一组小鼠抗大鼠单克隆抗体的鉴定
作者：闵密克 朱勇 金伯泉 贾卫 刘雪松
单位：闵密克(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；朱勇(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；金伯泉(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；贾卫(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；刘雪松(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)
关键词：大鼠；单克隆抗体；流式细胞术
一组小鼠抗大鼠单克隆抗体的鉴定
中图号：R392.11 文献标识码：B
文章编号:1007-8738(2000)01-0078-79
本室保存了一组小鼠抗大鼠的单克隆抗体(mAb)OX54(CD2)，W3/25(CD4)，OX19(CD5)，OX39(CD25)，OX7(CD90，Thy1)，OX18(MHCI单态)和R73(TCRαβ)。现以间接免疫荧光染色法和流式细胞仪分析技术，观察了这组mAb在大鼠胸腺细胞及淋巴结细胞中的分布，并对其特异性进行了鉴定。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 分泌OX54(CD2)，W3/25(CD4)，OX19(CD5)，OX39(CD25)，OX7(CD90，Thy1)，OX18(MHCI单态)和R73(TCRαβ)等mAb的杂交瘤细胞株，由澳大利亚Flinders医
中心引进，本教研室保存。常规复苏杂交瘤细胞，小鼠腹腔接种，制备腹水。
1.2 方法 分别取8周龄Wistar大鼠胸腺及肠系膜淋巴结，于200目筛网中轻轻研碎，用含100mL/LFCS的RPMI1640培养基制成单个胸腺及淋巴结细胞悬液，调整细胞密度至5×109/L备用。制备活化T细胞：取大鼠胸腺或淋巴结细胞悬液，加入PHA(4mg/L)及IL2(2×105U/L)，于24孔培养板中，37℃，50mL/LCO2孵箱中孵育72h。除检测抗CD25mAb用活化T细胞外，其余mAb的检测均采用静止的胸腺细胞和淋巴结细胞。分别加入相应含特异性mAb的腹水，进行间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析。
, 百拇医药
2 结果
本组小鼠抗大鼠白细胞分化抗原mAb用间接免疫荧光染色后，流式细胞仪分析结果表明，OX54(CD2)分布于大鼠的T细胞、NK细胞、粒细胞、树突状细胞(DC)及单核巨噬细胞的某些亚群，胸腺细胞中的阳性率为93.1%(图1)。W3/25(CD4)除了表达在大鼠T细胞亚群外，还表达在DC的某些亚群及单核-巨噬细胞。其在胸腺细胞中的表达率为87.7%。OX19(CD5)表达于T细胞中，胸腺细胞中的阳性率为94.0%。OX39(CD25)在未经刺激的胸腺细胞中基本不表达，经PHA及IL2作用72h后，表达率达43.5%。胸腺细胞中有97.4%为OX7+(CD90,Thy1)细胞，且平均荧光强度(MFI)高。OX18+(MHC-I单态)的细胞仅占胸腺细胞的38.8%，且MFI较低。R73(TCRαβ)在淋巴结细胞中的表达率为84.0%。以上结果均与以往文献报道相一致[1-4]。
图1 一组小鼠抗大鼠mAb在大鼠胸腺细胞和淋巴结细胞中的分布
, http://www.100md.com
3 讨论
以上结果表明，本组腹水mAb的活性好，含量较高(5～10g/L，资料未显示)，为研究大鼠免疫系统和神经内分泌系统等提供了有用工具。但本组中尚缺乏抗CD3和CD8等mAb，有待补充完善。
作者简介：闵密克，女，27岁，硕士生
西安市长乐西路17号，Tel.(029)3374531
参考文献：
[1]Clark SJ, Law DA, Paterson DJ, et al. Activation of rat T lymphocytes by anti CD2 monoclonal antibodies[J]. J Exp Med, 1988;167:1861- 1872.
, http://www.100md.com
[2]Tanaka M, Shinohara K, Fukumoto T, et al. Effect of cyclosporin A on rat thymus: time course analysis by immunoperoxidase technique and flow cytofluorometry[J]. Clin Exp Immunol, 1988;72:216- 221.
[3]Dallman MJ ,Thomas ML ,Green JR. MRC OX19: a monoclonal antibody that labels rat T lymphocytes and augment in vivo proliferative responses[J]. Eur J Immunol ,1984;14:260- 267.
[4] Hunig T, Wallny HJ, Hartley JK, et al. A monoclonal antibody to a constant determinant of the rat T cell antigen receptor that induces T cell activation[J]. J Exp Med ,1989;169:73- 86.
收稿日期：1999-05-21
修回日期：1999-06-25, http://www.100md.com
单位：闵密克(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；朱勇(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；金伯泉(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；贾卫(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)；刘雪松(第四军医大学免疫学教研室，陕西西安710032)
关键词：大鼠；单克隆抗体；流式细胞术
一组小鼠抗大鼠单克隆抗体的鉴定
中图号：R392.11 文献标识码：B
文章编号:1007-8738(2000)01-0078-79
本室保存了一组小鼠抗大鼠的单克隆抗体(mAb)OX54(CD2)，W3/25(CD4)，OX19(CD5)，OX39(CD25)，OX7(CD90，Thy1)，OX18(MHCI单态)和R73(TCRαβ)。现以间接免疫荧光染色法和流式细胞仪分析技术，观察了这组mAb在大鼠胸腺细胞及淋巴结细胞中的分布，并对其特异性进行了鉴定。
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1 材料和方法
1.1 材料 分泌OX54(CD2)，W3/25(CD4)，OX19(CD5)，OX39(CD25)，OX7(CD90，Thy1)，OX18(MHCI单态)和R73(TCRαβ)等mAb的杂交瘤细胞株，由澳大利亚Flinders医
中心引进，本教研室保存。常规复苏杂交瘤细胞，小鼠腹腔接种，制备腹水。
1.2 方法 分别取8周龄Wistar大鼠胸腺及肠系膜淋巴结，于200目筛网中轻轻研碎，用含100mL/LFCS的RPMI1640培养基制成单个胸腺及淋巴结细胞悬液，调整细胞密度至5×109/L备用。制备活化T细胞：取大鼠胸腺或淋巴结细胞悬液，加入PHA(4mg/L)及IL2(2×105U/L)，于24孔培养板中，37℃，50mL/LCO2孵箱中孵育72h。除检测抗CD25mAb用活化T细胞外，其余mAb的检测均采用静止的胸腺细胞和淋巴结细胞。分别加入相应含特异性mAb的腹水，进行间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析。
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2 结果
本组小鼠抗大鼠白细胞分化抗原mAb用间接免疫荧光染色后，流式细胞仪分析结果表明，OX54(CD2)分布于大鼠的T细胞、NK细胞、粒细胞、树突状细胞(DC)及单核巨噬细胞的某些亚群，胸腺细胞中的阳性率为93.1%(图1)。W3/25(CD4)除了表达在大鼠T细胞亚群外，还表达在DC的某些亚群及单核-巨噬细胞。其在胸腺细胞中的表达率为87.7%。OX19(CD5)表达于T细胞中，胸腺细胞中的阳性率为94.0%。OX39(CD25)在未经刺激的胸腺细胞中基本不表达，经PHA及IL2作用72h后，表达率达43.5%。胸腺细胞中有97.4%为OX7+(CD90,Thy1)细胞，且平均荧光强度(MFI)高。OX18+(MHC-I单态)的细胞仅占胸腺细胞的38.8%，且MFI较低。R73(TCRαβ)在淋巴结细胞中的表达率为84.0%。以上结果均与以往文献报道相一致[1-4]。
图1 一组小鼠抗大鼠mAb在大鼠胸腺细胞和淋巴结细胞中的分布
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3 讨论
以上结果表明，本组腹水mAb的活性好，含量较高(5～10g/L，资料未显示)，为研究大鼠免疫系统和神经内分泌系统等提供了有用工具。但本组中尚缺乏抗CD3和CD8等mAb，有待补充完善。
作者简介：闵密克，女，27岁，硕士生
西安市长乐西路17号，Tel.(029)3374531
参考文献：
[1]Clark SJ, Law DA, Paterson DJ, et al. Activation of rat T lymphocytes by anti CD2 monoclonal antibodies[J]. J Exp Med, 1988;167:1861- 1872.
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[2]Tanaka M, Shinohara K, Fukumoto T, et al. Effect of cyclosporin A on rat thymus: time course analysis by immunoperoxidase technique and flow cytofluorometry[J]. Clin Exp Immunol, 1988;72:216- 221.
[3]Dallman MJ ,Thomas ML ,Green JR. MRC OX19: a monoclonal antibody that labels rat T lymphocytes and augment in vivo proliferative responses[J]. Eur J Immunol ,1984;14:260- 267.
[4] Hunig T, Wallny HJ, Hartley JK, et al. A monoclonal antibody to a constant determinant of the rat T cell antigen receptor that induces T cell activation[J]. J Exp Med ,1989;169:73- 86.
收稿日期：1999-05-21
修回日期：1999-06-25, http://www.100md.com