培养瘤细胞及瘤株不同冻存方法与细胞存活之间的影响因素初步探讨
作者：顾蓓 刘玉琴 赵雪梅 高进
单位：顾蓓 刘玉琴 赵雪梅 高进(中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所，北京 100005)
关键词：
解剖学报000125 在生物学和医学研究中，细胞培养技术是最重要的手段之一，肿瘤研究中移植性肿瘤又称瘤株传代也是最基本的常用技术。关于瘤细胞培养后和瘤株建成后如何将细胞系和瘤株保存好是很值得研究的内容。人所共知冷冻保存瘤细胞和瘤株要比体内、体外传代保存更为优越，瘤细胞冻存后几乎没有机械性损伤，可以使培养瘤细胞和瘤株免遭污染和受宿主不同因素影响而改变生物学特性，特别对于那些不常用的但又很重要的细胞系或刚建株后不能立即用于实验的细胞系及瘤株，低温保存更为重要。我组采用冷冻保存培养瘤细胞和瘤株已有近20年的经验。在本实验中我们观察了已冻存的2年、5年、10年及10年以上的瘤细胞和瘤株，不同冻存条件对其存活的影响。我们发现存放细胞并不是无限期的，在液氮中保存细胞随着保存年数的增加，细胞存活率下降。10年时细胞存活率仅为26%～45%，所以每10年最好重新将种子细胞复苏后扩增再冻存，以确保种子细胞的存活率。有条件的实验室最好是将种子细胞与工程细胞分开存放，这样可以增加冻存细胞的存活率，也可降低减少液氮的费用，也有利于管理。在冻存细胞时可利用实验室现有的条件将所需冻存的细胞包一层约3cm厚的棉花置于4℃冰箱中，30min后再置于-80℃冰箱中，第2天放入液氮中，这样比原来需冻存的细胞置于液氮罐口，每1格降低1℃要简便。为了减少打开液氮罐的次数，避免液氮的挥发，对短期(数周，或数月)不用的细胞可保存于-80℃低温冰箱中。但暂时存放时间不宜过长，因1年存活率仅为34%，若要长期保存还应放入液氮罐中。如果同样加10%保护剂DMSO与丙三醇，从短期看，两者对细胞存活的影响差别均不明显；但从长期看DMSO比丙三醇要好一些。以10年所冻细胞存活率比较DMSO为34%，丙三醇为26%。若为了获得冻存细胞的最大活性，同时还应注意选择细胞处于对数生长期、细胞分裂旺盛的细胞进行保存，细胞浓度为106～107/ml较好。由此可见，要想获得冻存细胞的最大活性，影响因素很多，它们相互影响，相互作用，无论那一方面均不可忽视。如何更好地长时间冻存细胞又能保持其活性还待今后工作中进一步观察。■
收稿日期：1999-07-13, http://www.100md.com
单位：顾蓓 刘玉琴 赵雪梅 高进(中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所，北京 100005)
关键词：
解剖学报000125 在生物学和医学研究中，细胞培养技术是最重要的手段之一，肿瘤研究中移植性肿瘤又称瘤株传代也是最基本的常用技术。关于瘤细胞培养后和瘤株建成后如何将细胞系和瘤株保存好是很值得研究的内容。人所共知冷冻保存瘤细胞和瘤株要比体内、体外传代保存更为优越，瘤细胞冻存后几乎没有机械性损伤，可以使培养瘤细胞和瘤株免遭污染和受宿主不同因素影响而改变生物学特性，特别对于那些不常用的但又很重要的细胞系或刚建株后不能立即用于实验的细胞系及瘤株，低温保存更为重要。我组采用冷冻保存培养瘤细胞和瘤株已有近20年的经验。在本实验中我们观察了已冻存的2年、5年、10年及10年以上的瘤细胞和瘤株，不同冻存条件对其存活的影响。我们发现存放细胞并不是无限期的，在液氮中保存细胞随着保存年数的增加，细胞存活率下降。10年时细胞存活率仅为26%～45%，所以每10年最好重新将种子细胞复苏后扩增再冻存，以确保种子细胞的存活率。有条件的实验室最好是将种子细胞与工程细胞分开存放，这样可以增加冻存细胞的存活率，也可降低减少液氮的费用，也有利于管理。在冻存细胞时可利用实验室现有的条件将所需冻存的细胞包一层约3cm厚的棉花置于4℃冰箱中，30min后再置于-80℃冰箱中，第2天放入液氮中，这样比原来需冻存的细胞置于液氮罐口，每1格降低1℃要简便。为了减少打开液氮罐的次数，避免液氮的挥发，对短期(数周，或数月)不用的细胞可保存于-80℃低温冰箱中。但暂时存放时间不宜过长，因1年存活率仅为34%，若要长期保存还应放入液氮罐中。如果同样加10%保护剂DMSO与丙三醇，从短期看，两者对细胞存活的影响差别均不明显；但从长期看DMSO比丙三醇要好一些。以10年所冻细胞存活率比较DMSO为34%，丙三醇为26%。若为了获得冻存细胞的最大活性，同时还应注意选择细胞处于对数生长期、细胞分裂旺盛的细胞进行保存，细胞浓度为106～107/ml较好。由此可见，要想获得冻存细胞的最大活性，影响因素很多，它们相互影响，相互作用，无论那一方面均不可忽视。如何更好地长时间冻存细胞又能保持其活性还待今后工作中进一步观察。■
收稿日期：1999-07-13, http://www.100md.com