloperidol in human plasma by high-performance liquid chromatography
, http://www.100md.com
Chen Shaoling(Chen SL),Yang Huili(Yang HL),Wei Jinwen(Wei JW)
Institute of Mental Health,Guizhou An Ning Hospital,Guiyang 550004
ABSTRACT OBJECTIVE：A high-performance liquid chromatography procedure was developed for the determination of haloperidol in human plasma.METHOD:The mobile phase consisted of acetonitrile-methanol-0.025mol/L potassium dihydrogen phosphate(45∶5∶50,v/v) and UV detection wavelength was set at 248nm.RESULTS:The limit of detection for haloperidol was 0.5ng/ml.The absolute recovery was 86.6%±4.9%.The linearity was from 1 to 50ng/ml(r=0.9998) and the relative standard deviations of within-day and between-day were less than 8% and 9%,respectively.CONCLUSION:The method is rapid,sensitive and accurate enough to be used for clinical therapeutic drug monitoring.
, 百拇医药
KEY WORDS haloperidol,High-performance liquid chromatography
氟哌啶醇(haloperidol)是临床常用的抗精神病药物，其有效治疗血浓度范围为4～20ng/ml[1]。由于其治疗血浓度较低，需选择灵敏的测定方法，高效液相色谱法能满足其测定需要。用高效液相色谱法测定血浆氟哌啶醇浓度，文献已有报道[2]，但其方法或灵敏度尚不够高，或样品处理复杂。本文用反相高效液相色谱法测定血浆中氟哌啶醇浓度，具有分析速度快、灵敏度高和样品处理简单等特点。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 氟哌啶醇标准品(上海市精神卫生中心)；氯氟哌啶醇(内标)[Sigma(st. Louis,MO,USA)]；甲醇、乙腈、磷酸二氢钾、氢氧化钠、乙烷、异戊醇、硫酸等均为国产分析纯试剂；实验用水为超纯水。
, 百拇医药
1.2 仪器 日本岛津LC-5A型高效液相色谱仪，包括SPD-2A型紫外检测器，C-R3A型色谱数据处理机；Waters U6K进样器。
1.3 色谱条件 色谱柱：Zorbax ODS 4.6mm×25cm;流动相：乙腈-甲醇-0.025mol/L磷酸二氢钾(45∶5∶50,v/v),用前过滤和减压脱气；紫外波长248nm,灵敏度:0.005AUFS。
1.4 贮备液及标准液 精密称取氟哌啶醇和氯氟哌啶醇适量，用甲醇配制成100mg/L的贮备液，置4℃冰箱保存。使用时分别用甲醇将氟哌啶醇贮备液稀释成1和5mg/L浓度的标准溶液，氯氟哌啶醇贮备液稀释成5mg/L的内标溶液。
1.5 样品处理方法 取血浆1ml置具塞离心管中，加入10μl内标液,500μl 2mol/L氢氧化钠溶液和5ml己烷(含2%异戊醇)，振摇混合10min,3000r/min离心10min,将有机相移至另一离心管中，加入100μl 0.03mol/L硫酸溶液，旋涡混合1min,3000r/min离心10min,弃去有机相，精密量取水层50μl注入色谱柱层析。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 色谱分析结果 图1为空白血浆及加入适量标准品和内标的血浆色谱结果。
图1 空白血浆(A)及含氟哌啶醇和内标的血浆(B)色谱图
1-氟哌啶醇；2-内标
2.2 标准曲线、线性范围及最低检测浓度 在空白血浆中加入不同浓度的氟哌啶醇标准液和内标液，配成浓度为1.0,2.5,5.0,10.0,25.0和50.0μg/L的标准血浆样品，按样品处理方法处理后进样测定。以样品浓度(c)对样品与内标的峰面积比(Y)进行线性回归，在浓度1～50μg/L范围内线性关系良好(n=5),回归方程为:Y=0.0411c-0.0074,r=0.9998。在信噪比为4时，血浆中氟哌啶醇的最低检测浓度为0.5ng/ml。
2.3 回收率 取空白血浆1ml数份，各另入不同浓度的标准液和内标液，配成浓度为2.5,5.0,10.0,25.0和50.0μg/L的血浆样品，按样品处理方法处理后进样测定，计算方法回收率，结果见表1。另取相应浓度的标准液和内标液直接进样测定，将血浆样品处理后测定之峰面积与相应浓度的标准液直接进样测定之峰面积相比计算提取回收率。氟哌啶醇的平均提取回收率为86.6%±4.9%,内标的平均提取回收率为83.5%±5.3%(n=5)。
, http://www.100md.com
表1 方法回收率(±s,n=5) 加入量/μg.L-1
测得量/μg.L-1
回收率/%
RSD/%
2.5
2.39±0.18
95.60±7.17
7.5
5.0
4.92±0.33
98.40±6.49
, http://www.100md.com
6.6
10.0
9.62±0.47
96.20±4.71
4.9
25.0
25.13±0.95
100.52±3.82
3.8
50.0
49.87±1.74
99.74±3.49
, 百拇医药
3.5
2.4 精密度 取空白血浆1ml数份，各加入不同浓度的标准液和内标液，配成浓度为5.0,10.0和25.0μg/L,按样品处理方法处理后测定日内和日间差异，结果见表2。表2 方法精密度(n=5) 浓度
/μg/L
日 内
日 间
±s
RSD/%
±s
RSD/%
5.0
4.90±0.38
, http://www.100md.com
7.76
4.88±0.43
8.81
25.0
25.23±0.88
3.49
24.98±1.20
4.80
50.0
49.43±2.12
4.29
49.62±1.58
, http://www.100md.com
3.18
2.5 干扰实验 在同一色谱条件下，对临床常用的其它抗精神病药、抗抑郁药以及可能伍用的药物如氯丙嗪、氯氮平、异丙嗪、阿米替林、丙咪嗪、多虑平、安定、阿普唑仑、苯巴比妥、卡马西平、安坦、心得安、扑尔敏、复方阿司匹林、麻黄碱、哌替啶、维生素C、维生素B1和肝泰乐等进行了实验考察。结果表明，上述药物在氟哌啶醇和内标的保留时间附近均无峰出现。
3 讨 论
3.1 本文对流动相的组成及其比例、pH值等进行了考察，由于甲醇黏度较大，在本条件流速下，柱压较高，增加柱温虽可得到改善，但当柱温超过35℃时，待测物的分离度就会受到影响，故确定以乙腈和磷酸盐缓冲液加少量甲醇组成流动相，获得了良好的分离效果。
3.2 在用高效液相色谱法紫外检测生物样本的氟哌啶醇中，各文献对紫外波长的选择报道不一。Nisson[2]报道氟哌啶醇在248nm处吸收最大，且大多数内源性物质在该波长处吸收弱，从而减小了内源性物质的干扰。氟哌啶醇在195nm处也有一较大吸收，但在此低波长处，许多内源性物质均有较强的吸收而干扰测定。因此，本方法选择248nm测定氟哌啶醇，使测定的灵敏度和选择性大大提高。
, 百拇医药
3.3 在样品处理中，我们采用有机溶剂一步提取，提取率与文献报导接近。提取溶剂已烷中加入2%异戊醇可增加提取液极性，提高待测物的溶解度。
3.4 本法灵敏度、选择性、精密度和准确度符合要求，血浆样本中药物的提取方法简便易行，适于临床治疗药物的监测工作。
参考文献
1 Fujii T,Hatanaka K,Sato G,et al.Selective determination of haploperidol in human serum:surface ionization mass pectrometry and gas chromatography with surface ionization detection.J Chromatogr,1996,687∶395.
2 Nilsson LB.Reversed-phase lon-pair liquid chromatographic method for the determination of low concentrations of haloperidol in plasma.J Chromatogr,1998,431∶113.
收稿日期：1998-04-10, 百拇医药
单位：贵阳 550004 贵州省安宁医院精神卫生研究所
关键词：氟哌啶醇；高效液相色谱法
中国现代应用药学990519摘要 目的：建立高效液相色谱法测定血浆中氟哌啶醇浓度的方法。方法：以乙腈-甲醇-0.025mol/L磷酸二氢钾(45∶5∶50,v/v)为流动相，氯氟哌啶醇作内标，紫外波长248nm处检测。结果：血浆中氟哌啶醇的最低检测浓度为0.5ng/ml,平均提取回收率为86.6%±4.9%,线性范围1～50ng/ml(r=0.9998),日内和日间RSD分别小于8%和9%。结论：方法灵敏、快速、准确，可满足临床治疗药物的监测工作。
Determination of haloperidol in human plasma by high-performance liquid chromatography
, http://www.100md.com
Chen Shaoling(Chen SL),Yang Huili(Yang HL),Wei Jinwen(Wei JW)
Institute of Mental Health,Guizhou An Ning Hospital,Guiyang 550004
ABSTRACT OBJECTIVE：A high-performance liquid chromatography procedure was developed for the determination of haloperidol in human plasma.METHOD:The mobile phase consisted of acetonitrile-methanol-0.025mol/L potassium dihydrogen phosphate(45∶5∶50,v/v) and UV detection wavelength was set at 248nm.RESULTS:The limit of detection for haloperidol was 0.5ng/ml.The absolute recovery was 86.6%±4.9%.The linearity was from 1 to 50ng/ml(r=0.9998) and the relative standard deviations of within-day and between-day were less than 8% and 9%,respectively.CONCLUSION:The method is rapid,sensitive and accurate enough to be used for clinical therapeutic drug monitoring.
, 百拇医药
KEY WORDS haloperidol,High-performance liquid chromatography
氟哌啶醇(haloperidol)是临床常用的抗精神病药物，其有效治疗血浓度范围为4～20ng/ml[1]。由于其治疗血浓度较低，需选择灵敏的测定方法，高效液相色谱法能满足其测定需要。用高效液相色谱法测定血浆氟哌啶醇浓度，文献已有报道[2]，但其方法或灵敏度尚不够高，或样品处理复杂。本文用反相高效液相色谱法测定血浆中氟哌啶醇浓度，具有分析速度快、灵敏度高和样品处理简单等特点。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 氟哌啶醇标准品(上海市精神卫生中心)；氯氟哌啶醇(内标)[Sigma(st. Louis,MO,USA)]；甲醇、乙腈、磷酸二氢钾、氢氧化钠、乙烷、异戊醇、硫酸等均为国产分析纯试剂；实验用水为超纯水。
, 百拇医药
1.2 仪器 日本岛津LC-5A型高效液相色谱仪，包括SPD-2A型紫外检测器，C-R3A型色谱数据处理机；Waters U6K进样器。
1.3 色谱条件 色谱柱：Zorbax ODS 4.6mm×25cm;流动相：乙腈-甲醇-0.025mol/L磷酸二氢钾(45∶5∶50,v/v),用前过滤和减压脱气；紫外波长248nm,灵敏度:0.005AUFS。
1.4 贮备液及标准液 精密称取氟哌啶醇和氯氟哌啶醇适量，用甲醇配制成100mg/L的贮备液，置4℃冰箱保存。使用时分别用甲醇将氟哌啶醇贮备液稀释成1和5mg/L浓度的标准溶液，氯氟哌啶醇贮备液稀释成5mg/L的内标溶液。
1.5 样品处理方法 取血浆1ml置具塞离心管中，加入10μl内标液,500μl 2mol/L氢氧化钠溶液和5ml己烷(含2%异戊醇)，振摇混合10min,3000r/min离心10min,将有机相移至另一离心管中，加入100μl 0.03mol/L硫酸溶液，旋涡混合1min,3000r/min离心10min,弃去有机相，精密量取水层50μl注入色谱柱层析。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 色谱分析结果 图1为空白血浆及加入适量标准品和内标的血浆色谱结果。
图1 空白血浆(A)及含氟哌啶醇和内标的血浆(B)色谱图
1-氟哌啶醇；2-内标
2.2 标准曲线、线性范围及最低检测浓度 在空白血浆中加入不同浓度的氟哌啶醇标准液和内标液，配成浓度为1.0,2.5,5.0,10.0,25.0和50.0μg/L的标准血浆样品，按样品处理方法处理后进样测定。以样品浓度(c)对样品与内标的峰面积比(Y)进行线性回归，在浓度1～50μg/L范围内线性关系良好(n=5),回归方程为:Y=0.0411c-0.0074,r=0.9998。在信噪比为4时，血浆中氟哌啶醇的最低检测浓度为0.5ng/ml。
2.3 回收率 取空白血浆1ml数份，各另入不同浓度的标准液和内标液，配成浓度为2.5,5.0,10.0,25.0和50.0μg/L的血浆样品，按样品处理方法处理后进样测定，计算方法回收率，结果见表1。另取相应浓度的标准液和内标液直接进样测定，将血浆样品处理后测定之峰面积与相应浓度的标准液直接进样测定之峰面积相比计算提取回收率。氟哌啶醇的平均提取回收率为86.6%±4.9%,内标的平均提取回收率为83.5%±5.3%(n=5)。
, http://www.100md.com
表1 方法回收率(±s,n=5) 加入量/μg.L-1
测得量/μg.L-1
回收率/%
RSD/%
2.5
2.39±0.18
95.60±7.17
7.5
5.0
4.92±0.33
98.40±6.49
, http://www.100md.com
6.6
10.0
9.62±0.47
96.20±4.71
4.9
25.0
25.13±0.95
100.52±3.82
3.8
50.0
49.87±1.74
99.74±3.49
, 百拇医药
3.5
2.4 精密度 取空白血浆1ml数份，各加入不同浓度的标准液和内标液，配成浓度为5.0,10.0和25.0μg/L,按样品处理方法处理后测定日内和日间差异，结果见表2。表2 方法精密度(n=5) 浓度
/μg/L
日 内
日 间
±s
RSD/%
±s
RSD/%
5.0
4.90±0.38
, http://www.100md.com
7.76
4.88±0.43
8.81
25.0
25.23±0.88
3.49
24.98±1.20
4.80
50.0
49.43±2.12
4.29
49.62±1.58
, http://www.100md.com
3.18
2.5 干扰实验 在同一色谱条件下，对临床常用的其它抗精神病药、抗抑郁药以及可能伍用的药物如氯丙嗪、氯氮平、异丙嗪、阿米替林、丙咪嗪、多虑平、安定、阿普唑仑、苯巴比妥、卡马西平、安坦、心得安、扑尔敏、复方阿司匹林、麻黄碱、哌替啶、维生素C、维生素B1和肝泰乐等进行了实验考察。结果表明，上述药物在氟哌啶醇和内标的保留时间附近均无峰出现。
3 讨 论
3.1 本文对流动相的组成及其比例、pH值等进行了考察，由于甲醇黏度较大，在本条件流速下，柱压较高，增加柱温虽可得到改善，但当柱温超过35℃时，待测物的分离度就会受到影响，故确定以乙腈和磷酸盐缓冲液加少量甲醇组成流动相，获得了良好的分离效果。
3.2 在用高效液相色谱法紫外检测生物样本的氟哌啶醇中，各文献对紫外波长的选择报道不一。Nisson[2]报道氟哌啶醇在248nm处吸收最大，且大多数内源性物质在该波长处吸收弱，从而减小了内源性物质的干扰。氟哌啶醇在195nm处也有一较大吸收，但在此低波长处，许多内源性物质均有较强的吸收而干扰测定。因此，本方法选择248nm测定氟哌啶醇，使测定的灵敏度和选择性大大提高。
, 百拇医药
3.3 在样品处理中，我们采用有机溶剂一步提取，提取率与文献报导接近。提取溶剂已烷中加入2%异戊醇可增加提取液极性，提高待测物的溶解度。
3.4 本法灵敏度、选择性、精密度和准确度符合要求，血浆样本中药物的提取方法简便易行，适于临床治疗药物的监测工作。
参考文献
1 Fujii T,Hatanaka K,Sato G,et al.Selective determination of haploperidol in human serum:surface ionization mass pectrometry and gas chromatography with surface ionization detection.J Chromatogr,1996,687∶395.
2 Nilsson LB.Reversed-phase lon-pair liquid chromatographic method for the determination of low concentrations of haloperidol in plasma.J Chromatogr,1998,431∶113.
收稿日期：1998-04-10, 百拇医药