高效液相色谱法测定人血清中西替利嗪及其药物动力学
作者：程应全 秦玉花 宋卫东
单位：(程应全 秦玉花)河南省人民医院 郑州 450003；(宋卫东)河南省郾城县药品检验所
关键词：西替利嗪，高效液相色谱法，血药浓度，药物动力学
中国医院药学杂志991206
摘要 目的:建立高效液相色谱法测定人血清中西替利嗪。方法:用HPLC法检测8名健康自愿者血中西替利嗪浓度，经3P87程序拟合，计算药动学参数。结果:西替利嗪药动学参数T1/2α，T1/2β，Tmax，Cmax，V/F和AUC分别为(1.6±0.8)h，(7.2±1.1)h，(1.3±0.4)h，(374.7±61.8)ng.ml-1，(39.1±8.8)L和(3188.4±246.1)ng.h.ml-1。结论:该方法简单、快速、准确，适用于药动学及药效学研究。
, 百拇医药
Determination of cetirizine in human serum and
its pharmacokinetics by HPLC
Cheng Yingquan Qin Yuhua Song Weidong
Henan Provincial Hospital,Zhengzhou 450003
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an HPLC method for determination of cetirizine in human serum.METHODS：Cetirizine concentration in serum of healthy male volunteers was determined with HPLC,and the pharmacokinetic parameters was simulated with 3P87 program.RESULTS：The pharmacokinetic parameters T1/2α，T1/2β，Tmax，Cmax，V/F, and AUC were(1.6±0.8) h，(7.2±1.1) h， (1.3±0.4) h， (374.7±61.8) ng.ml-1,(39.1±8.8) L，and (3 188.4±246.1) ng.h.ml-1,respectively.CONCLUSION：This method is simple,rapid,and accurate.It is useful for research on pharmacodynamics and pharmacokinetics of cetirizine.
, 百拇医药
KEY WORDS cetirizine,HPLC,serum drug concentration,pharmacokinetics
西替利嗪(cetirizine，CTRZ)是一种新开发的H1受体抑制剂，既可抑制一些外界组胺作用，亦可抑制体内由组胺释放剂产生的组胺作用，还可抑制由VIP及P物质、神经肽所引起的皮肤作用。临床用于治疗季节性鼻炎及眼结膜炎、长期性过敏性鼻炎、瘙痒、荨麻疹和过敏性哮喘等[1.2]。为测定人血清中CTRZ浓度，以研究其在体内药动学和生物利用度，本文建立CTRZ的HPLC测定法。
1 材料
西替利嗪对照品(河南医科大学药物研究所提供，含量99.5%)；西替利嗪片(仙特敏，比利时UCB公司，规格10mg/片)；乙腈为国产色谱纯，磷酸二氢钾、甲醇、醋酸乙酯(重蒸后应用)均为国产分析纯，磷酸、枸橼酸钠为化学纯，庚烷磺酸钠(Q/372426-J008-92标准，含量99.5%)。岛津LC-10A高效液相色谱仪；SPD-10A紫外可调检测器；CR-7A数据处理机；CTO-10A柱温箱。
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2 方法与结果
2.1 色谱条件[3] Shim-pack CLC-ODS柱(250mm×4.6mm，粒度5μm)分析柱(日本岛津)，柱温40℃，流动相为乙腈∶0.01mol.L-1磷酸二氢钾=46∶54(含0.02mol.L-1庚烷磺酸钠，pH6.3)，流速1ml.min-1，检测波长229nm，检测灵敏度0.003AUFS。
2.2 样品处理与测定 取血清1ml于10ml具塞离心管中，加入1mol.L-1枸橼酸钠1ml，混匀，再加入醋酸乙酯3.0ml，振荡2min，离心(4 000r.min-1)10min，提取2次。合并有机层，置另一只10ml尖底离心试管中，加1.7%磷酸100μl，振荡2min，离心5min，穿过醋酸乙酯层取下层磷酸液50μl进样，按上述色谱条件测定CTRZ的峰高，采用外标法定量。
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2.3 色谱行为 按本色谱条件CTRZ能与血清中其它杂质完全分开，保留时间为7.85min(图1)。
图1 西替利嗪色谱图
a.CTRZ标准品；b.空白血清；c.空白血清+CTRZ；d.服药后血样
2.4 标准曲线制备 精密称取CTRZ对照品适量，用流动相配成系列标准液(0.165，0.33，1.65，3.30，15.45和30.90μg.ml-1)。取各标准液50μl，加健康人混合血清1ml配成8.25，16.5，82.5，165.0，772.5和1545.0ng.ml-1的血清样品，混匀，以下按样品处理与测定项操作，以西替利嗪浓度对峰高作线性回归，得标准曲线方程为：H=61.85C+6.73，r=0.9995。最低检测浓度(S/N=3)为2ng.ml-1。
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2.5 回收率试验 用不同浓度CTRZ标准液加健康人混合血清，配成16.5，165.0和1545.0ng.ml-1的血清样品，每个浓度各5份，按样品处理与测定项操作测定。CTRZ高、中、低3个浓度测得平均回收率为100.8%，标准差1.7%(表1)。
表1 血清中CTRZ的回收率(n=5) 加入量/ng.ml-1
测得量/ng.ml-1
回收率/%
RSD/%
16.5
17.0±0.6
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102.8±3.4
3.31
165.0
165.4±3.6
100.2±2.2
2.20
1545.0
1536.6±1.1
99.5±1.4
1.37
平均回收率
100.8±1.7
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2.6 方法精密度 同回收率方法于一日内测定5次；另按上述操作每日处理操作1次，连续测5d，得日内及日间差，结果见表2。表2 方法精密度(n=5) 浓度
ng.ml-1
日内
日间
测得量/ng.ml-1
RSD/%
测得量/ng.ml-1
RSD/%
16.5
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16.8±0.4
2.62
16.0±1.0
5.94
165.0
164.6±6.3
3.84
165.2±12.6
7.66
1545.0
1545.1±35.8
2.32
, 百拇医药
1545.0±91.4
5.91
2.7 干扰试验 试验了临床可能与之配伍应用的药物维生素C、地塞米松、强的松、沙丁胺醇、阿司咪唑、氯苯那敏、异丙嗪、地西泮、氯硝西泮、交沙霉素、头孢氨苄、诺氟沙星、氧氟沙星、氨茶碱、喘定，均不干扰CTRZ测定。
2.8 人体试验 健康志愿者8名，男性，年龄22～24岁，体重55～70kg，均无烟酒嗜好。受试前经心电图、肝、肾功能检查正常。给药前两周均未服任何药物，受试前一天晚饭后到次日晨禁食12h，次日晨7时服用20mgCTRZ片，200ml温开水送服，2h后用低脂肪统一餐。
志愿者于服药前和服药后0.17，0.33，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12和25h采集静脉血3ml，室温放置1h后离心，分取血清，置-30℃冰箱保存。测定前自然解冻，制备血样，测定血药浓度，得药时数据，经3P87药动学程序处理，符合一级吸收二室模型，其主要药动学参数见表3，平均药时曲线见图2。表3 口服单剂量CTRZ片20mg的药动学参数 受试者
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T1/2α
h
T1/2β
h
Tmax
h
Cmax
ng.ml-1
V/F
L
AUC
ng.h.ml-1
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A
1.34
6.97
0.84
434.42
37.8
3292.88
B
2.17
7.90
1.09
370.63
43.0
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3013.31
C
1.75
7.36
1.40
400.31
34.4
3001.62
D
3.07
6.50
0.66
437.59
, 百拇医药
41.5
3332.09
E
1.47
8.20
2.06
347.91
30.3
3340.19
F
0.82
5.32
1.30
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430.15
26.0
3061.74
G
1.67
8.78
1.38
297.86
52.9
3609.40
H
0.64
6.16
, 百拇医药
1.338
279.86
46.8
2856.14
1.6
7.2
1.3
374.7
39.1
3188.4
±s
0.8
1.1
, 百拇医药
0.4
61.8
8.8
246.1
图2 志愿者单剂量口服CTRZ20mg后平均血药浓度-时间曲线
3 讨论
用AR醋酸乙酯提取时，其中的杂质对CTRZ测定有干扰(掩盖主峰)，本实验将醋酸乙酯重新蒸馏后可排除干扰。
文献[4]报道CTRZ体内过程符合一室模型，药动学参数T1/2，Tmax,Cmax和AUC分别为10.6h，1.12h，337ng.ml-1和3721ng.h.ml-1。本实验8名健康志愿者口服CTRZ20mg后，获得药-时数据，经3P87药动学程序拟合，经“F”和AIC值判断，属一级吸收二室模型，其T1/2α，T1/2β，Tmax,Cmax和AUC分别为1.6h，7.2h，1.3h，374.7ng.ml-1和3188.4ng.h.ml-1。这可能与人种不同有关。
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本色谱条件和血清样本处理方法，能满足CTRZ药动学和生物利用度研究需要，并为临床用药提供依据。
参考文献
1 Grant GA,Glovsky MM,Meltzer EO,et al.Safety and efficacy of cetirizine in the prophylactic management of patients with seasonal allergic rhinitis and asthma, Abstract 225.J Allergy Clin Immunol,1993,91:197
2 Goh CL,Wong WK,Lim J.Cetirizine vs placebo in chronic idiopathic urticaria-a double blind randomised cross-over study.Ann Acad Med,1991,20:328
, 百拇医药
3 Watson WT,Simons KJ,Chen XY,et al.Cetirizine:A pharmacokinetic and pharmacodynamic evaluation in children with seasonal allergic rhinitis.J Allergy Clin Immunol,1989,84(4):457
4 Lefebvre RA,Rosseel MT,Bernheim J.Single dose pharmacokinetics of cetirizine in young and elderly volunteers.Int J Clin Pharmacol Res,1988,8(6):463
收稿日期：1999年1月26日, 百拇医药
单位：(程应全 秦玉花)河南省人民医院 郑州 450003；(宋卫东)河南省郾城县药品检验所
关键词：西替利嗪，高效液相色谱法，血药浓度，药物动力学
中国医院药学杂志991206
摘要 目的:建立高效液相色谱法测定人血清中西替利嗪。方法:用HPLC法检测8名健康自愿者血中西替利嗪浓度，经3P87程序拟合，计算药动学参数。结果:西替利嗪药动学参数T1/2α，T1/2β，Tmax，Cmax，V/F和AUC分别为(1.6±0.8)h，(7.2±1.1)h，(1.3±0.4)h，(374.7±61.8)ng.ml-1，(39.1±8.8)L和(3188.4±246.1)ng.h.ml-1。结论:该方法简单、快速、准确，适用于药动学及药效学研究。
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Determination of cetirizine in human serum and
its pharmacokinetics by HPLC
Cheng Yingquan Qin Yuhua Song Weidong
Henan Provincial Hospital,Zhengzhou 450003
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an HPLC method for determination of cetirizine in human serum.METHODS：Cetirizine concentration in serum of healthy male volunteers was determined with HPLC,and the pharmacokinetic parameters was simulated with 3P87 program.RESULTS：The pharmacokinetic parameters T1/2α，T1/2β，Tmax，Cmax，V/F, and AUC were(1.6±0.8) h，(7.2±1.1) h， (1.3±0.4) h， (374.7±61.8) ng.ml-1,(39.1±8.8) L，and (3 188.4±246.1) ng.h.ml-1,respectively.CONCLUSION：This method is simple,rapid,and accurate.It is useful for research on pharmacodynamics and pharmacokinetics of cetirizine.
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KEY WORDS cetirizine,HPLC,serum drug concentration,pharmacokinetics
西替利嗪(cetirizine，CTRZ)是一种新开发的H1受体抑制剂，既可抑制一些外界组胺作用，亦可抑制体内由组胺释放剂产生的组胺作用，还可抑制由VIP及P物质、神经肽所引起的皮肤作用。临床用于治疗季节性鼻炎及眼结膜炎、长期性过敏性鼻炎、瘙痒、荨麻疹和过敏性哮喘等[1.2]。为测定人血清中CTRZ浓度，以研究其在体内药动学和生物利用度，本文建立CTRZ的HPLC测定法。
1 材料
西替利嗪对照品(河南医科大学药物研究所提供，含量99.5%)；西替利嗪片(仙特敏，比利时UCB公司，规格10mg/片)；乙腈为国产色谱纯，磷酸二氢钾、甲醇、醋酸乙酯(重蒸后应用)均为国产分析纯，磷酸、枸橼酸钠为化学纯，庚烷磺酸钠(Q/372426-J008-92标准，含量99.5%)。岛津LC-10A高效液相色谱仪；SPD-10A紫外可调检测器；CR-7A数据处理机；CTO-10A柱温箱。
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2 方法与结果
2.1 色谱条件[3] Shim-pack CLC-ODS柱(250mm×4.6mm，粒度5μm)分析柱(日本岛津)，柱温40℃，流动相为乙腈∶0.01mol.L-1磷酸二氢钾=46∶54(含0.02mol.L-1庚烷磺酸钠，pH6.3)，流速1ml.min-1，检测波长229nm，检测灵敏度0.003AUFS。
2.2 样品处理与测定 取血清1ml于10ml具塞离心管中，加入1mol.L-1枸橼酸钠1ml，混匀，再加入醋酸乙酯3.0ml，振荡2min，离心(4 000r.min-1)10min，提取2次。合并有机层，置另一只10ml尖底离心试管中，加1.7%磷酸100μl，振荡2min，离心5min，穿过醋酸乙酯层取下层磷酸液50μl进样，按上述色谱条件测定CTRZ的峰高，采用外标法定量。
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2.3 色谱行为 按本色谱条件CTRZ能与血清中其它杂质完全分开，保留时间为7.85min(图1)。
图1 西替利嗪色谱图
a.CTRZ标准品；b.空白血清；c.空白血清+CTRZ；d.服药后血样
2.4 标准曲线制备 精密称取CTRZ对照品适量，用流动相配成系列标准液(0.165，0.33，1.65，3.30，15.45和30.90μg.ml-1)。取各标准液50μl，加健康人混合血清1ml配成8.25，16.5，82.5，165.0，772.5和1545.0ng.ml-1的血清样品，混匀，以下按样品处理与测定项操作，以西替利嗪浓度对峰高作线性回归，得标准曲线方程为：H=61.85C+6.73，r=0.9995。最低检测浓度(S/N=3)为2ng.ml-1。
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2.5 回收率试验 用不同浓度CTRZ标准液加健康人混合血清，配成16.5，165.0和1545.0ng.ml-1的血清样品，每个浓度各5份，按样品处理与测定项操作测定。CTRZ高、中、低3个浓度测得平均回收率为100.8%，标准差1.7%(表1)。
表1 血清中CTRZ的回收率(n=5) 加入量/ng.ml-1
测得量/ng.ml-1
回收率/%
RSD/%
16.5
17.0±0.6
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102.8±3.4
3.31
165.0
165.4±3.6
100.2±2.2
2.20
1545.0
1536.6±1.1
99.5±1.4
1.37
平均回收率
100.8±1.7
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2.6 方法精密度 同回收率方法于一日内测定5次；另按上述操作每日处理操作1次，连续测5d，得日内及日间差，结果见表2。表2 方法精密度(n=5) 浓度
ng.ml-1
日内
日间
测得量/ng.ml-1
RSD/%
测得量/ng.ml-1
RSD/%
16.5
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16.8±0.4
2.62
16.0±1.0
5.94
165.0
164.6±6.3
3.84
165.2±12.6
7.66
1545.0
1545.1±35.8
2.32
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1545.0±91.4
5.91
2.7 干扰试验 试验了临床可能与之配伍应用的药物维生素C、地塞米松、强的松、沙丁胺醇、阿司咪唑、氯苯那敏、异丙嗪、地西泮、氯硝西泮、交沙霉素、头孢氨苄、诺氟沙星、氧氟沙星、氨茶碱、喘定，均不干扰CTRZ测定。
2.8 人体试验 健康志愿者8名，男性，年龄22～24岁，体重55～70kg，均无烟酒嗜好。受试前经心电图、肝、肾功能检查正常。给药前两周均未服任何药物，受试前一天晚饭后到次日晨禁食12h，次日晨7时服用20mgCTRZ片，200ml温开水送服，2h后用低脂肪统一餐。
志愿者于服药前和服药后0.17，0.33，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12和25h采集静脉血3ml，室温放置1h后离心，分取血清，置-30℃冰箱保存。测定前自然解冻，制备血样，测定血药浓度，得药时数据，经3P87药动学程序处理，符合一级吸收二室模型，其主要药动学参数见表3，平均药时曲线见图2。表3 口服单剂量CTRZ片20mg的药动学参数 受试者
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T1/2α
h
T1/2β
h
Tmax
h
Cmax
ng.ml-1
V/F
L
AUC
ng.h.ml-1
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A
1.34
6.97
0.84
434.42
37.8
3292.88
B
2.17
7.90
1.09
370.63
43.0
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C
1.75
7.36
1.40
400.31
34.4
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D
3.07
6.50
0.66
437.59
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41.5
3332.09
E
1.47
8.20
2.06
347.91
30.3
3340.19
F
0.82
5.32
1.30
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430.15
26.0
3061.74
G
1.67
8.78
1.38
297.86
52.9
3609.40
H
0.64
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1.338
279.86
46.8
2856.14
1.6
7.2
1.3
374.7
39.1
3188.4
±s
0.8
1.1
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0.4
61.8
8.8
246.1
图2 志愿者单剂量口服CTRZ20mg后平均血药浓度-时间曲线
3 讨论
用AR醋酸乙酯提取时，其中的杂质对CTRZ测定有干扰(掩盖主峰)，本实验将醋酸乙酯重新蒸馏后可排除干扰。
文献[4]报道CTRZ体内过程符合一室模型，药动学参数T1/2，Tmax,Cmax和AUC分别为10.6h，1.12h，337ng.ml-1和3721ng.h.ml-1。本实验8名健康志愿者口服CTRZ20mg后，获得药-时数据，经3P87药动学程序拟合，经“F”和AIC值判断，属一级吸收二室模型，其T1/2α，T1/2β，Tmax,Cmax和AUC分别为1.6h，7.2h，1.3h，374.7ng.ml-1和3188.4ng.h.ml-1。这可能与人种不同有关。
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本色谱条件和血清样本处理方法，能满足CTRZ药动学和生物利用度研究需要，并为临床用药提供依据。
参考文献
1 Grant GA,Glovsky MM,Meltzer EO,et al.Safety and efficacy of cetirizine in the prophylactic management of patients with seasonal allergic rhinitis and asthma, Abstract 225.J Allergy Clin Immunol,1993,91:197
2 Goh CL,Wong WK,Lim J.Cetirizine vs placebo in chronic idiopathic urticaria-a double blind randomised cross-over study.Ann Acad Med,1991,20:328
, 百拇医药
3 Watson WT,Simons KJ,Chen XY,et al.Cetirizine:A pharmacokinetic and pharmacodynamic evaluation in children with seasonal allergic rhinitis.J Allergy Clin Immunol,1989,84(4):457
4 Lefebvre RA,Rosseel MT,Bernheim J.Single dose pharmacokinetics of cetirizine in young and elderly volunteers.Int J Clin Pharmacol Res,1988,8(6):463
收稿日期：1999年1月26日, 百拇医药