抗人滋养细胞单克隆抗体的制备及其免疫生物学特性鉴定
作者：陈建芳 卢进 柳忠辉 孔令华 董学斌 杨贵贞
单位：陈建芳(白求恩医科大学 免疫学教研室)；卢进(白求恩医科大学 第三临床医院办公室,吉林长春130021)；柳忠辉(白求恩医科大学 免疫学教研室)；孔令华(白求恩医科大学 免疫学教研室)；董学斌(白求恩医科大学 免疫学教研室)；杨贵贞(白求恩医科大学 免疫学教研室)
关键词：滋养细胞；单克隆抗体；细胞免疫法
细胞与分子免疫学杂志000125
摘要：目的研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Balb/c小鼠；用细胞ELISA法鉴定mAb的特异性；用补体依赖的溶细胞作用测定mAb的细胞毒性。结果共获得8株分泌抗人滋养细胞mAb的杂交瘤细胞，其中2株mAb具有明显的细胞毒活性。抗滋养细胞mAb主要针对相对分子质量(Mr)为80000和40000的两组滋养细胞表面抗原。免疫性流产患者的血清(含抗滋养细胞抗体)可阻断mAb与滋养细胞膜抗原的反应。结论利用细胞免疫法所获该组mAb所针对的抗原表位，可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。
, 百拇医药
中图号：R392.11 文献标识码：A
文章编号:1007-8738(2000)01-0071-73
Preparation and characterization of monoclonal antibodies to trophocytes
CHEN Jian-fang ,LU Jin, LIU Zhong-hui, KONG Ling-hua, DONG Xue-bin, YANG Gui-zhen
Department of Immunology,Norman Bethune University, Chang chun 130021,Jilin Province,China
Abstract:Aim To prepare monoclonal antibodies(mAbs)to tro-phocytes and analyse their biological properties. Methods Balb /c mice were immunized;specificity and cytotoxicity of the mAbs were determined by cell immunization technigue,cell ELISA and complenment-dependent cytotoxicity(CDC),respectively. The specificity, cytotoxicity and antigen-binding sites of the mAbs were also investigated. Results These mAbs from 8 hybridoma cells had high specificity to trophocytes,two of them had cytotoxicity. They bound mainly to Mr 80 000 and 40 000 molecules of epitopes on trophocytes;The reaction of the mAbs to trophocytic antigen was blocked by the sera from immune abortion patients. Conclusion The antigen-binding sites of the mAbs may be specific membrane antigen site of trophocytes which induce immune abortion.
, 百拇医药
Keywords: trophocyte; monoclonal antibody; cell immunization technique
母体与胎儿之间以胎盘作为天然屏障。胎盘不仅是母体与胎儿间物质交换的场所，也是特殊的免疫调节器官，可维持胎儿在母体内的正常生长发育。胎盘通过绒毛滋养细胞层与母体的血循环直接接触。滋养细胞作为母体淋巴细胞识别和应答的靶细胞，一旦因免疫应答引起损伤，必将导致母体与胎儿间免疫平衡的失调，而导致发生免疫性流产[1，2]。为了纯化和研究诱发免疫性流产的滋养细胞的特异性抗原，我们采用细胞免疫法，制备了抗人绒毛滋养细胞的单克隆抗体(mAb)，并对其免疫生物学特性进行了分析。
1 材料和方法
1.1 材料 胶原酶(350 U/mg)购自美国Sigma公司。IMDM培养基为美国Gibco公司产品。酶标记羊抗鼠IgG购自天象人公司。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 杂交瘤细胞株的建立 取6～8份正常妊娠早期(6～8 wk)人工流产的新鲜绒毛组织，剔除血块及蜕膜组织，用0.01 mol/L pH 7.4 PBS 漂洗数次，剪碎，置于含3 g/L胶原酶的无血清IMDM培养液内，室温振荡消化1 h。除去未消化的组织，细胞悬液经 1000 r/min离心 5 min。弃上清，细胞团块以PBS溶解，计数细胞，调整细胞密度至2×1010/L。取0.2 mL免疫Balb/c小鼠，隔2 wk 再加强免疫1次。于第2次加强免疫后5d，取小鼠脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞按常规方法融合。细胞经HAT培养基选择性培养，以细胞ELISA法，筛选分泌抗滋养细胞mAb的阳性杂交瘤细胞，并以有限稀释法进行克隆化。按上述方法制备单个滋养细胞,调整细胞密度至4×109/L，进行细胞ELISA法。取滋养细胞30 μ L加入酶标板，迅速吹干，用100 mL/L福尔马林固定30 min，10 g/L BSA 封闭，4℃过夜。依次加入杂交瘤细胞培养上清(1∶20稀释)、HRP标记的羊抗鼠IgG及底物液(OPD)显色，于490 nm测定A值。
, 百拇医药
1.2.2 mAb的特性鉴定 ①mAb的特异性鉴定：取经淋巴细胞分层液分离的混合成年人外周血淋巴细胞(4×109/L)，按上述细胞ELISA法的程序进行检测。②mAb的细胞毒性测定：按1.2.1中的方法制备滋养细胞，调整细胞密度至4×109/L，每支试管加入细胞100 μL，再依次加入PBS稀释的mAb(1∶20)、补体各100 μL，37 ℃ 水浴1 h。每管加入50 μL台盼兰，将细胞悬液涂片，于光学显微镜下计数活细胞和死细胞数，按下列公式求出抗滋养细胞mAb的细胞毒百分率(%)。
对照管中只加mAb。③滋养细胞膜抗原的分离取分散的滋养细胞加入5 mL/L NP 40，37 ℃水浴 1 h。依次以1 500 r/min离心 5 min，3 000 r/min离心15 min 及10 000 r/min离心25 min。取上清，真空冻干浓缩，以PBS溶解，再以3 000 r/min离心10 min，除去不溶物。取上清，加至Sephadex G-100凝胶柱中，以0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗脱，收集流出液，分离滋养细胞膜抗原，以A280表达蛋白含量。将蛋白分装置于-20℃冻存备用。层析用标准相对分子质量(Mr)蛋白(Sigma 产品)为γ球蛋白(Mr 140 000)， BSA(Mr 66 000)及卵白蛋白(Mr 45 000)。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 杂交瘤细胞株的建立 采用细胞免疫法，共获得分泌特异性抗滋养细胞mAb的杂交瘤细胞8株，命名为：B10E3，H9D1，A10G6，F7A5，F7D4，A4F9，A4H10和1C1。mAb的Ig亚类均为IgG2,与滋养细胞及可溶性滋养细胞膜抗原呈特异性阳性反应，与混合的成年人外周血淋巴细胞无明显的交叉反应。其中3株(A4F9，A4H10和1C1)杂交瘤细胞培养上清的效价可达1∶640以上。
2.2 mAb的细胞毒作用 ELISA反应阳性的抗滋养细胞mAb，并不一定都具有细胞毒性作用，只有2株(F7D4和A4H10)具有明显的细胞毒作用(表1)。
表1 抗滋养细胞mAb的细胞毒作用
Tab 1 Cytotoxicity of mAbs to trophocytes
, http://www.100md.com
Tube
B10E3
H9D1
A10G6
F7A5
F7D4
A4F9
A4H10
1C1
Test
94
98
96
, http://www.100md.com
92
24
82
17
92
Control
98
96
98
96
98
98
99
94
, http://www.100md.com
Cytotoxicity(%)
4
0
2
4
76
16
83
2
The first two rows in the table represent the counts of alive cells
2.3 滋养细胞膜抗原组分的分析 将Sephadex G-100层析分离的滋养细胞抗原，按Mr的不同分成10个组分。将各组分抗原分别与不同的mAb起反应，所获ELISA检测结果如表2所示。结果表明，mAb针对的滋养细胞膜抗原表位，主要是Mr 80 000和40 000的抗原组分。
, 百拇医药
表2 mAb与滋养细胞膜抗原的结合特性
Tab 2 Binding specificities of mAbs to trophocytic antigen
Antigenic
fraction
(Mr×103)
Reactivities of 8 mAbs to trophocytic antigen
B10E3
H9D1
A10G6
F7A5
, 百拇医药
F7D4
A4F9
A4H10
1C1
>140
-
-
-
-
-
-
-
-
140
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-
-
-
-
-
-
-
-
120
-
-
-
-
-
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-
-
-
100
±
-
±
-
-
-
-
+
80
++
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-
++
-
+
+
-
++
60
+
+
+
+
+
+
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+
+
40
+
++
++
++
++
++
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20
-
+
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+
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±
+
±
10
-
-
-
±
-
-
-
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-
<10
-
-
-
-
-
-
-
-
2.4 免疫性流产患者血清对mAb的阻断作用 采用免疫性流产患者的血清(含有针对滋养细胞特异性抗原表位的多克隆抗体)阻断mAb与滋养细胞膜抗原的反应，所获结果见表3。有4名免疫性流产患者的血清可阻断绝大多株mAb与滋养细胞膜抗原结合的活性，表明mAb所针对的抗原表位即为诱发免疫性流产的抗原。因此，应用混合mAb亲和层析纯化的滋养细胞抗原，有可能用于免疫性流产的特异性诊断。
, 百拇医药
表3 免疫性流产患者血清对mAb的阻断试验
Tab 3 Blocking effect of sera from immune abortion patients on
mAb against trophocytic antigen (A490)
Patient'
sera
(1:30)
mAb (1:20) to trophocytic antigen
B10E3
H9D1
, 百拇医药
A10G6
F7A5
F7D4
A4H10
A4F9
1C1
NO
0.59
0.55
0.60
0.66
0.59
1.00
, 百拇医药
0.85
0.90
S1
0.10
0.16
0.16
0.14
0.15
0.17
0.05
0.22
S2
0.15
, http://www.100md.com
0.15
0.11
0.12
0.07
0.18
0.11
0.12
S3
0.17
0.17
0.25
0.14
0.08
, 百拇医药
0.24
0.20
0.20
S4
0.16
0.09
0.08
0.23
0.33
0.23
0.27
0.22
3 讨 论
, 百拇医药
胎儿对母体来说，是一种半非己同种移植物。胎盘的外层即合体滋养层，是直接与母体循环相接触的部分。免疫组化研究表明，合体滋养层不表达任何HLA和ABO血型抗原，但合体滋养层浆膜上却明显存在着抗原系统[3,4]。其中HLA-G抗原，可能在母体耐受胎儿同种移植物方面起保护作用。滋养层细胞表面除表达HLA-G外，还有多种组织特异性抗原表达。研究有关这些抗原的意义，在于母体接触相应的胚胎细胞抗原后，有可能发生免疫排斥反应，进而引发免疫性流产。目前，已确定的滋养细胞表面组织特异性抗原主要包括：滋养细胞特异性抗原(TA)和滋养细胞-淋巴细胞交叉抗原(TLX)[5,6]。发现TA抗原存在于合体滋养层浆膜上，并已鉴定出多个组织特异性抗原表位，母体可产生针对该抗原系统的免疫应答。Davies研究结果显示，正常孕妇血清中有抗滋养细胞的IgG和IgM，且IgG的水平高于IgM；Mueller 等[6]也鉴定出针对滋养细胞的高度特异性、高亲和力的5种mAb。针对胎儿TA的抗体可能是导致母体流产的主要原因，但对TA抗原的许多特性尚不清楚，尤其是TA抗原与流产的关系。
, 百拇医药
我们采用细胞免疫法免疫Balb/c小鼠，以特异性细胞ELISA法筛选阳性克隆，获得8株分泌特异性抗滋养细胞mAb的杂交瘤细胞。该法较以往采用的混合滋养细胞膜抗原免疫法，制备抗滋养细胞特异性mAb具有较多的优越性[7]：1免疫用细胞容易制备；2可直接获得多株分泌抗滋养细胞特异性mAb的杂交瘤细胞；3所获mAb的效价高。我们所制备的mAb主要针对滋养细胞膜表面Mr 80 000及40 000大小的TA抗原分子。抗滋养细胞mAb的细胞毒性试验结果表明，ELISA反应中呈阳性的mAb并不一定都是细胞毒性的，即针对人滋养细胞表面特异性抗原表位的免疫应答，不一定都能导致细胞损伤。采用已确诊为免疫性流产患者的血清(含有抗滋养细胞的抗体)[8]，可阻断抗滋养细胞mAb的细胞毒性作用，表明这些mAb针对的抗原表位可能与免疫性流产有关。利用本文研制的mAb纯化的滋养细胞膜抗原，有可能在免疫性流产的特异性诊断中具有实用价值。
作者简介：陈建芳，女，29岁，讲师，硕士
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现地址:014010，内蒙古包头医学院寄生虫学教研室 Tel.(0472)5991234
参考文献：
[1] Kajino T,Mclntyre JA,Faulk WP, et al.Antibodies to trophoblast in normal pregnant and secondary aborting women[J]. J Reprod Immunol,1988;14:267- 282.
[2] Torry DS,Mclntyre JA,McConnachie PR.Characterization of immunoglobulin class and subclass responses in secondary aborter sera [J]. J Reprod Immunol,1987;10:33- 42.
, 百拇医药
[3] Murphy SP,Gollnick SO,Pazmany T,et al .Repression of MHC class II gene transcription cells by novel single- stranded DNA binding proteins [J]. Mol Reprod Dev,1997;47:390- 403.
[4] Le BP.Regulation of the expression of HLA class I genes in human trophoblasts[J]. Pathol Biol Paris,1995;43:628- 635.
[5] Kim IC.Isolation and identification of trophoblast lymphocyte cross- reactive(TLX)antigens from human lymphocytes[J]. J Biol Chem,1989;264:9780- 9784.
, 百拇医药
[6] Mueller UW,Hawes CS,Wright AE,et al .Isolation of fetal trophoblast cell from peripheral blood of pregnant women[J]. Lancet,1990;336:197- 200.
[7]柳忠辉，王树和，陈越，等.抗人绒毛滋养细胞单克隆抗体的研制及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志，1996;12(4):59-60.
[8]柳忠辉,卢进,孔令华,等.孕母血中抗胎儿细胞IgG类抗体酶联免疫检测法的建立[J].中华医学检验杂志,1998;21(4):204.
收稿日期：1999-04-13
修稿日期：1999-07-02, 百拇医药
单位：陈建芳(白求恩医科大学 免疫学教研室)；卢进(白求恩医科大学 第三临床医院办公室,吉林长春130021)；柳忠辉(白求恩医科大学 免疫学教研室)；孔令华(白求恩医科大学 免疫学教研室)；董学斌(白求恩医科大学 免疫学教研室)；杨贵贞(白求恩医科大学 免疫学教研室)
关键词：滋养细胞；单克隆抗体；细胞免疫法
细胞与分子免疫学杂志000125
摘要：目的研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Balb/c小鼠；用细胞ELISA法鉴定mAb的特异性；用补体依赖的溶细胞作用测定mAb的细胞毒性。结果共获得8株分泌抗人滋养细胞mAb的杂交瘤细胞，其中2株mAb具有明显的细胞毒活性。抗滋养细胞mAb主要针对相对分子质量(Mr)为80000和40000的两组滋养细胞表面抗原。免疫性流产患者的血清(含抗滋养细胞抗体)可阻断mAb与滋养细胞膜抗原的反应。结论利用细胞免疫法所获该组mAb所针对的抗原表位，可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。
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中图号：R392.11 文献标识码：A
文章编号:1007-8738(2000)01-0071-73
Preparation and characterization of monoclonal antibodies to trophocytes
CHEN Jian-fang ,LU Jin, LIU Zhong-hui, KONG Ling-hua, DONG Xue-bin, YANG Gui-zhen
Department of Immunology,Norman Bethune University, Chang chun 130021,Jilin Province,China
Abstract:Aim To prepare monoclonal antibodies(mAbs)to tro-phocytes and analyse their biological properties. Methods Balb /c mice were immunized;specificity and cytotoxicity of the mAbs were determined by cell immunization technigue,cell ELISA and complenment-dependent cytotoxicity(CDC),respectively. The specificity, cytotoxicity and antigen-binding sites of the mAbs were also investigated. Results These mAbs from 8 hybridoma cells had high specificity to trophocytes,two of them had cytotoxicity. They bound mainly to Mr 80 000 and 40 000 molecules of epitopes on trophocytes;The reaction of the mAbs to trophocytic antigen was blocked by the sera from immune abortion patients. Conclusion The antigen-binding sites of the mAbs may be specific membrane antigen site of trophocytes which induce immune abortion.
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Keywords: trophocyte; monoclonal antibody; cell immunization technique
母体与胎儿之间以胎盘作为天然屏障。胎盘不仅是母体与胎儿间物质交换的场所，也是特殊的免疫调节器官，可维持胎儿在母体内的正常生长发育。胎盘通过绒毛滋养细胞层与母体的血循环直接接触。滋养细胞作为母体淋巴细胞识别和应答的靶细胞，一旦因免疫应答引起损伤，必将导致母体与胎儿间免疫平衡的失调，而导致发生免疫性流产[1，2]。为了纯化和研究诱发免疫性流产的滋养细胞的特异性抗原，我们采用细胞免疫法，制备了抗人绒毛滋养细胞的单克隆抗体(mAb)，并对其免疫生物学特性进行了分析。
1 材料和方法
1.1 材料 胶原酶(350 U/mg)购自美国Sigma公司。IMDM培养基为美国Gibco公司产品。酶标记羊抗鼠IgG购自天象人公司。
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1.2 方法
1.2.1 杂交瘤细胞株的建立 取6～8份正常妊娠早期(6～8 wk)人工流产的新鲜绒毛组织，剔除血块及蜕膜组织，用0.01 mol/L pH 7.4 PBS 漂洗数次，剪碎，置于含3 g/L胶原酶的无血清IMDM培养液内，室温振荡消化1 h。除去未消化的组织，细胞悬液经 1000 r/min离心 5 min。弃上清，细胞团块以PBS溶解，计数细胞，调整细胞密度至2×1010/L。取0.2 mL免疫Balb/c小鼠，隔2 wk 再加强免疫1次。于第2次加强免疫后5d，取小鼠脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞按常规方法融合。细胞经HAT培养基选择性培养，以细胞ELISA法，筛选分泌抗滋养细胞mAb的阳性杂交瘤细胞，并以有限稀释法进行克隆化。按上述方法制备单个滋养细胞,调整细胞密度至4×109/L，进行细胞ELISA法。取滋养细胞30 μ L加入酶标板，迅速吹干，用100 mL/L福尔马林固定30 min，10 g/L BSA 封闭，4℃过夜。依次加入杂交瘤细胞培养上清(1∶20稀释)、HRP标记的羊抗鼠IgG及底物液(OPD)显色，于490 nm测定A值。
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1.2.2 mAb的特性鉴定 ①mAb的特异性鉴定：取经淋巴细胞分层液分离的混合成年人外周血淋巴细胞(4×109/L)，按上述细胞ELISA法的程序进行检测。②mAb的细胞毒性测定：按1.2.1中的方法制备滋养细胞，调整细胞密度至4×109/L，每支试管加入细胞100 μL，再依次加入PBS稀释的mAb(1∶20)、补体各100 μL，37 ℃ 水浴1 h。每管加入50 μL台盼兰，将细胞悬液涂片，于光学显微镜下计数活细胞和死细胞数，按下列公式求出抗滋养细胞mAb的细胞毒百分率(%)。
对照管中只加mAb。③滋养细胞膜抗原的分离取分散的滋养细胞加入5 mL/L NP 40，37 ℃水浴 1 h。依次以1 500 r/min离心 5 min，3 000 r/min离心15 min 及10 000 r/min离心25 min。取上清，真空冻干浓缩，以PBS溶解，再以3 000 r/min离心10 min，除去不溶物。取上清，加至Sephadex G-100凝胶柱中，以0.01 mol/L pH 7.4 PBS洗脱，收集流出液，分离滋养细胞膜抗原，以A280表达蛋白含量。将蛋白分装置于-20℃冻存备用。层析用标准相对分子质量(Mr)蛋白(Sigma 产品)为γ球蛋白(Mr 140 000)， BSA(Mr 66 000)及卵白蛋白(Mr 45 000)。
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2 结 果
2.1 杂交瘤细胞株的建立 采用细胞免疫法，共获得分泌特异性抗滋养细胞mAb的杂交瘤细胞8株，命名为：B10E3，H9D1，A10G6，F7A5，F7D4，A4F9，A4H10和1C1。mAb的Ig亚类均为IgG2,与滋养细胞及可溶性滋养细胞膜抗原呈特异性阳性反应，与混合的成年人外周血淋巴细胞无明显的交叉反应。其中3株(A4F9，A4H10和1C1)杂交瘤细胞培养上清的效价可达1∶640以上。
2.2 mAb的细胞毒作用 ELISA反应阳性的抗滋养细胞mAb，并不一定都具有细胞毒性作用，只有2株(F7D4和A4H10)具有明显的细胞毒作用(表1)。
表1 抗滋养细胞mAb的细胞毒作用
Tab 1 Cytotoxicity of mAbs to trophocytes
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Tube
B10E3
H9D1
A10G6
F7A5
F7D4
A4F9
A4H10
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Test
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Control
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Cytotoxicity(%)
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The first two rows in the table represent the counts of alive cells
2.3 滋养细胞膜抗原组分的分析 将Sephadex G-100层析分离的滋养细胞抗原，按Mr的不同分成10个组分。将各组分抗原分别与不同的mAb起反应，所获ELISA检测结果如表2所示。结果表明，mAb针对的滋养细胞膜抗原表位，主要是Mr 80 000和40 000的抗原组分。
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表2 mAb与滋养细胞膜抗原的结合特性
Tab 2 Binding specificities of mAbs to trophocytic antigen
Antigenic
fraction
(Mr×103)
Reactivities of 8 mAbs to trophocytic antigen
B10E3
H9D1
A10G6
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2.4 免疫性流产患者血清对mAb的阻断作用 采用免疫性流产患者的血清(含有针对滋养细胞特异性抗原表位的多克隆抗体)阻断mAb与滋养细胞膜抗原的反应，所获结果见表3。有4名免疫性流产患者的血清可阻断绝大多株mAb与滋养细胞膜抗原结合的活性，表明mAb所针对的抗原表位即为诱发免疫性流产的抗原。因此，应用混合mAb亲和层析纯化的滋养细胞抗原，有可能用于免疫性流产的特异性诊断。
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表3 免疫性流产患者血清对mAb的阻断试验
Tab 3 Blocking effect of sera from immune abortion patients on
mAb against trophocytic antigen (A490)
Patient'
sera
(1:30)
mAb (1:20) to trophocytic antigen
B10E3
H9D1
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A10G6
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0.85
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S1
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0.17
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S2
0.15
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, 百拇医药
0.24
0.20
0.20
S4
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0.08
0.23
0.33
0.23
0.27
0.22
3 讨 论
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胎儿对母体来说，是一种半非己同种移植物。胎盘的外层即合体滋养层，是直接与母体循环相接触的部分。免疫组化研究表明，合体滋养层不表达任何HLA和ABO血型抗原，但合体滋养层浆膜上却明显存在着抗原系统[3,4]。其中HLA-G抗原，可能在母体耐受胎儿同种移植物方面起保护作用。滋养层细胞表面除表达HLA-G外，还有多种组织特异性抗原表达。研究有关这些抗原的意义，在于母体接触相应的胚胎细胞抗原后，有可能发生免疫排斥反应，进而引发免疫性流产。目前，已确定的滋养细胞表面组织特异性抗原主要包括：滋养细胞特异性抗原(TA)和滋养细胞-淋巴细胞交叉抗原(TLX)[5,6]。发现TA抗原存在于合体滋养层浆膜上，并已鉴定出多个组织特异性抗原表位，母体可产生针对该抗原系统的免疫应答。Davies研究结果显示，正常孕妇血清中有抗滋养细胞的IgG和IgM，且IgG的水平高于IgM；Mueller 等[6]也鉴定出针对滋养细胞的高度特异性、高亲和力的5种mAb。针对胎儿TA的抗体可能是导致母体流产的主要原因，但对TA抗原的许多特性尚不清楚，尤其是TA抗原与流产的关系。
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我们采用细胞免疫法免疫Balb/c小鼠，以特异性细胞ELISA法筛选阳性克隆，获得8株分泌特异性抗滋养细胞mAb的杂交瘤细胞。该法较以往采用的混合滋养细胞膜抗原免疫法，制备抗滋养细胞特异性mAb具有较多的优越性[7]：1免疫用细胞容易制备；2可直接获得多株分泌抗滋养细胞特异性mAb的杂交瘤细胞；3所获mAb的效价高。我们所制备的mAb主要针对滋养细胞膜表面Mr 80 000及40 000大小的TA抗原分子。抗滋养细胞mAb的细胞毒性试验结果表明，ELISA反应中呈阳性的mAb并不一定都是细胞毒性的，即针对人滋养细胞表面特异性抗原表位的免疫应答，不一定都能导致细胞损伤。采用已确诊为免疫性流产患者的血清(含有抗滋养细胞的抗体)[8]，可阻断抗滋养细胞mAb的细胞毒性作用，表明这些mAb针对的抗原表位可能与免疫性流产有关。利用本文研制的mAb纯化的滋养细胞膜抗原，有可能在免疫性流产的特异性诊断中具有实用价值。
作者简介：陈建芳，女，29岁，讲师，硕士
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现地址:014010，内蒙古包头医学院寄生虫学教研室 Tel.(0472)5991234
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收稿日期：1999-04-13
修稿日期：1999-07-02, 百拇医药