硫酸阿米卡星注射液的鲎法细菌内毒素检测
作者：柯正方 袁惠德
单位：浙江省台州市药品检验所 临海317000
关键词：鲎试剂；细菌内毒素；硫酸阿米卡星注射液
中国医院药学杂志990515 摘要 目的:考察硫酸阿米卡星注射液细菌内毒素检查法的可行性。方法:抑制增强试验和对比试验。结果：1∶40的样品溶液无干扰作用，与家兔法结果一致。结论:将硫酸阿米卡星注射液稀释40倍可用灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂作细菌内毒素检查。
The test for bacterial endotoxins of amikacin sulfate injection
Ke Zhengfang,Yuan Huide (Zhejiang taizhou Institute for Drug Control Linhai 317000)
, 百拇医药
ABSTRACT OBJECTIVE:To inspect on the feasibility of bacterial endotoxin test for amikacin sulfate injection.METHODS:Inhibition and enhancement test & contrast test.RESULTS:The test was not disturbed by the sample solution of 1∶40, as was the same as rabbit test.CONCLUSIONS:Amikacin sulfate injection added the solvent up to 40 times could be tested with the sentivity of 0.5EU.ml-1.
KEY WORDS tachypleus amebocyte lysate,bacterial endotoxin,amikacin sulfate injection
, 百拇医药
硫酸阿米卡星注射液在USP23版中已采用细菌内毒素检查法代替家兔法进行热原检查。为此，参照USP23版的“细菌内毒素检查法”中的抑制增强试验的基本原理及细菌内毒素检查的实验设计[1]，我们对硫酸阿米卡星的细菌内毒素检验进行了实验研究。
1 材料
鲎试剂(福建平潭东方鲎试剂厂，批号980503，标示灵敏度0.5EU.ml-1，0.5ml/支；湛江中美生物有限公司，批号980615，标示灵敏度0.5 EU.ml-1，0.5 ml/支)；细菌内毒素工作标准品(福建福州东方鲎试剂厂，批号970925，10EU/支)；鲎试剂及细菌内毒素溶解稀释超纯水(卫生部药品生物制品检定所，批号2)；硫酸阿米卡星注射液(浙江永宁制药厂，批号970603，970708，980405，规格2 ml∶0.2 g)。
, http://www.100md.com
2 方法和结果
2.1 细菌内毒素限值(L)的确定 中国药典1995年版[2]规定本品热原检查为将样品加灭菌注射用水制成每1 ml中含2.5万单位的溶液，剂量按家兔体重每1 kg注射1 ml，相当于注射原液0.25 ml。细菌内毒素对家兔的致热阈为5 EU.kg-1，本品细菌内毒素理论限值为5/0.25=20EU.ml-1或5/25=0.20EU.mg-1。
2.2 鲎试剂灵敏度复核 按中国药典1995年版“细菌内毒素检查法”操作，将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素溶解检查用水溶解后置旋涡混合器上混合15 min，然后将其按1∶2制备成以标示灵敏度为中值的5个稀释液，每稀释一步均置旋涡混合器上混合30 s。每一浓度平行做4管。结果两批鲎试剂反应结果相同，如表1所示。
, 百拇医药
2.3 抑制增强试验 以超纯水将阿米卡星注射液样品稀释20倍，然后再按等比稀释将样品稀释为40，80，160倍，以各稀释浓度样品溶液将细菌内毒素工作标准品按1∶2等比系列稀释成系列内毒素溶液，内毒素的稀释过程为10 EU.ml-1→2 EU.ml-1→1 EU.ml-1→0.5 EU.ml-1→0.25 EU.ml-1→0.125 EU.ml-1，以1∶T(T为稀释倍数)稀释倍数样品分别对2批鲎试剂作抑制增强试验，测得3批样品的反应结果一致，如表2，表3所示。
表1 鲎试剂灵敏度复核(n=4) 细菌内毒素浓度/EU.ml-1
反应结果
, 百拇医药
2
+
1
+
0.5
+
0.25
-
0.125
-
表2 抑制增强试验结果(鲎试剂批号980503 n=4) 1∶T
2
1
, http://www.100md.com
0.5
0.25
0.125
1∶20
+
+
+
-
-
1∶40
+
+
+
-
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-
1∶80
+
+
+
-
-
1∶160
+
+
+
-
-
表3 抑制增强试验结果(鲎试剂批号980615 n=4) 1∶T
, http://www.100md.com
2
1
0.5
0.25
0.125
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-
2.4 样品的细菌内毒素检测结果 将样品1∶40稀释后，分别用2批鲎试剂进行检测，结果一致。如表4所示。表4 3批样品的细菌内毒素鲎试剂法检测结果 样品批号
管号
阳性对照
阴性对照
1
2
970603
-
-
+
-
, http://www.100md.com
970708
-
-
+
-
980405
-
-
+
-
2.5 家兔法热原检查 按中国药典1995年版操作，结果3批样品热原检查结果均符合规定。3 讨论
试验结果表明，将样品1∶40稀释溶液对标示灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂2批不同厂家生产的鲎试剂均无抑制增强作用。样品的细菌内毒素试验表明，将样品1∶40稀释以标示灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂可用于样品的细菌内毒素检测，与家兔法热原检查结果一致。
参考文献
1 黄清泉，夏振民.细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)：72
2 中国药典.1995年版,二部：909
(1998年8月20日收稿), 百拇医药
单位：浙江省台州市药品检验所 临海317000
关键词：鲎试剂；细菌内毒素；硫酸阿米卡星注射液
中国医院药学杂志990515 摘要 目的:考察硫酸阿米卡星注射液细菌内毒素检查法的可行性。方法:抑制增强试验和对比试验。结果：1∶40的样品溶液无干扰作用，与家兔法结果一致。结论:将硫酸阿米卡星注射液稀释40倍可用灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂作细菌内毒素检查。
The test for bacterial endotoxins of amikacin sulfate injection
Ke Zhengfang,Yuan Huide (Zhejiang taizhou Institute for Drug Control Linhai 317000)
, 百拇医药
ABSTRACT OBJECTIVE:To inspect on the feasibility of bacterial endotoxin test for amikacin sulfate injection.METHODS:Inhibition and enhancement test & contrast test.RESULTS:The test was not disturbed by the sample solution of 1∶40, as was the same as rabbit test.CONCLUSIONS:Amikacin sulfate injection added the solvent up to 40 times could be tested with the sentivity of 0.5EU.ml-1.
KEY WORDS tachypleus amebocyte lysate,bacterial endotoxin,amikacin sulfate injection
, 百拇医药
硫酸阿米卡星注射液在USP23版中已采用细菌内毒素检查法代替家兔法进行热原检查。为此，参照USP23版的“细菌内毒素检查法”中的抑制增强试验的基本原理及细菌内毒素检查的实验设计[1]，我们对硫酸阿米卡星的细菌内毒素检验进行了实验研究。
1 材料
鲎试剂(福建平潭东方鲎试剂厂，批号980503，标示灵敏度0.5EU.ml-1，0.5ml/支；湛江中美生物有限公司，批号980615，标示灵敏度0.5 EU.ml-1，0.5 ml/支)；细菌内毒素工作标准品(福建福州东方鲎试剂厂，批号970925，10EU/支)；鲎试剂及细菌内毒素溶解稀释超纯水(卫生部药品生物制品检定所，批号2)；硫酸阿米卡星注射液(浙江永宁制药厂，批号970603，970708，980405，规格2 ml∶0.2 g)。
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2 方法和结果
2.1 细菌内毒素限值(L)的确定 中国药典1995年版[2]规定本品热原检查为将样品加灭菌注射用水制成每1 ml中含2.5万单位的溶液，剂量按家兔体重每1 kg注射1 ml，相当于注射原液0.25 ml。细菌内毒素对家兔的致热阈为5 EU.kg-1，本品细菌内毒素理论限值为5/0.25=20EU.ml-1或5/25=0.20EU.mg-1。
2.2 鲎试剂灵敏度复核 按中国药典1995年版“细菌内毒素检查法”操作，将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素溶解检查用水溶解后置旋涡混合器上混合15 min，然后将其按1∶2制备成以标示灵敏度为中值的5个稀释液，每稀释一步均置旋涡混合器上混合30 s。每一浓度平行做4管。结果两批鲎试剂反应结果相同，如表1所示。
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2.3 抑制增强试验 以超纯水将阿米卡星注射液样品稀释20倍，然后再按等比稀释将样品稀释为40，80，160倍，以各稀释浓度样品溶液将细菌内毒素工作标准品按1∶2等比系列稀释成系列内毒素溶液，内毒素的稀释过程为10 EU.ml-1→2 EU.ml-1→1 EU.ml-1→0.5 EU.ml-1→0.25 EU.ml-1→0.125 EU.ml-1，以1∶T(T为稀释倍数)稀释倍数样品分别对2批鲎试剂作抑制增强试验，测得3批样品的反应结果一致，如表2，表3所示。
表1 鲎试剂灵敏度复核(n=4) 细菌内毒素浓度/EU.ml-1
反应结果
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表2 抑制增强试验结果(鲎试剂批号980503 n=4) 1∶T
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表3 抑制增强试验结果(鲎试剂批号980615 n=4) 1∶T
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2.4 样品的细菌内毒素检测结果 将样品1∶40稀释后，分别用2批鲎试剂进行检测，结果一致。如表4所示。表4 3批样品的细菌内毒素鲎试剂法检测结果 样品批号
管号
阳性对照
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2.5 家兔法热原检查 按中国药典1995年版操作，结果3批样品热原检查结果均符合规定。3 讨论
试验结果表明，将样品1∶40稀释溶液对标示灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂2批不同厂家生产的鲎试剂均无抑制增强作用。样品的细菌内毒素试验表明，将样品1∶40稀释以标示灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂可用于样品的细菌内毒素检测，与家兔法热原检查结果一致。
参考文献
1 黄清泉，夏振民.细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)：72
2 中国药典.1995年版,二部：909
(1998年8月20日收稿), 百拇医药