γ-刀不同剂量一次单侧照射大鼠尾壳核后前脑星形胶质细胞的变化
作者：杨婷 饶志仁 吴声伶 吴鸿勋 鞠躬
单位：杨婷、饶志仁、鞠躬 710032 西安，第四军医大学神经科学研究所；吴声伶、吴鸿勋 广东微侵袭神经外科治疗中心
关键词：γ-刀；尾壳核；GFAP；星形胶质细胞；免疫组织化学
中华放射医学与防护杂志/990508 【摘要】 目的 作者研究γ-刀不同剂量定位照射大鼠脑尾壳核中部后前脑内星形细胞(AS)形态和数量的变化以探讨γ-刀的放射生物效应，为临床防护提供依据。方法 应用免疫组织化学ABC法以AS的中型丝主要构成成分——胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)作为免疫染色标志观察照射后90天GFAP的表达及变化情况。结果 ①吸收剂量10～30 Gy时，AS在靶区内大量增生，细胞肥大和变性，与对侧形成明显对比；40～60 Gy时照射靶区AS肥大和变性增多；70～100 Gy时，靶区出现边界明确的坏死区，离坏死区越近，细胞变性越明显；靶区和隔区出现明显的水肿，细胞胞体肥大明显。②从低剂量到高剂量，血管扩张变形渐趋严重，80 Gy时，血管内膜出现凹凸不平。③在远离照射部位的脑区，双侧反应差别较小。结论 低剂量伽玛刀局部照射，90天时可通过特异性抗体检测出AS的数量和形态改变；靶区的损伤程度和剂量成正相关。
, 百拇医药
Changes of astrocytes in rat forebrain after unilateral irradiation of nucleus caudate putamen with different single doses of gamma knife
YANG Ting,RAO Zhiren,WU Shengling,et al.
Institute of Neurosciences,The Fourth Military Medical University,Xi＇an 710032,China
【Abstract】 Objective To investigate variations in morphology and number of astrocytes in the rat forebrain after the caudate putamen nucleus was irradiated by differant single doses of gamma knife from 10Gy to 100Gy. Methods Immunohistochemical ABC method was used to stain glia fibrillary acidic protein(GFAP). Results Firstly,at dosage of 10-30Gy,the number of astrocytes was increased remarkably in the target area and the non-target areas displayed much less reactive cells;and when irradiated with 40-60Gy,the brain showed more hypertrophic and degenerated astrocytes in the target area;whereas at dosage of 70-100Gy,necrotic hole began to appear and became bigger with an increasing dosage.The nucleus caudate putamen and septal area became swollen and blood vessels dilated,which tended to increase with increasing dosage.Lastly,in areas not directly irradiated by gamma knife,the ipsilateral and contralateral sides showed a less difference in GFAP expression in the forebrain. Conclusion Degree of damage in target area is positively relative to the dosage.
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【Key words】 Gamma knife Caudate putamen nucleus Glial fibrillary acidic protein Astrocytes Immunohistochemistry
γ-刀是近年来发展起来的治疗颅内肿瘤的新的放射外科手术方法，因为可定点照射摧毁肿瘤而且侵袭性小而被越来越多的病人所接受，但临床治疗剂量的选择需有动物实验的资料提供参考，并且以往分次治疗的经验和动物实验资料不能用于这种单次大剂量的治疗方式。鉴于此，作者进行了γ-刀的放射生物学研究，旨在探讨大鼠受不同剂量照射下脑星形细胞对放射损伤的反应和变化，为选择照射剂量和防护提供科学依据。
材料和方法
1 实验动物分组：选用体重(200±20 )g健康雄性Sprague-Dawley大鼠96只，分实验组和对照组(包括假照射组和正常对照组)，其中实验组90只，对照组6只。实验组动物在戊巴比妥钠(40 mg/kg体重i.p.)麻醉下，被固定于γ-刀专用固定架上，用磁共振成像(MRI)进行脑冠状面的连续扫描，扫描图像经计算机网络传至γ-刀控制计算机，计算确定将照射靶区定于尾状核前部的X.Y.Z的座标。然后将固定架按确定座标放在γ-刀定位架上，用4 mm准直器，对脑组织实施照射，中心部位剂量分别为10、20、30、40、50、60、70、80、90和100 Gy 10个剂量组，每一剂量组3只动物。γ-刀为Elekta第三代2300B型，焦点吸收剂量率为4 Gy/min，照射野半影很小，可忽略不计。照射后实验动物常规饲养，90天时活杀。
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2 组织材料的处理和染色反应：实验组动物受照后90天经戊巴比妥钠深麻后，开胸经左心室升主动脉插管先以100 ml生理盐水冲洗血液，随后用冷的(4℃)含40 g/L多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液灌流固定，取出脑组织，用冰冻切片机切制大脑的连续冠状切片(片厚30 μm)，切片按常规ABC法操作，显色以硫酸镍铵加强的DAB法进行反应[1]。
3 图像分析：切片经图像分析仪(Quantimet 570 C,Leica)处理。GFAP阳性细胞面积测定选择对照组大鼠及每只照射大鼠的照射侧和对照侧尾壳核，在10(目镜倍率)×20(物镜倍率)倍率下，选取阳性细胞测量单个细胞面积，求出尾壳核内的阳性细胞总面积，而后在每组动物间取平均数，以t检验方法比较各组间细胞面积。
结果
1 未经照射大鼠的大脑皮层、隔区、尾壳核、胼胝体、海马、丘脑和下丘脑的核团有均匀散在的GFAP阳性细胞存在，细胞为胞体小、突起细长的星形细胞。
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2 照射后大鼠脑组织反应
(1) 低剂量组(10～30 Gy)：吸收剂量为10 Gy时，照射侧尾壳核的AS细胞即大量增生(图1)，而对侧阳性细胞稀少，两者对比明显。在尾壳核中部可见到胞体稍变大的细胞，但尚无坏死。下丘脑背内侧核有GFAP阳性细胞出现。吸收剂量为20 Gy时，出现血管扩张，血管周围胶质突增多。
图1 10 Gy照射靶区AS大量增生 ×240
(2)中剂量组(40～60 Gy)：血管扩张更加明显，靶区GFAP阳性反应密集，胞体肥大、突起变粗长的AS明显增多(图2)，在皮质、海马、靠近侧脑室的胼胝体观察到肥大的AS，靶区对侧阳性GFAP反应少，且多为正常形态的细胞，与正常对照组差别不大。下丘脑背内侧核的阳性细胞染色深且密，阳性细胞多于低剂量组和对照组。
, 百拇医药
图2 50 Gy照射靶区AS细胞变形 ×240
(3)高剂量组(70～100 Gy)：从70 Gy起， 靶区出现坏死区，坏死区周边被AS的突起所形成的胶质界膜包绕，在坏死区的周围形成3层明显的分界，坏死周边区、过渡区和正常区(图3)，离坏死区越近，细胞变性越明显。坏死周边区细胞胞体大且不规则，突起断裂，过渡区细胞形态尚完整，有轻度变性。靶区及其周围脑组织水肿明显，侧脑室被挤压变形，和对侧形成明显的对比，80 Gy照射的脑切片上，毛细血管内壁变厚，管腔狭窄，靶区形成坏死空洞，且靶区的坏死灶周围有许多散在的出血点和点状坏死区，100 Gy照射时靶区空洞更大，周围细胞变性更加明显(图4)。
图3 70 Gy时靶区显示坏死区、坏死周边区、过渡区、正常区 ×48
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图4 100 Gy照射靶区坏死空洞形成 ×48
(4)远离照射部位脑区内大脑两侧反应差别很小。
3 尾壳核GFAP阳性反应细胞面积，见表1。
表1 不同剂量照射大鼠尾壳核细胞总面积变化(
±s) 吸收剂量(Gy)
样本数
照射侧细胞面积
(×104/μm2)
对照侧细胞面积
(×104/μm2)
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对照组
6
—
6.1±1.7
10
9
17.6± 8.6**
8.6±1.2
30
9
26.4±12.7**
9.0±2.5
, 百拇医药
50
9
36.8± 4.8**
4.9±1.4
70
9
55.8±13.8**
7.1±1.5
注：每个剂量组的照射侧细胞面积与对照侧细胞面积相比，**P<0.01，经统计方法对两均数比较的t检验，显示受照射剂量与照射侧GFAP阳性反应细胞面积成正相关，r=0.982讨论
γ-刀是将201束钴源发射的γ射线精确地集中定位于靶区，损毁靶组织，因此我们重点对靶部位的反应进行描述。在时间-效应关系研究中，发现毛细血管对射线最为敏感，星形细胞在不同照射时间点呈现一定规律。不同剂量照射下星形细胞反应规律是：
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1. 单次低剂量照射脑部某一核团90天后可见AS的增生，表现在GFAP的大量表达，因为GFAP是检测中枢神经系统损伤后星形细胞变化的敏感的标志[2，3]。AS出现这种变化的可能原因一方面在于损伤引起细胞水肿后中型丝裂解暴露出更多的GFAP抗体结合位点使免疫染色增强[4]；另一方面则可能是由于损伤时，小胶质细胞活化为反应性小胶质细胞(在我们的实验中也观察到了这样的结果)后释放的星形胶质细胞生长因子，如IL-1和TNFα等刺激AS的增生和肥大[5]。
2. 60 Gy以下虽尚未形成靶区的坏死空洞，但可见靶区的GFAP阳性细胞已严重变性，毛细血管扩张明显。这种细胞变化在低剂量照射时，AS主要通过适度增生和肥大维持自身存活、抵抗损伤，并且还可分泌一些促生长因子为神经元提供一个适宜的再生的微环境[6，7]。随照射剂量增大，一部分AS膜发生肿胀破裂，核内DNA断裂，细胞发生凋亡和坏死，另一些AS表现出双向性，即一方面仍发挥保护作用和吞噬细胞共同吞噬清除损伤区溃变的髓鞘和轴突；另一方面AS以其突起充填空隙，在溃变区周围形成一圈致密的胶质瘢痕(在70到100 Gy的照射靶区出现边界明确的坏死区)，在一定程度上阻碍了神经元的再生。推测70 Gy照射3个月后造成胶质细胞群大范围的明显坏死，与Kondziolka Douglas报道的引起组织坏死的剂量相比有所降低[8]，可能与不同照射部位对射线敏感性不同有关。同时，随照射剂量增加，毛细血管内膜增厚，管腔变狭窄，造成局部脑组织缺血，也可能和脑水肿的出现互为因果。
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3. 我们还发现照射剂量在70～100 Gy时从靶区中心向周围有明显的分层，即坏死区、坏死周边区、过渡区和正常区，越靠近坏死中心，GFAP阳性细胞胞体肥大和突起变粗变短越明显，而稍远处及未受照射的区域则AS的增生和肥大不明显，从表中结果可知照射组和对照组及照射侧和对照侧阳性样细胞总面积有显著性差异，并且γ-刀照射的靶区边界清晰，这提示只要剂量适当和定位准确，最终既杀伤瘤体而使周围正常脑组织受到较小损伤是有可能实现的，但发展对正常组织的放射保护药物仍是势在必行。从70 Gy开始，靶区和隔区水肿明显，这是γ-刀照射后出现的并发症——脑水肿，有关它的机理、防治以及试验放射保护药物是我们下一步工作的目标。
致谢：本研究由广东微侵袭神经外科治疗中心(董事长周达银)赞助
参考文献
1 Shu SY,Ju G,Fan LZ.The glucose oxidase-DAB-nickel method in peroxidase histochemistry of the nervous system.Neurosci Lett,1988,85:169-171.
, 百拇医药
2 Grambergen JBP,Vandenberg KJ.Regional and temporal profiles of calcium accumulation and glia fibrillary acidic protein levels in rat brain after systemic injection of kainic acid.Brain Res,1994,667:216-228.
3 Rutka JT,Murakami M,Dirks PB,et al.Role of glial filaments in cells and tumors of glial origin:a review.J Neurosurg,1997,87:420-430.
4 Eng LF,Lee YL.Intermediate filaments in astrocytes.in:H.Kettermann and BR Ransom,eds.Neuroglia.Oxford:Oxford University Press,1995,650-667.
, 百拇医药
5 Merrill JE.Tumor necrosis factor alpha,interleukin 1 and related cytokines in brain development:normal and pathological.Dev Neurosci,1992,14:1-10.
6 姚志斌，陈以慈主编.脑研究前沿.广州：广东科技出版社，1995.132-146.
7 董继宏，朱文炳.缺血性脑损伤的免疫机制.国外医学脑血管疾病分册，1997，5：273-276.
8 Kondziolka D,Lunsford LD,Claassen D.Radiobiology of radiosurgery,part I:the normal rat brain model.Neurosurgery,1992,31:271-279.
(收稿:1998-11-05 修回1999-03-11), 百拇医药
单位：杨婷、饶志仁、鞠躬 710032 西安，第四军医大学神经科学研究所；吴声伶、吴鸿勋 广东微侵袭神经外科治疗中心
关键词：γ-刀；尾壳核；GFAP；星形胶质细胞；免疫组织化学
中华放射医学与防护杂志/990508 【摘要】 目的 作者研究γ-刀不同剂量定位照射大鼠脑尾壳核中部后前脑内星形细胞(AS)形态和数量的变化以探讨γ-刀的放射生物效应，为临床防护提供依据。方法 应用免疫组织化学ABC法以AS的中型丝主要构成成分——胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)作为免疫染色标志观察照射后90天GFAP的表达及变化情况。结果 ①吸收剂量10～30 Gy时，AS在靶区内大量增生，细胞肥大和变性，与对侧形成明显对比；40～60 Gy时照射靶区AS肥大和变性增多；70～100 Gy时，靶区出现边界明确的坏死区，离坏死区越近，细胞变性越明显；靶区和隔区出现明显的水肿，细胞胞体肥大明显。②从低剂量到高剂量，血管扩张变形渐趋严重，80 Gy时，血管内膜出现凹凸不平。③在远离照射部位的脑区，双侧反应差别较小。结论 低剂量伽玛刀局部照射，90天时可通过特异性抗体检测出AS的数量和形态改变；靶区的损伤程度和剂量成正相关。
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Changes of astrocytes in rat forebrain after unilateral irradiation of nucleus caudate putamen with different single doses of gamma knife
YANG Ting,RAO Zhiren,WU Shengling,et al.
Institute of Neurosciences,The Fourth Military Medical University,Xi＇an 710032,China
【Abstract】 Objective To investigate variations in morphology and number of astrocytes in the rat forebrain after the caudate putamen nucleus was irradiated by differant single doses of gamma knife from 10Gy to 100Gy. Methods Immunohistochemical ABC method was used to stain glia fibrillary acidic protein(GFAP). Results Firstly,at dosage of 10-30Gy,the number of astrocytes was increased remarkably in the target area and the non-target areas displayed much less reactive cells;and when irradiated with 40-60Gy,the brain showed more hypertrophic and degenerated astrocytes in the target area;whereas at dosage of 70-100Gy,necrotic hole began to appear and became bigger with an increasing dosage.The nucleus caudate putamen and septal area became swollen and blood vessels dilated,which tended to increase with increasing dosage.Lastly,in areas not directly irradiated by gamma knife,the ipsilateral and contralateral sides showed a less difference in GFAP expression in the forebrain. Conclusion Degree of damage in target area is positively relative to the dosage.
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【Key words】 Gamma knife Caudate putamen nucleus Glial fibrillary acidic protein Astrocytes Immunohistochemistry
γ-刀是近年来发展起来的治疗颅内肿瘤的新的放射外科手术方法，因为可定点照射摧毁肿瘤而且侵袭性小而被越来越多的病人所接受，但临床治疗剂量的选择需有动物实验的资料提供参考，并且以往分次治疗的经验和动物实验资料不能用于这种单次大剂量的治疗方式。鉴于此，作者进行了γ-刀的放射生物学研究，旨在探讨大鼠受不同剂量照射下脑星形细胞对放射损伤的反应和变化，为选择照射剂量和防护提供科学依据。
材料和方法
1 实验动物分组：选用体重(200±20 )g健康雄性Sprague-Dawley大鼠96只，分实验组和对照组(包括假照射组和正常对照组)，其中实验组90只，对照组6只。实验组动物在戊巴比妥钠(40 mg/kg体重i.p.)麻醉下，被固定于γ-刀专用固定架上，用磁共振成像(MRI)进行脑冠状面的连续扫描，扫描图像经计算机网络传至γ-刀控制计算机，计算确定将照射靶区定于尾状核前部的X.Y.Z的座标。然后将固定架按确定座标放在γ-刀定位架上，用4 mm准直器，对脑组织实施照射，中心部位剂量分别为10、20、30、40、50、60、70、80、90和100 Gy 10个剂量组，每一剂量组3只动物。γ-刀为Elekta第三代2300B型，焦点吸收剂量率为4 Gy/min，照射野半影很小，可忽略不计。照射后实验动物常规饲养，90天时活杀。
, 百拇医药
2 组织材料的处理和染色反应：实验组动物受照后90天经戊巴比妥钠深麻后，开胸经左心室升主动脉插管先以100 ml生理盐水冲洗血液，随后用冷的(4℃)含40 g/L多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液灌流固定，取出脑组织，用冰冻切片机切制大脑的连续冠状切片(片厚30 μm)，切片按常规ABC法操作，显色以硫酸镍铵加强的DAB法进行反应[1]。
3 图像分析：切片经图像分析仪(Quantimet 570 C,Leica)处理。GFAP阳性细胞面积测定选择对照组大鼠及每只照射大鼠的照射侧和对照侧尾壳核，在10(目镜倍率)×20(物镜倍率)倍率下，选取阳性细胞测量单个细胞面积，求出尾壳核内的阳性细胞总面积，而后在每组动物间取平均数，以t检验方法比较各组间细胞面积。
结果
1 未经照射大鼠的大脑皮层、隔区、尾壳核、胼胝体、海马、丘脑和下丘脑的核团有均匀散在的GFAP阳性细胞存在，细胞为胞体小、突起细长的星形细胞。
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2 照射后大鼠脑组织反应
(1) 低剂量组(10～30 Gy)：吸收剂量为10 Gy时，照射侧尾壳核的AS细胞即大量增生(图1)，而对侧阳性细胞稀少，两者对比明显。在尾壳核中部可见到胞体稍变大的细胞，但尚无坏死。下丘脑背内侧核有GFAP阳性细胞出现。吸收剂量为20 Gy时，出现血管扩张，血管周围胶质突增多。
图1 10 Gy照射靶区AS大量增生 ×240
(2)中剂量组(40～60 Gy)：血管扩张更加明显，靶区GFAP阳性反应密集，胞体肥大、突起变粗长的AS明显增多(图2)，在皮质、海马、靠近侧脑室的胼胝体观察到肥大的AS，靶区对侧阳性GFAP反应少，且多为正常形态的细胞，与正常对照组差别不大。下丘脑背内侧核的阳性细胞染色深且密，阳性细胞多于低剂量组和对照组。
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图2 50 Gy照射靶区AS细胞变形 ×240
(3)高剂量组(70～100 Gy)：从70 Gy起， 靶区出现坏死区，坏死区周边被AS的突起所形成的胶质界膜包绕，在坏死区的周围形成3层明显的分界，坏死周边区、过渡区和正常区(图3)，离坏死区越近，细胞变性越明显。坏死周边区细胞胞体大且不规则，突起断裂，过渡区细胞形态尚完整，有轻度变性。靶区及其周围脑组织水肿明显，侧脑室被挤压变形，和对侧形成明显的对比，80 Gy照射的脑切片上，毛细血管内壁变厚，管腔狭窄，靶区形成坏死空洞，且靶区的坏死灶周围有许多散在的出血点和点状坏死区，100 Gy照射时靶区空洞更大，周围细胞变性更加明显(图4)。
图3 70 Gy时靶区显示坏死区、坏死周边区、过渡区、正常区 ×48
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图4 100 Gy照射靶区坏死空洞形成 ×48
(4)远离照射部位脑区内大脑两侧反应差别很小。
3 尾壳核GFAP阳性反应细胞面积，见表1。
表1 不同剂量照射大鼠尾壳核细胞总面积变化(
±s) 吸收剂量(Gy)样本数
照射侧细胞面积
(×104/μm2)
对照侧细胞面积
(×104/μm2)
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对照组
6
—
6.1±1.7
10
9
17.6± 8.6**
8.6±1.2
30
9
26.4±12.7**
9.0±2.5
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50
9
36.8± 4.8**
4.9±1.4
70
9
55.8±13.8**
7.1±1.5
注：每个剂量组的照射侧细胞面积与对照侧细胞面积相比，**P<0.01，经统计方法对两均数比较的t检验，显示受照射剂量与照射侧GFAP阳性反应细胞面积成正相关，r=0.982讨论
γ-刀是将201束钴源发射的γ射线精确地集中定位于靶区，损毁靶组织，因此我们重点对靶部位的反应进行描述。在时间-效应关系研究中，发现毛细血管对射线最为敏感，星形细胞在不同照射时间点呈现一定规律。不同剂量照射下星形细胞反应规律是：
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1. 单次低剂量照射脑部某一核团90天后可见AS的增生，表现在GFAP的大量表达，因为GFAP是检测中枢神经系统损伤后星形细胞变化的敏感的标志[2，3]。AS出现这种变化的可能原因一方面在于损伤引起细胞水肿后中型丝裂解暴露出更多的GFAP抗体结合位点使免疫染色增强[4]；另一方面则可能是由于损伤时，小胶质细胞活化为反应性小胶质细胞(在我们的实验中也观察到了这样的结果)后释放的星形胶质细胞生长因子，如IL-1和TNFα等刺激AS的增生和肥大[5]。
2. 60 Gy以下虽尚未形成靶区的坏死空洞，但可见靶区的GFAP阳性细胞已严重变性，毛细血管扩张明显。这种细胞变化在低剂量照射时，AS主要通过适度增生和肥大维持自身存活、抵抗损伤，并且还可分泌一些促生长因子为神经元提供一个适宜的再生的微环境[6，7]。随照射剂量增大，一部分AS膜发生肿胀破裂，核内DNA断裂，细胞发生凋亡和坏死，另一些AS表现出双向性，即一方面仍发挥保护作用和吞噬细胞共同吞噬清除损伤区溃变的髓鞘和轴突；另一方面AS以其突起充填空隙，在溃变区周围形成一圈致密的胶质瘢痕(在70到100 Gy的照射靶区出现边界明确的坏死区)，在一定程度上阻碍了神经元的再生。推测70 Gy照射3个月后造成胶质细胞群大范围的明显坏死，与Kondziolka Douglas报道的引起组织坏死的剂量相比有所降低[8]，可能与不同照射部位对射线敏感性不同有关。同时，随照射剂量增加，毛细血管内膜增厚，管腔变狭窄，造成局部脑组织缺血，也可能和脑水肿的出现互为因果。
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3. 我们还发现照射剂量在70～100 Gy时从靶区中心向周围有明显的分层，即坏死区、坏死周边区、过渡区和正常区，越靠近坏死中心，GFAP阳性细胞胞体肥大和突起变粗变短越明显，而稍远处及未受照射的区域则AS的增生和肥大不明显，从表中结果可知照射组和对照组及照射侧和对照侧阳性样细胞总面积有显著性差异，并且γ-刀照射的靶区边界清晰，这提示只要剂量适当和定位准确，最终既杀伤瘤体而使周围正常脑组织受到较小损伤是有可能实现的，但发展对正常组织的放射保护药物仍是势在必行。从70 Gy开始，靶区和隔区水肿明显，这是γ-刀照射后出现的并发症——脑水肿，有关它的机理、防治以及试验放射保护药物是我们下一步工作的目标。
致谢：本研究由广东微侵袭神经外科治疗中心(董事长周达银)赞助
参考文献
1 Shu SY,Ju G,Fan LZ.The glucose oxidase-DAB-nickel method in peroxidase histochemistry of the nervous system.Neurosci Lett,1988,85:169-171.
, 百拇医药
2 Grambergen JBP,Vandenberg KJ.Regional and temporal profiles of calcium accumulation and glia fibrillary acidic protein levels in rat brain after systemic injection of kainic acid.Brain Res,1994,667:216-228.
3 Rutka JT,Murakami M,Dirks PB,et al.Role of glial filaments in cells and tumors of glial origin:a review.J Neurosurg,1997,87:420-430.
4 Eng LF,Lee YL.Intermediate filaments in astrocytes.in:H.Kettermann and BR Ransom,eds.Neuroglia.Oxford:Oxford University Press,1995,650-667.
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6 姚志斌，陈以慈主编.脑研究前沿.广州：广东科技出版社，1995.132-146.
7 董继宏，朱文炳.缺血性脑损伤的免疫机制.国外医学脑血管疾病分册，1997，5：273-276.
8 Kondziolka D,Lunsford LD,Claassen D.Radiobiology of radiosurgery,part I:the normal rat brain model.Neurosurgery,1992,31:271-279.
(收稿:1998-11-05 修回1999-03-11), 百拇医药