薄层扫描法测定洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量
作者：陶志华 卞俊 曾华武 蔡定国
单位：中国人民解放军海军药学专科中心 上海200434
关键词：洋马酊；东茛菪碱；士的宁；薄层扫描法
中国医院药学杂志990511 摘要 目的:建立用薄层扫描法测定洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量的方法。方法:用硅胶G层析板，以醋酸乙酯∶甲醇∶氨水(17∶2∶1)为展开剂，用反射式锯齿形扫描测定。结果:东茛菪碱点样量在4.1～12.3 μg，士的宁点样量在18.6～93.0 μg范围内呈良好线性关系。东茛菪碱和士的宁的平均回收率分别为96.3%和102.3%。结论:本法简单，具有快速、灵敏、准确等优点，可有效地用于洋马酊的质量控制。
Content determination of hyoscine and strychnine in YangMa tincture by TLC-scanning method
, 百拇医药
Tao Zhihua,Bian Jun,Zeng Huawu,et al (The Pharmacy center of Navy Shanghai 200434)
ABSTRACT OBJECTIVE:A method for determination of hyoscine and strychnine in YangMa tincture had been established.METHODS:Sample solutions were chromatographed on silica-gel G plate.C2H5OCOC2H5-CH3OH-CH3OH-NH4OH (17∶2∶1) was mobile phase.The spot was scanned with dual wavelength reflection zigzag scanning.RESULTS:There was a linear relation between concentration and area in 4.1～12.3 and 18.6～93μg.The average recovery rates were 96.3% and 102.3%，respectively.CONCLUSIONS:The method is rapid、simple、accurate and good for the content determination of hyoscine and strychnine in YangMa tincture.
, 百拇医药
KEY WORDS TLC-scanning,YangMa tincture, hyoscine,strychnine
洋马酊系由洋金花和马钱子为主药制成的用于治疗风湿性疾病的外用酊剂，主要成分为东茛菪碱和士的宁，用薄层扫描法测定该制剂中东茛菪碱和士的宁的方法已有报道[1～4]，但未见同时测定上述两种成份含量的报道。本法采用双波长薄层扫描法测定洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量，方法简便，具有灵敏度高、准确性好等优点，为有效地控制洋马酊的质量提供了较为可靠的依据。
1 方法和结果
1.1 仪器和试剂 CS-9000双波长飞点式快速扫描仪(日本岛津)；定量毛细管(日本岛津)；硅胶G板(江苏省福山生化试剂厂生产)；洋马酊(我院自制，批号980219，980225，980302)；化学对照品：氢溴酸东茛菪碱和士的宁由中国药品生物制品检定所提供，所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 分析条件的选择
1.2.1 层析条件 硅胶G板105℃活化1 h，置干燥箱中备用，展开剂：醋酸乙酯-甲醇-氨水(17∶2∶1)，预饱和，展开方式：上行法，展距：16 cm，显色剂：碘化铋钾试液，亚硝酸钠试液。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东茛菪碱和士的宁对照品，分别加甲醇制成2.05，9.3 mg.ml-1溶液，即为对照品溶液。
1.2.3 扫描条件 双波长反射式锯齿形扫描，东茛菪碱λS=500 nm,λR=560 nm；士的宁λS=490 nm,λR=540 nm，扫描速度20 mm*min-1， 狭缝1.25 mm×1.25 mm,Sx=3。
, 百拇医药
1.3 标准曲线的绘制 精密吸取氢溴酸东茛菪碱的对照品溶液，以2，3，4，5，6 μl分别点样于硅胶G板上，按本文条件展开，扫描测定。同样精密吸取士的宁对照品溶液，以2，4，6，8，10 μl分别点样于硅胶G板上，按本文条件展开，扫描测定。以样品量为横坐标，测得的斑点峰面积为纵坐标，见表1，作图，回归方程为：Y东=-2 772.4X+25 738(r=0.999 3);Y士=34 806.8X+10 335.7(r=0.998 9)，结果表明，氢溴酸东茛菪碱对照品点样量在4.1～12.3 μg范围内，士的宁对照品点样量在18.6～93 μg范围内分别与其峰面积呈良好线性关系。
表1 洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量(n=3) 批号
东茛菪碱
g.100ml-1
, http://www.100md.com
RSD/%
士的宁
g.100ml-1
RSD/%
980219
0.03410
2.0
0.5911
2.5
980225
0.03290
1.8
, http://www.100md.com
0.5724
2.7
980302
0.03500
2.1
0.5975
2.6
1.4 方法学考察试验
1.4.1 回收率实验 取批号为980219，980225，980302洋马酊60 ml，分别加入氢溴酸东茛菪碱2.05 μg，士的宁9.3 μg，按供试液制备及测定项操作，测得东茛菪碱的平均回收率为96.3%，RSD为2.1%；士的宁的平均回收率为102.3%，RSD为2.0%，见表2。表2 洋马酊加样回收率数据 药物
, 百拇医药
制剂含量
mg.ml-1
加入量
mg.ml-1
测得量
mg.ml-1
回收率
%
平均回收率
%
东茛菪碱
, 百拇医药
2.04
2.05
4.04
97.6
2.04
2.05
4.02
96.6
96.3
2.04
2.05
3.98
94.6
, 百拇医药
士的宁
35.22
9.3
44.87
103.8
35.22
9.3
44.72
102.2
102.3
35.22
9.3
44.60
, http://www.100md.com
100.9
1.4.2 稳定性实验 取样品按上述方法测定，显色后用同样大小的玻璃板覆盖，四周用胶布固定，测其放置不同时间(1，1.5，2 h)的吸收度积分值，结果表明2 h内稳定。
1.4.3 精密度实验 同一斑点重复扫描6次，测其峰面积值，东茛菪碱的RSD为0.07%，士的宁的RSD为0.04%；测定同一薄层板上6个相同量的各对照品斑点的峰面积值，东茛菪碱的RSD为1.7%，士的宁的RSD为1.9%，表明具有较好的精密度。
1.4.4 重现性实验 取同一批号洋马酊，依本文供试品制备及测定项测定，东茛菪的RSD为2.8%，士的宁的RSD为2.7%。结果表明本法重现性良好。
1.4.5 干扰组分的考察 精取供试品溶液及两种对照品溶液各2 μl，分别点于同一块薄板上，按本文条件展开，晾干，显色，见图1；空白实验见图2。薄层显色表明，东茛菪碱和士的宁互不干扰。
, http://www.100md.com
图 1
图 1 东茛菪碱和士的宁薄层图谱
1 东茛菪碱标准对照品；2 马钱子药材；3 洋马酊；4 洋金花药材；5 士的宁标准对照品
图 2
图 2 空白实验薄层图谱
1 缺洋金花的空白对照液；2 缺洋金花和马钱子的空白对照液；3 缺马钱子的空白对照液
1.5 供试品测定 取洋马酊60 ml，蒸干，加0.25 mol.L-1硫酸35 ml溶解，过滤，滤液用氨水调至pH10左右，用氯仿50 ml分4次(20，10，10，10 ml)萃取，萃取液回流蒸干，用氯仿转移至5 ml容量瓶中，定容即为供试液。将供试液和对照品溶液氢溴酸东茛菪碱和士的宁分别点样于同一块薄层板上，按本文条件展开后进行扫描测定，三批洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量测定结果见表1。
, 百拇医药
2 讨论
实验中我们采用了中国药典1985版的试验条件，除了用碘化铋钾试液显色外，还增加了喷亚硝酸钠试液显色，目的是为了提高显色的灵敏度。本试验选择多项展开系统，确认以洋金花的展开系统(醋酸乙酯∶甲醇∶氨水=17∶2∶1)为最佳[5]，用于洋马酊含量的测定获得的图谱清晰，特征性较强，斑点集中，不拖尾，能使洋马酊中东茛菪碱和士的宁达到有效分离。
参考文献
1 何丽一.托品类生物碱的薄层分离及光密度法测定.中草药，1982，13(2)：13
2 马心荣，李云乔.薄层-比色法测定止喘灵注射液中东茛菪碱含量.中成药，1993，15(8)：11
3 徐 飞，崔金有，秦桂莲.双波长薄层扫描法测定风湿骨痛胶囊中士的宁的含量.中成药，1992，14(1)：18
4 颜根宝，田晨光，居明乔.薄层扫描法测定消肿片中士的宁的含量.中成药，1990，12(9)：17
5 谢培山主编.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集.广州：广东科技出版社，1993：62
(1998年6月1日收稿), 百拇医药
单位：中国人民解放军海军药学专科中心 上海200434
关键词：洋马酊；东茛菪碱；士的宁；薄层扫描法
中国医院药学杂志990511 摘要 目的:建立用薄层扫描法测定洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量的方法。方法:用硅胶G层析板，以醋酸乙酯∶甲醇∶氨水(17∶2∶1)为展开剂，用反射式锯齿形扫描测定。结果:东茛菪碱点样量在4.1～12.3 μg，士的宁点样量在18.6～93.0 μg范围内呈良好线性关系。东茛菪碱和士的宁的平均回收率分别为96.3%和102.3%。结论:本法简单，具有快速、灵敏、准确等优点，可有效地用于洋马酊的质量控制。
Content determination of hyoscine and strychnine in YangMa tincture by TLC-scanning method
, 百拇医药
Tao Zhihua,Bian Jun,Zeng Huawu,et al (The Pharmacy center of Navy Shanghai 200434)
ABSTRACT OBJECTIVE:A method for determination of hyoscine and strychnine in YangMa tincture had been established.METHODS:Sample solutions were chromatographed on silica-gel G plate.C2H5OCOC2H5-CH3OH-CH3OH-NH4OH (17∶2∶1) was mobile phase.The spot was scanned with dual wavelength reflection zigzag scanning.RESULTS:There was a linear relation between concentration and area in 4.1～12.3 and 18.6～93μg.The average recovery rates were 96.3% and 102.3%，respectively.CONCLUSIONS:The method is rapid、simple、accurate and good for the content determination of hyoscine and strychnine in YangMa tincture.
, 百拇医药
KEY WORDS TLC-scanning,YangMa tincture, hyoscine,strychnine
洋马酊系由洋金花和马钱子为主药制成的用于治疗风湿性疾病的外用酊剂，主要成分为东茛菪碱和士的宁，用薄层扫描法测定该制剂中东茛菪碱和士的宁的方法已有报道[1～4]，但未见同时测定上述两种成份含量的报道。本法采用双波长薄层扫描法测定洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量，方法简便，具有灵敏度高、准确性好等优点，为有效地控制洋马酊的质量提供了较为可靠的依据。
1 方法和结果
1.1 仪器和试剂 CS-9000双波长飞点式快速扫描仪(日本岛津)；定量毛细管(日本岛津)；硅胶G板(江苏省福山生化试剂厂生产)；洋马酊(我院自制，批号980219，980225，980302)；化学对照品：氢溴酸东茛菪碱和士的宁由中国药品生物制品检定所提供，所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 分析条件的选择
1.2.1 层析条件 硅胶G板105℃活化1 h，置干燥箱中备用，展开剂：醋酸乙酯-甲醇-氨水(17∶2∶1)，预饱和，展开方式：上行法，展距：16 cm，显色剂：碘化铋钾试液，亚硝酸钠试液。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东茛菪碱和士的宁对照品，分别加甲醇制成2.05，9.3 mg.ml-1溶液，即为对照品溶液。
1.2.3 扫描条件 双波长反射式锯齿形扫描，东茛菪碱λS=500 nm,λR=560 nm；士的宁λS=490 nm,λR=540 nm，扫描速度20 mm*min-1， 狭缝1.25 mm×1.25 mm,Sx=3。
, 百拇医药
1.3 标准曲线的绘制 精密吸取氢溴酸东茛菪碱的对照品溶液，以2，3，4，5，6 μl分别点样于硅胶G板上，按本文条件展开，扫描测定。同样精密吸取士的宁对照品溶液，以2，4，6，8，10 μl分别点样于硅胶G板上，按本文条件展开，扫描测定。以样品量为横坐标，测得的斑点峰面积为纵坐标，见表1，作图，回归方程为：Y东=-2 772.4X+25 738(r=0.999 3);Y士=34 806.8X+10 335.7(r=0.998 9)，结果表明，氢溴酸东茛菪碱对照品点样量在4.1～12.3 μg范围内，士的宁对照品点样量在18.6～93 μg范围内分别与其峰面积呈良好线性关系。
表1 洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量(n=3) 批号
东茛菪碱
g.100ml-1
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RSD/%
士的宁
g.100ml-1
RSD/%
980219
0.03410
2.0
0.5911
2.5
980225
0.03290
1.8
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0.5724
2.7
980302
0.03500
2.1
0.5975
2.6
1.4 方法学考察试验
1.4.1 回收率实验 取批号为980219，980225，980302洋马酊60 ml，分别加入氢溴酸东茛菪碱2.05 μg，士的宁9.3 μg，按供试液制备及测定项操作，测得东茛菪碱的平均回收率为96.3%，RSD为2.1%；士的宁的平均回收率为102.3%，RSD为2.0%，见表2。表2 洋马酊加样回收率数据 药物
, 百拇医药
制剂含量
mg.ml-1
加入量
mg.ml-1
测得量
mg.ml-1
回收率
%
平均回收率
%
东茛菪碱
, 百拇医药
2.04
2.05
4.04
97.6
2.04
2.05
4.02
96.6
96.3
2.04
2.05
3.98
94.6
, 百拇医药
士的宁
35.22
9.3
44.87
103.8
35.22
9.3
44.72
102.2
102.3
35.22
9.3
44.60
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100.9
1.4.2 稳定性实验 取样品按上述方法测定，显色后用同样大小的玻璃板覆盖，四周用胶布固定，测其放置不同时间(1，1.5，2 h)的吸收度积分值，结果表明2 h内稳定。
1.4.3 精密度实验 同一斑点重复扫描6次，测其峰面积值，东茛菪碱的RSD为0.07%，士的宁的RSD为0.04%；测定同一薄层板上6个相同量的各对照品斑点的峰面积值，东茛菪碱的RSD为1.7%，士的宁的RSD为1.9%，表明具有较好的精密度。
1.4.4 重现性实验 取同一批号洋马酊，依本文供试品制备及测定项测定，东茛菪的RSD为2.8%，士的宁的RSD为2.7%。结果表明本法重现性良好。
1.4.5 干扰组分的考察 精取供试品溶液及两种对照品溶液各2 μl，分别点于同一块薄板上，按本文条件展开，晾干，显色，见图1；空白实验见图2。薄层显色表明，东茛菪碱和士的宁互不干扰。
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图 1
图 1 东茛菪碱和士的宁薄层图谱
1 东茛菪碱标准对照品；2 马钱子药材；3 洋马酊；4 洋金花药材；5 士的宁标准对照品
图 2
图 2 空白实验薄层图谱
1 缺洋金花的空白对照液；2 缺洋金花和马钱子的空白对照液；3 缺马钱子的空白对照液
1.5 供试品测定 取洋马酊60 ml，蒸干，加0.25 mol.L-1硫酸35 ml溶解，过滤，滤液用氨水调至pH10左右，用氯仿50 ml分4次(20，10，10，10 ml)萃取，萃取液回流蒸干，用氯仿转移至5 ml容量瓶中，定容即为供试液。将供试液和对照品溶液氢溴酸东茛菪碱和士的宁分别点样于同一块薄层板上，按本文条件展开后进行扫描测定，三批洋马酊中东茛菪碱和士的宁的含量测定结果见表1。
, 百拇医药
2 讨论
实验中我们采用了中国药典1985版的试验条件，除了用碘化铋钾试液显色外，还增加了喷亚硝酸钠试液显色，目的是为了提高显色的灵敏度。本试验选择多项展开系统，确认以洋金花的展开系统(醋酸乙酯∶甲醇∶氨水=17∶2∶1)为最佳[5]，用于洋马酊含量的测定获得的图谱清晰，特征性较强，斑点集中，不拖尾，能使洋马酊中东茛菪碱和士的宁达到有效分离。
参考文献
1 何丽一.托品类生物碱的薄层分离及光密度法测定.中草药，1982，13(2)：13
2 马心荣，李云乔.薄层-比色法测定止喘灵注射液中东茛菪碱含量.中成药，1993，15(8)：11
3 徐 飞，崔金有，秦桂莲.双波长薄层扫描法测定风湿骨痛胶囊中士的宁的含量.中成药，1992，14(1)：18
4 颜根宝，田晨光，居明乔.薄层扫描法测定消肿片中士的宁的含量.中成药，1990，12(9)：17
5 谢培山主编.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集.广州：广东科技出版社，1993：62
(1998年6月1日收稿), 百拇医药