紫外分光光度法测定甲氨蝶呤明胶微球的含量
作者：丁红 徐美丽 杨春荣 李玉风
单位：丁红(山西医科大学药学院药剂教研室 太原 030001)；徐美丽(太原市教育学院)；杨春荣(山西医科大学药学院药剂教研室 太原 030001)；李玉风(山西医科大学药学院99届毕业生)
关键词：分光光度法，紫外线；甲氨蝶呤；明胶微球；药物监测
山西医科大学学报000213
摘要： 采用紫外分光光度法测定明胶微球中甲氨蝶呤的含量。当波长为303 nm时，甲氨蝶呤浓度在3～18 mg/L范围内其吸收度与浓度呈良好线性关系，回归方程为A=0.052 C-0.010(r=0.999 8,n=6)。测定两种不同批号微球的药物含量，平均回收率分别为99.08%和101.32%，相对标准偏差RSD分别为0.40%和0.26%，总平均回收率为100.2%(n=3,RSD=0.48%)。该方法简便、快速、准确，并具有良好的重现性。
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中图分类号： R927.2 文献标识码： A
文章编号：1007-6611(2000)02-0127-02
Content of methotrexate in gelatin microspheres by ultraviolet spectrophotometry determination
Ding Hong, Xu Meili,Yang Chunrong,et al
(Pharmacy College,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001)
Abstract： The content of methotrexate in gelatin microspheres was measured at 303 nm by ultraviolet spectrophotometry,and it was good linear in the range of 3～18 mg/L.The regression equation was A＝0.052 C-0.010(r=0.999 8，n=6).The average recovery and relative standard deviation were 99.08%(101.32%) and 0.40%(0.26%)，respectively.The total average recovery was 100.2%(RSD=0.48%).This method is simple,easily done,rapid，accurate and good reproducible.
, 百拇医药
Key words：spectrophotometry,ultraviolet; methotrexate; gelatin microsphere; drug monitorings
甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)是抗叶酸类抗肿瘤药，橙黄色结晶性粉末，主要成分为L-(+)-N-〔对(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基〕甲氨基〕苯谷氨酸。临床上用于各类型急性白血病、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌、乳腺癌、肺癌、头颈癌、睾丸癌等。但其毒副作用较大，尤对肝、肾损害，骨髓抑制，肠道反应较严重[1]。为提高MTX的抗癌疗效，降低其毒副作用，作者进行了甲氨蝶呤明胶微球的研究。这种新的药物剂型可通过选择性动脉插管，将含药微球输入靶位，以阻断肿瘤的供血并缓慢放释药物[2]。为了优化微球的制备工艺条件，稳定微球质量，本文探讨了用紫外分光光度法测定微球中MTX的载药量和包封率，结果可靠，且重现性好。
1 仪器与试药
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UV-260型紫外分光光度计(日本岛津)； 精密分析天平(上海天平仪器厂)；HY-Z调速多用振荡器(江苏中大仪器厂)；甲氨蝶呤对照品(江苏连云港制药厂)；甲氨蝶呤明胶微球(自制)；明胶(天津市化学试剂三厂)；磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 紫外吸收光谱 精密称取甲氨蝶呤适量，用磷酸盐缓冲液(pH=7.4，按药典方法配制)[3]，配成浓度分别是9 mg/L和15 mg/L的溶液。另取处方量的明胶，加磷酸盐缓冲液(pH 7.4)制成溶液。将上述两类溶液，以磷酸盐缓冲液作空白，分别于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，结果见图1。由图1可知，甲氨蝶呤在303 nm和258 nm处有最大吸收，与文献报道一致。磷酸盐缓冲液和明胶在此波长处无吸收。由于MTX在303 nm波长处吸收较强，故确定303 nm为测定波长。
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图1 紫外吸收光谱图
2.2 标准曲线的绘制 精密称取105 ℃干燥至恒重的甲氨蝶呤对照品适量，用磷酸盐缓冲液(pH 7.4)溶解并定容，制成0.15 g/L的溶液，精密量取此溶液2，4，6，8，10和12 ml，分别置100 ml量瓶中，用上述缓冲液稀释至刻度，摇匀，在303 nm波长处测定其吸收度(A)，绘制标准曲线并求出回归方程：
A＝0.052C-0.010， r=0.999 8 (n=6)
结果表明甲氨蝶呤浓度在3.0～18.0 mg/L范围内，吸收度与浓度呈良好的线性关系。
2.3 稳定性实验 将上述系列溶液分别取3.0 mg/L、9.0 mg/L、15 mg/L 3种浓度者于室温下放置1，2，3，6，12 h，测得的吸收值几乎无变化，说明12 h内稳定。
, 百拇医药
2.4 回收率的测定 精密称取105 ℃恒重的甲氨蝶呤对照品2.9 mg和5.8 mg，分别置50 ml量瓶中，照制备MTX明胶微球的投料比加入明胶微球，用磷酸盐缓冲液(pH 7.4)定容，在37 ℃下置振荡器上消化24 h。待明胶微球消化完全后，将消化液于离心管中离心，取上清液1 ml，置10 ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH 7.4)定容。以磷酸 盐缓冲液为空白，在303 nm波长处测定吸收值，计算回收率。当甲氨蝶呤对照品加入量为2.9 mg或5.8 mg时，平均回收率分别为99.08%(RSD=0.40%，n=3)和101.32%(RSD=0.26%，n=3)，总平均回收率为100.2%(RSD=0.48%)，见表1。
表1 回收率测定结果 (n=3) 所加MTX
(mg)
测得MTX
(mg)
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回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
2.9
2.88
99.31
2.9
2.86
98.62
99.08
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0.40
2.9
2.88
99.31
5.8
5.86
101.03
5.8
5.88
101.37
101.32
0.26
5.8
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5.89
101.55
2.5 样品的含量测定 精密量取3批不同投药量的干燥恒重的MTX微球适量，分别置50 ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH 7.4)定容，照回收率测定项下的方法测定其吸收度，按标准曲线回归方程计算，结果见表2。
表2 MTX明胶微球的含量测定 (n=3) 批号
MTX微球量
(mg)
测得载药量
(mg/g)
药物包封率
(%)
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1
15
25.8
85.9
2
15
36.9
90.2
3
15
41.4
76.3
注：微球的载药量=微球中的药物重量/微球重量；药物的包封率(%)=〔包入微球的药物量/投入的药物总量〕×100%[4]
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3 讨论
甲氨蝶呤系列浓度的溶液(以pH=7.4的磷酸盐缓冲液为溶剂)于室温下曾延续放置24 h，甚至30 h，测定其吸收度值，几乎无变化。说明MTX溶液在此条件下稳定。用紫外分光光度法测定明胶微球中的MTX含量，操作快捷，方法可靠，结果重现性好。
山西省科委资助项目(962113)
作者简介：丁红，女，1949年12月生，本科，副教授
参考文献：
[1] 何凤梅.常用药与新药600种[M].北京：化学工业出版社，1993，507.
[2] 陈庆华.肝动脉栓塞微球的动物体内行为和药效学研究[J].中国医药工业杂志，1990，21(10)：472.
[3] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典.二部[M]，广州：广东科技出版社，1995.附录177.
[4] 廖工铁.靶向给药制剂[M].成都：四川科学技术出版社，1997.14.
收稿日期：1999-11-17, 百拇医药
单位：丁红(山西医科大学药学院药剂教研室 太原 030001)；徐美丽(太原市教育学院)；杨春荣(山西医科大学药学院药剂教研室 太原 030001)；李玉风(山西医科大学药学院99届毕业生)
关键词：分光光度法，紫外线；甲氨蝶呤；明胶微球；药物监测
山西医科大学学报000213
摘要： 采用紫外分光光度法测定明胶微球中甲氨蝶呤的含量。当波长为303 nm时，甲氨蝶呤浓度在3～18 mg/L范围内其吸收度与浓度呈良好线性关系，回归方程为A=0.052 C-0.010(r=0.999 8,n=6)。测定两种不同批号微球的药物含量，平均回收率分别为99.08%和101.32%，相对标准偏差RSD分别为0.40%和0.26%，总平均回收率为100.2%(n=3,RSD=0.48%)。该方法简便、快速、准确，并具有良好的重现性。
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中图分类号： R927.2 文献标识码： A
文章编号：1007-6611(2000)02-0127-02
Content of methotrexate in gelatin microspheres by ultraviolet spectrophotometry determination
Ding Hong, Xu Meili,Yang Chunrong,et al
(Pharmacy College,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001)
Abstract： The content of methotrexate in gelatin microspheres was measured at 303 nm by ultraviolet spectrophotometry,and it was good linear in the range of 3～18 mg/L.The regression equation was A＝0.052 C-0.010(r=0.999 8，n=6).The average recovery and relative standard deviation were 99.08%(101.32%) and 0.40%(0.26%)，respectively.The total average recovery was 100.2%(RSD=0.48%).This method is simple,easily done,rapid，accurate and good reproducible.
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Key words：spectrophotometry,ultraviolet; methotrexate; gelatin microsphere; drug monitorings
甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)是抗叶酸类抗肿瘤药，橙黄色结晶性粉末，主要成分为L-(+)-N-〔对(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基〕甲氨基〕苯谷氨酸。临床上用于各类型急性白血病、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌、乳腺癌、肺癌、头颈癌、睾丸癌等。但其毒副作用较大，尤对肝、肾损害，骨髓抑制，肠道反应较严重[1]。为提高MTX的抗癌疗效，降低其毒副作用，作者进行了甲氨蝶呤明胶微球的研究。这种新的药物剂型可通过选择性动脉插管，将含药微球输入靶位，以阻断肿瘤的供血并缓慢放释药物[2]。为了优化微球的制备工艺条件，稳定微球质量，本文探讨了用紫外分光光度法测定微球中MTX的载药量和包封率，结果可靠，且重现性好。
1 仪器与试药
, http://www.100md.com
UV-260型紫外分光光度计(日本岛津)； 精密分析天平(上海天平仪器厂)；HY-Z调速多用振荡器(江苏中大仪器厂)；甲氨蝶呤对照品(江苏连云港制药厂)；甲氨蝶呤明胶微球(自制)；明胶(天津市化学试剂三厂)；磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 紫外吸收光谱 精密称取甲氨蝶呤适量，用磷酸盐缓冲液(pH=7.4，按药典方法配制)[3]，配成浓度分别是9 mg/L和15 mg/L的溶液。另取处方量的明胶，加磷酸盐缓冲液(pH 7.4)制成溶液。将上述两类溶液，以磷酸盐缓冲液作空白，分别于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，结果见图1。由图1可知，甲氨蝶呤在303 nm和258 nm处有最大吸收，与文献报道一致。磷酸盐缓冲液和明胶在此波长处无吸收。由于MTX在303 nm波长处吸收较强，故确定303 nm为测定波长。
, 百拇医药
图1 紫外吸收光谱图
2.2 标准曲线的绘制 精密称取105 ℃干燥至恒重的甲氨蝶呤对照品适量，用磷酸盐缓冲液(pH 7.4)溶解并定容，制成0.15 g/L的溶液，精密量取此溶液2，4，6，8，10和12 ml，分别置100 ml量瓶中，用上述缓冲液稀释至刻度，摇匀，在303 nm波长处测定其吸收度(A)，绘制标准曲线并求出回归方程：
A＝0.052C-0.010， r=0.999 8 (n=6)
结果表明甲氨蝶呤浓度在3.0～18.0 mg/L范围内，吸收度与浓度呈良好的线性关系。
2.3 稳定性实验 将上述系列溶液分别取3.0 mg/L、9.0 mg/L、15 mg/L 3种浓度者于室温下放置1，2，3，6，12 h，测得的吸收值几乎无变化，说明12 h内稳定。
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2.4 回收率的测定 精密称取105 ℃恒重的甲氨蝶呤对照品2.9 mg和5.8 mg，分别置50 ml量瓶中，照制备MTX明胶微球的投料比加入明胶微球，用磷酸盐缓冲液(pH 7.4)定容，在37 ℃下置振荡器上消化24 h。待明胶微球消化完全后，将消化液于离心管中离心，取上清液1 ml，置10 ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH 7.4)定容。以磷酸 盐缓冲液为空白，在303 nm波长处测定吸收值，计算回收率。当甲氨蝶呤对照品加入量为2.9 mg或5.8 mg时，平均回收率分别为99.08%(RSD=0.40%，n=3)和101.32%(RSD=0.26%，n=3)，总平均回收率为100.2%(RSD=0.48%)，见表1。
表1 回收率测定结果 (n=3) 所加MTX
(mg)
测得MTX
(mg)
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回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
2.9
2.88
99.31
2.9
2.86
98.62
99.08
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0.40
2.9
2.88
99.31
5.8
5.86
101.03
5.8
5.88
101.37
101.32
0.26
5.8
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5.89
101.55
2.5 样品的含量测定 精密量取3批不同投药量的干燥恒重的MTX微球适量，分别置50 ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH 7.4)定容，照回收率测定项下的方法测定其吸收度，按标准曲线回归方程计算，结果见表2。
表2 MTX明胶微球的含量测定 (n=3) 批号
MTX微球量
(mg)
测得载药量
(mg/g)
药物包封率
(%)
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1
15
25.8
85.9
2
15
36.9
90.2
3
15
41.4
76.3
注：微球的载药量=微球中的药物重量/微球重量；药物的包封率(%)=〔包入微球的药物量/投入的药物总量〕×100%[4]
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3 讨论
甲氨蝶呤系列浓度的溶液(以pH=7.4的磷酸盐缓冲液为溶剂)于室温下曾延续放置24 h，甚至30 h，测定其吸收度值，几乎无变化。说明MTX溶液在此条件下稳定。用紫外分光光度法测定明胶微球中的MTX含量，操作快捷，方法可靠，结果重现性好。
山西省科委资助项目(962113)
作者简介：丁红，女，1949年12月生，本科，副教授
参考文献：
[1] 何凤梅.常用药与新药600种[M].北京：化学工业出版社，1993，507.
[2] 陈庆华.肝动脉栓塞微球的动物体内行为和药效学研究[J].中国医药工业杂志，1990，21(10)：472.
[3] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典.二部[M]，广州：广东科技出版社，1995.附录177.
[4] 廖工铁.靶向给药制剂[M].成都：四川科学技术出版社，1997.14.
收稿日期：1999-11-17, 百拇医药