三苯氧胺对二甲基苯蒽诱发的大鼠乳腺癌的影响
作者：邓敏 苏宁 朝月明 张晓明
单位：南京铁道医学院病理解剖学教研室，南京，210009
关键词：二甲基苯蒽；乳腺癌；三苯氧胺；大鼠
苏州医学院学报990907 摘要 应用DMBA诱发的雌性SD大鼠乳腺癌模型，初步探讨了大鼠乳腺受致癌剂作用后，三苯氧胺对乳腺癌发生的影响。结果显示：三苯氧胺使恶性肿瘤出现的平均潜伏期明显延长，恶性肿瘤的发生率明显降低。
中图法分类 R737.901
Effect of TAM on Mammary Carcinoma Induced by DMBA in Rats
Den Min,Su Ling,Han Yueming，et al
, http://www.100md.com
(Department of Pathology,Nanjing Railway Medical College,Nanjing，210009)
Abstract Object:The effect of tamoxifen (TAM) was evaluated on a mammary tumor model induced by 7.12-dimethylbenz(a)anthracene (DMBA) in the female Sprague-Dawley(SD) rats.Significant difference between TAM and control batches was observed in tumor incidence (30% versus 70.6%,P<0.05) and the mean latent period (108.6±41.69 days versus 69±21.12 days,P<0.025).Findings demonstrate that TAM significantly decreases the appearance of tumor induced in rats by DMBA.
, 百拇医药
Key words DMBA;mamary carcinoma;TAM;rats
三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)作为非甾体类抗雌激素药已广泛用于治疗乳腺癌并能明显延长乳腺癌患者生存率。近年来，该药在乳腺癌预防中的作用正逐渐受到人们的重视，并将该药用于乳腺良性肿瘤及小叶增生的治疗，目前欧美一些国家正在试图给高危妇女服用TAM以预防乳腺癌发生[1～2]。本实验应用7，12-二甲基苯蒽(7，12-dimethylbenz(a)anthracene,DMBA)诱发的雌性SD大鼠乳腺癌模型，初步探讨乳腺受致癌剂作用后，TAM对大鼠乳腺癌发生的影响。
1 材料和方法
1.1 主要药品：DMBA及TAM均为Sigma出品。
1.2 动物：未交配的雌性SD大鼠(购自上海市计划生育研究所)40只，鼠龄41±5天，由本室动物房分笼饲养，5～6只/笼，室温20±5℃，每天控制光照12h，通风，随意进食饮水，饲料为本院动物房配制的颗料饲料，鼠龄达45±1天时，每鼠胃饲1ml麻油，内含10mg DMBA，1周后重复喂药1次。第2次喂药4周后，按体重随机将大鼠分为2组：①对照组：0.1ml麻油；②TAM组：0.1ml麻油内含100μg TAM。每组均皮下注射，5次/周×12周。
, 百拇医药
1.3 诱发肿瘤观察：分组后，每周2次检查各大鼠每对乳腺肿瘤的出现情况，记录肿瘤出现时间，并以第2次喂药到各大鼠出现第1个体表可触及恶性肿瘤(经组织学证实)的时间为该大鼠诱发恶性肿瘤的潜伏期；各组荷瘤大鼠数与各组大鼠总数之比即为该组大鼠的恶性肿瘤诱发率。
1.4 病理检查：于实验的第23周，颈椎离断处死所有大鼠，切开皮肤，暴露六对乳腺，详细检查各对乳腺，有肿瘤者，取下肿瘤并已录其分布、形态，无肿瘤者也取部分放入10%的中性福尔马林固定，常规取材制片，HE染色光镜下观察乳腺病变。
1.5 数据处理：潜伏期用秩和检验，致癌率用确切概率法。
2 结果
2.1 诱发恶性肿瘤的潜伏期：第2次胃饲DMBA后的第6周起，对照组大鼠陆续出现乳腺肿瘤，而TAM组则在第8周开始出现肿瘤，两组大鼠恶性肿瘤出现的潜伏期为：对照组41～136天，平均潜伏期为69±21.12天；TAM组55～139天，平均潜伏期为108.6±41.69天，与对照组相比，差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 恶性肿瘤的诱发率：实验结束时，对照组存活的17只大鼠中有14只出现乳腺肿瘤，致瘤率为82%，其中有12只出现恶性肿瘤，致癌率为70.6%；TAM组20只大鼠中仅有6只出现肿瘤，致瘤率为30%，6只均有恶性肿瘤，致癌率为30%。两者差异有显著性(P<0.025)。用药处理期间诱发率动态变化详见图1。用药结束至实验结束的四周内，TAM组有4只大鼠出现了恶性肿瘤，而对照组仅有1只现现恶性肿瘤。
DMBA处理后周数
图1 用药处理期间
2.3 大体病理检查：乳腺恶性肿瘤大体外观可分为球形、椭圆形或多结节不规则形，以第2、3对乳腺区多见，色灰白或暗红，切面呈实性或囊性伴出血，坏死，偶见囊内有乳头形成。各组恶性肿瘤数及分布见附表。
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附表 各组恶性肿瘤的分布 组别
头(大鼠各对乳腺顺序)尾
总计
1
2
3
4
5
6
对照组
3
17
15
, http://www.100md.com
7
6
1
49
TAM组
1
4
0
0
2
0
7
2.4 组织病理学检查：根据文献[3]的组织学分类，结合Casey等[4]人的诊断标准，本实验诱发的恶性肿瘤均为腺癌(图2)，但组织象较杂乱，同一种瘤中常可混有粉刺癌，筛状癌，在未发生肿瘤的乳腺，TAM组大鼠乳腺呈明显萎缩状，腺泡少见，仅见导管。
, 百拇医药
图2 乳腺腺癌(HE，
40)
3 讨论
3.1 乳腺癌动物模型：DMBA诱发的雌性大鼠乳腺癌动物模型在肿瘤的组织起源、生物学形为、肿瘤形态及肿瘤的激素依赖性方面与人类乳腺癌有很多相似之处，是研究人类乳腺癌的良好模型[5-7]。
DMBA是多环芳烃类化合物，经体内代谢活化后引起DNA损伤，导致细胞突变，正常细胞分化受阻，出现异常增生最终形成肿瘤。我们的实验在鼠龄45±1天及52±1天分别胃饲DMBA，成功地诱发出乳腺癌，对照组致癌率达70.6%，与文献报道的相似[5]。
3.2 TAM对乳腺癌发生的影响：DMBA并不能诱发雄性大鼠乳腺癌这一事实[6]，表明：DMBA引起细胞突变、形成肿瘤有赖于雌激素的作用。雌激素能促进突变细胞克隆性生长，抑制其正常分化，最终形成肿瘤。因此，如果我们在乳腺癌诱发的动态过程(即乳腺上皮增生
不典型增生癌变)中，采取措施阻断雌激素的促进作用，就有可能抑制乳腺癌的发生。TAM可以通过与雌激素竞争乳腺上皮细胞膜上的雌激素受体来抑制雌激素的作用，因此我们的实验选择在DMBA处理4周后，此时大鼠乳腺导管分枝的末端即终末蕾已出现增生及皮不典型增生[6]，应用TAM皮下注射有效地抑制肿瘤的发生，结果显示(图1)：整个用药阶段，20只大鼠中仅2只出现乳腺癌，致癌率为10%，与对照组相比(55%)，有显著性差异(P<0.005)。同时，这个结果也表明并不是所有的细胞均对TAM敏感，仍有一部分不敏感，甚至存在耐TAM细胞[9]。在人类乳腺癌细胞的体外研究中发现，TAM使肿瘤细胞积聚在G0/G1期，而一旦停用TAM，这些细胞重新进入细胞周期进一步生长繁殖，这可以解释，当停用TAM4周内，TAM组又有4只大鼠出现恶性肿瘤，而同期对照组仅有1只大鼠出现肿瘤的现象，如此，使TAM组肿瘤出现的潜伏期明显延长对照组69±21.12天，TAM组108.6±41.69天，P<0.05，并使肿瘤的诱发率明显升高(用药阶段10%上升到30%)。有文献报导，TAM在其它乳腺肿瘤动物模型中也出现停药后肿瘤发生率升高的现象[8]。
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本实验结果表明：TAM能明显减少DMBA诱导的大鼠乳腺癌的发生。同样，在临床开展的乳腺癌的预防研究中，TAM能明显减少高危人群乳腺癌发生的危险性[1]。尽管长期应用TAM可能出现一些副作用如增加患者内膜癌发生的危险性以及促进血栓形成等，但仍有学者认为TAM是许多高危妇女预防乳腺癌发生的一种有效而适当的药物[1]。
作者简介：邓敏 硕士研究生，现在苏州医学院病理解剖学教研室
苏宁 导师
参考文献
1 Fisher B et al:Tamoxifen for prevention of breast Cances:report of the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel project P-1 study.J Natl Cancer Inset,1998，90(18)∶1371
, 百拇医药
2 Veronesi U et al:prevention of breast Cancer with tamoxifen:preliminary findings from the Italian randomised tisal among hysterectomised woman.Italian Tamoxifen prevention study.Lancet,1998，352(9122)∶93
3 Benirschke K et al:In:Mammary gland-rats in pathology of labosatory animals,Vol Ⅱ,1978，New York;Heidelberg,1209
4 Casey HW et al:In Mammary neoplasia in animals in recent results in cances research,Vol∶66,springes-veslag,New York;Berlin Heidelberg,1979∶135
, http://www.100md.com
5 苏宁，等.DMBA诱发大鼠乳腺癌发生学与激素依赖性研究.癌症，1990，9(1)∶8
6 姜军，等.二甲基苯蒽诱发大鼠乳腺癌发生的组织形态学观察.中国肿瘤临床，1998，26(6)∶436
7 Hollingsworth AB,et al:prevention of DMBA-induced rat mammay carcinomas comparing leuprol:de,oophorectomy,and tamoxifen.Breast Cances Res Treat,1998，47(1)∶63
8 Martin G et al:Effect of tamoxifen on intsaperitoneal N-nitroso-N-methylurea induced tumors.Cancer-lett;1996，100(1-2)∶227
9 尹科祥，等.耐三苯氧胺大鼠乳腺癌细胞株的分离及特性。南京铁道医学院学报，1994，13(2)∶69
(1999年6月5日收稿), 百拇医药
单位：南京铁道医学院病理解剖学教研室，南京，210009
关键词：二甲基苯蒽；乳腺癌；三苯氧胺；大鼠
苏州医学院学报990907 摘要 应用DMBA诱发的雌性SD大鼠乳腺癌模型，初步探讨了大鼠乳腺受致癌剂作用后，三苯氧胺对乳腺癌发生的影响。结果显示：三苯氧胺使恶性肿瘤出现的平均潜伏期明显延长，恶性肿瘤的发生率明显降低。
中图法分类 R737.901
Effect of TAM on Mammary Carcinoma Induced by DMBA in Rats
Den Min,Su Ling,Han Yueming，et al
, http://www.100md.com
(Department of Pathology,Nanjing Railway Medical College,Nanjing，210009)
Abstract Object:The effect of tamoxifen (TAM) was evaluated on a mammary tumor model induced by 7.12-dimethylbenz(a)anthracene (DMBA) in the female Sprague-Dawley(SD) rats.Significant difference between TAM and control batches was observed in tumor incidence (30% versus 70.6%,P<0.05) and the mean latent period (108.6±41.69 days versus 69±21.12 days,P<0.025).Findings demonstrate that TAM significantly decreases the appearance of tumor induced in rats by DMBA.
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Key words DMBA;mamary carcinoma;TAM;rats
三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)作为非甾体类抗雌激素药已广泛用于治疗乳腺癌并能明显延长乳腺癌患者生存率。近年来，该药在乳腺癌预防中的作用正逐渐受到人们的重视，并将该药用于乳腺良性肿瘤及小叶增生的治疗，目前欧美一些国家正在试图给高危妇女服用TAM以预防乳腺癌发生[1～2]。本实验应用7，12-二甲基苯蒽(7，12-dimethylbenz(a)anthracene,DMBA)诱发的雌性SD大鼠乳腺癌模型，初步探讨乳腺受致癌剂作用后，TAM对大鼠乳腺癌发生的影响。
1 材料和方法
1.1 主要药品：DMBA及TAM均为Sigma出品。
1.2 动物：未交配的雌性SD大鼠(购自上海市计划生育研究所)40只，鼠龄41±5天，由本室动物房分笼饲养，5～6只/笼，室温20±5℃，每天控制光照12h，通风，随意进食饮水，饲料为本院动物房配制的颗料饲料，鼠龄达45±1天时，每鼠胃饲1ml麻油，内含10mg DMBA，1周后重复喂药1次。第2次喂药4周后，按体重随机将大鼠分为2组：①对照组：0.1ml麻油；②TAM组：0.1ml麻油内含100μg TAM。每组均皮下注射，5次/周×12周。
, 百拇医药
1.3 诱发肿瘤观察：分组后，每周2次检查各大鼠每对乳腺肿瘤的出现情况，记录肿瘤出现时间，并以第2次喂药到各大鼠出现第1个体表可触及恶性肿瘤(经组织学证实)的时间为该大鼠诱发恶性肿瘤的潜伏期；各组荷瘤大鼠数与各组大鼠总数之比即为该组大鼠的恶性肿瘤诱发率。
1.4 病理检查：于实验的第23周，颈椎离断处死所有大鼠，切开皮肤，暴露六对乳腺，详细检查各对乳腺，有肿瘤者，取下肿瘤并已录其分布、形态，无肿瘤者也取部分放入10%的中性福尔马林固定，常规取材制片，HE染色光镜下观察乳腺病变。
1.5 数据处理：潜伏期用秩和检验，致癌率用确切概率法。
2 结果
2.1 诱发恶性肿瘤的潜伏期：第2次胃饲DMBA后的第6周起，对照组大鼠陆续出现乳腺肿瘤，而TAM组则在第8周开始出现肿瘤，两组大鼠恶性肿瘤出现的潜伏期为：对照组41～136天，平均潜伏期为69±21.12天；TAM组55～139天，平均潜伏期为108.6±41.69天，与对照组相比，差异有显著性(P<0.05)。
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2.2 恶性肿瘤的诱发率：实验结束时，对照组存活的17只大鼠中有14只出现乳腺肿瘤，致瘤率为82%，其中有12只出现恶性肿瘤，致癌率为70.6%；TAM组20只大鼠中仅有6只出现肿瘤，致瘤率为30%，6只均有恶性肿瘤，致癌率为30%。两者差异有显著性(P<0.025)。用药处理期间诱发率动态变化详见图1。用药结束至实验结束的四周内，TAM组有4只大鼠出现了恶性肿瘤，而对照组仅有1只现现恶性肿瘤。
DMBA处理后周数
图1 用药处理期间
2.3 大体病理检查：乳腺恶性肿瘤大体外观可分为球形、椭圆形或多结节不规则形，以第2、3对乳腺区多见，色灰白或暗红，切面呈实性或囊性伴出血，坏死，偶见囊内有乳头形成。各组恶性肿瘤数及分布见附表。
, http://www.100md.com
附表 各组恶性肿瘤的分布 组别
头(大鼠各对乳腺顺序)尾
总计
1
2
3
4
5
6
对照组
3
17
15
, http://www.100md.com
7
6
1
49
TAM组
1
4
0
0
2
0
7
2.4 组织病理学检查：根据文献[3]的组织学分类，结合Casey等[4]人的诊断标准，本实验诱发的恶性肿瘤均为腺癌(图2)，但组织象较杂乱，同一种瘤中常可混有粉刺癌，筛状癌，在未发生肿瘤的乳腺，TAM组大鼠乳腺呈明显萎缩状，腺泡少见，仅见导管。
, 百拇医药
图2 乳腺腺癌(HE，
40)3 讨论
3.1 乳腺癌动物模型：DMBA诱发的雌性大鼠乳腺癌动物模型在肿瘤的组织起源、生物学形为、肿瘤形态及肿瘤的激素依赖性方面与人类乳腺癌有很多相似之处，是研究人类乳腺癌的良好模型[5-7]。
DMBA是多环芳烃类化合物，经体内代谢活化后引起DNA损伤，导致细胞突变，正常细胞分化受阻，出现异常增生最终形成肿瘤。我们的实验在鼠龄45±1天及52±1天分别胃饲DMBA，成功地诱发出乳腺癌，对照组致癌率达70.6%，与文献报道的相似[5]。
3.2 TAM对乳腺癌发生的影响：DMBA并不能诱发雄性大鼠乳腺癌这一事实[6]，表明：DMBA引起细胞突变、形成肿瘤有赖于雌激素的作用。雌激素能促进突变细胞克隆性生长，抑制其正常分化，最终形成肿瘤。因此，如果我们在乳腺癌诱发的动态过程(即乳腺上皮增生
不典型增生癌变)中，采取措施阻断雌激素的促进作用，就有可能抑制乳腺癌的发生。TAM可以通过与雌激素竞争乳腺上皮细胞膜上的雌激素受体来抑制雌激素的作用，因此我们的实验选择在DMBA处理4周后，此时大鼠乳腺导管分枝的末端即终末蕾已出现增生及皮不典型增生[6]，应用TAM皮下注射有效地抑制肿瘤的发生，结果显示(图1)：整个用药阶段，20只大鼠中仅2只出现乳腺癌，致癌率为10%，与对照组相比(55%)，有显著性差异(P<0.005)。同时，这个结果也表明并不是所有的细胞均对TAM敏感，仍有一部分不敏感，甚至存在耐TAM细胞[9]。在人类乳腺癌细胞的体外研究中发现，TAM使肿瘤细胞积聚在G0/G1期，而一旦停用TAM，这些细胞重新进入细胞周期进一步生长繁殖，这可以解释，当停用TAM4周内，TAM组又有4只大鼠出现恶性肿瘤，而同期对照组仅有1只大鼠出现肿瘤的现象，如此，使TAM组肿瘤出现的潜伏期明显延长对照组69±21.12天，TAM组108.6±41.69天，P<0.05，并使肿瘤的诱发率明显升高(用药阶段10%上升到30%)。有文献报导，TAM在其它乳腺肿瘤动物模型中也出现停药后肿瘤发生率升高的现象[8]。, http://www.100md.com
本实验结果表明：TAM能明显减少DMBA诱导的大鼠乳腺癌的发生。同样，在临床开展的乳腺癌的预防研究中，TAM能明显减少高危人群乳腺癌发生的危险性[1]。尽管长期应用TAM可能出现一些副作用如增加患者内膜癌发生的危险性以及促进血栓形成等，但仍有学者认为TAM是许多高危妇女预防乳腺癌发生的一种有效而适当的药物[1]。
作者简介：邓敏 硕士研究生，现在苏州医学院病理解剖学教研室
苏宁 导师
参考文献
1 Fisher B et al:Tamoxifen for prevention of breast Cances:report of the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel project P-1 study.J Natl Cancer Inset,1998，90(18)∶1371
, 百拇医药
2 Veronesi U et al:prevention of breast Cancer with tamoxifen:preliminary findings from the Italian randomised tisal among hysterectomised woman.Italian Tamoxifen prevention study.Lancet,1998，352(9122)∶93
3 Benirschke K et al:In:Mammary gland-rats in pathology of labosatory animals,Vol Ⅱ,1978，New York;Heidelberg,1209
4 Casey HW et al:In Mammary neoplasia in animals in recent results in cances research,Vol∶66,springes-veslag,New York;Berlin Heidelberg,1979∶135
, http://www.100md.com
5 苏宁，等.DMBA诱发大鼠乳腺癌发生学与激素依赖性研究.癌症，1990，9(1)∶8
6 姜军，等.二甲基苯蒽诱发大鼠乳腺癌发生的组织形态学观察.中国肿瘤临床，1998，26(6)∶436
7 Hollingsworth AB,et al:prevention of DMBA-induced rat mammay carcinomas comparing leuprol:de,oophorectomy,and tamoxifen.Breast Cances Res Treat,1998，47(1)∶63
8 Martin G et al:Effect of tamoxifen on intsaperitoneal N-nitroso-N-methylurea induced tumors.Cancer-lett;1996，100(1-2)∶227
9 尹科祥，等.耐三苯氧胺大鼠乳腺癌细胞株的分离及特性。南京铁道医学院学报，1994，13(2)∶69
(1999年6月5日收稿), 百拇医药