152例支气管肺泡灌洗液结核菌PCR检测分析
作者：孙玉芬
单位：孙玉芬(广东省江门市人民医院呼吸内科 529051)
关键词：纤维支气管镜；结核菌；PCR检测
中国内镜杂志000223
目的：利用支气管肺泡灌洗液进行结核菌PCR检测，探讨PCR检测法对肺结核的诊断价值。方法：将肺结核病63例和非结核性肺疾病89例通过纤支镜进行支气管肺泡灌洗，收集灌洗液进行结核菌PCR检测，对其结果作对比分析。结果：63例肺结核PCR阳性者41例，阳性率65.1%；89例非结核性肺疾病PCR阳性者6例，阳性率6.7%。两组有显著差异(P<0.001)。结论：支气管肺泡灌洗液结核菌PCR检测，特异性强，确诊率高于常规检查方法，对于临床不典型的肺结核有更高诊断价值。
分类号 R768.1
, 百拇医药
1996年1月～1998年4月，152例肺结核和非肺结核性肺疾病患者经纤维支气管镜(纤支镜)收集支气管肺泡灌洗液进行结核菌PCR检测，对其结果及诊断价值作对比分析。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本组152例，男107例，女45例。年龄21～86岁，平均54岁。肺结核病组63例，非结核病性肺疾病89例，其中肺癌40例、肺炎17例、支气管扩张和慢性支气管炎32例。
1.2 方法
1.3.1 纤支镜检查前，按常规进行有关全身检查，术前半小时肌注安定和阿托品，用4%利多卡因雾化吸入麻醉15min。使用Olympus P20型纤支镜经鼻插入，逐支进行检查，在有病变的支气管内注入生理盐水，每次10～20ml，共3～5次，总量不超过100ml，然后负压吸引，将灌洗液回收到一次性标本采集瓶内。如支气管内未见病变，则根据X线检查选择相应有病灶的肺段进行灌洗，收集灌洗液。
, 百拇医药
1.3.2 PCR检测。试剂盒购自华美公司和中山医科大学基因诊断中心。PCR扩增仪为北京新技术应用研究所生产的1109型微电脑自动基因扩增仪。取支气管肺泡灌洗液1ml，15!000r/min离心5min，去掉上清液，将沉淀物直接加入DNA提取物50μl打匀，置100℃沸水浴10min，15!000r/min离心5min，取上清液2μl做PCR反应，按下列条件扩增：93℃45s→55℃45s→72℃1min，共作35个循环，最后置72℃保温5min。然后取扩增物10μl，经2%琼脂糖凝胶电泳20～30min后，在紫外仪上观察，若在227bp处出现橙黄色条带则为阳性。
2 结果
结核病组PCR阳性41例，阳性率65.1%；非结核病性肺疾病组PCR阳性6例，阳性率6.7%，其中肺癌3例、肺炎1例、支气管扩张2例。经统计，两组差异显著(P<0.001)。
3 讨论
, http://www.100md.com
应用PCR反应检测结核杆菌具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点，在结核病的病原诊断中应用日益广泛，对痰液、胸腹水、脑脊液及尿的PCR检测均有临床报告，其阳性率高于涂片和培养。本文肺结核病组63例，经手术或纤支镜活检、刷检确诊共17例，占27.0%，痰涂片检查全部阴性，而支气管肺泡灌洗液结核杆菌PCR检测阳性率达65.1%，明显高于前几种方法。支气管肺泡灌洗液直接取材于病变部位，通过纤支镜负压吸出，准确性高，避免了其它菌的污染。因此，对肺部可疑结核病，而痰菌检查又是阴性的病人，可采用支气管肺泡灌洗液结核杆菌PCR检测，以提高确诊率。
本组非结核病性肺疾病病例中有6例PCR检测阳性，出现假阳性可能是由于污染或潜伏感染了结核杆菌；肺癌病例假阳性则可能癌症的免疫抑制而感染了结核杆菌。
肺结核组中PCR检测阴性23例，占34.9%，分析假阴性的原因有：灌洗的肺段定位不准确、标本量少、增殖性肺结核无结核菌活动等。对于临床可疑病例，首次结核杆菌PCR检测阴性者，可重复检测。
(1999-07-03收稿), http://www.100md.com
单位：孙玉芬(广东省江门市人民医院呼吸内科 529051)
关键词：纤维支气管镜；结核菌；PCR检测
中国内镜杂志000223
目的：利用支气管肺泡灌洗液进行结核菌PCR检测，探讨PCR检测法对肺结核的诊断价值。方法：将肺结核病63例和非结核性肺疾病89例通过纤支镜进行支气管肺泡灌洗，收集灌洗液进行结核菌PCR检测，对其结果作对比分析。结果：63例肺结核PCR阳性者41例，阳性率65.1%；89例非结核性肺疾病PCR阳性者6例，阳性率6.7%。两组有显著差异(P<0.001)。结论：支气管肺泡灌洗液结核菌PCR检测，特异性强，确诊率高于常规检查方法，对于临床不典型的肺结核有更高诊断价值。
分类号 R768.1
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1996年1月～1998年4月，152例肺结核和非肺结核性肺疾病患者经纤维支气管镜(纤支镜)收集支气管肺泡灌洗液进行结核菌PCR检测，对其结果及诊断价值作对比分析。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本组152例，男107例，女45例。年龄21～86岁，平均54岁。肺结核病组63例，非结核病性肺疾病89例，其中肺癌40例、肺炎17例、支气管扩张和慢性支气管炎32例。
1.2 方法
1.3.1 纤支镜检查前，按常规进行有关全身检查，术前半小时肌注安定和阿托品，用4%利多卡因雾化吸入麻醉15min。使用Olympus P20型纤支镜经鼻插入，逐支进行检查，在有病变的支气管内注入生理盐水，每次10～20ml，共3～5次，总量不超过100ml，然后负压吸引，将灌洗液回收到一次性标本采集瓶内。如支气管内未见病变，则根据X线检查选择相应有病灶的肺段进行灌洗，收集灌洗液。
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1.3.2 PCR检测。试剂盒购自华美公司和中山医科大学基因诊断中心。PCR扩增仪为北京新技术应用研究所生产的1109型微电脑自动基因扩增仪。取支气管肺泡灌洗液1ml，15!000r/min离心5min，去掉上清液，将沉淀物直接加入DNA提取物50μl打匀，置100℃沸水浴10min，15!000r/min离心5min，取上清液2μl做PCR反应，按下列条件扩增：93℃45s→55℃45s→72℃1min，共作35个循环，最后置72℃保温5min。然后取扩增物10μl，经2%琼脂糖凝胶电泳20～30min后，在紫外仪上观察，若在227bp处出现橙黄色条带则为阳性。
2 结果
结核病组PCR阳性41例，阳性率65.1%；非结核病性肺疾病组PCR阳性6例，阳性率6.7%，其中肺癌3例、肺炎1例、支气管扩张2例。经统计，两组差异显著(P<0.001)。
3 讨论
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应用PCR反应检测结核杆菌具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点，在结核病的病原诊断中应用日益广泛，对痰液、胸腹水、脑脊液及尿的PCR检测均有临床报告，其阳性率高于涂片和培养。本文肺结核病组63例，经手术或纤支镜活检、刷检确诊共17例，占27.0%，痰涂片检查全部阴性，而支气管肺泡灌洗液结核杆菌PCR检测阳性率达65.1%，明显高于前几种方法。支气管肺泡灌洗液直接取材于病变部位，通过纤支镜负压吸出，准确性高，避免了其它菌的污染。因此，对肺部可疑结核病，而痰菌检查又是阴性的病人，可采用支气管肺泡灌洗液结核杆菌PCR检测，以提高确诊率。
本组非结核病性肺疾病病例中有6例PCR检测阳性，出现假阳性可能是由于污染或潜伏感染了结核杆菌；肺癌病例假阳性则可能癌症的免疫抑制而感染了结核杆菌。
肺结核组中PCR检测阴性23例，占34.9%，分析假阴性的原因有：灌洗的肺段定位不准确、标本量少、增殖性肺结核无结核菌活动等。对于临床可疑病例，首次结核杆菌PCR检测阴性者，可重复检测。
(1999-07-03收稿), http://www.100md.com