Bcl－2在膀胱肿瘤中的表达及临床意义
作者：王养民 王荣霞 哈英娣 张绍增 邢传平 张淑萍
单位：王养民(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；王荣霞(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；哈英娣(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；张绍增(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
关键词：膀胱肿瘤；Bcl-2；表达
西北国防医学杂志000210 摘要：目的：探讨bcl-2蛋白在人膀胱癌中表达的临床意义。方法：取57例经病理证实的膀胱肿瘤标本，应用免疫组化技术检测石蜡包埋在组织切片中bcl-2的表达。结果：正常膀胱粘膜组织bcl-2蛋白呈阴性。膀胱移行细胞癌Ⅰ级15例，阳性率13.3%；Ⅱ级16例，阳性率6.2%；Ⅲ级18例，阳性率50.0%。膀胱横纹肌肉瘤阳性1例，葡萄状肉瘤阳性1例，内胚窦瘤阳性1例。结论：凋亡抑制基因bcl-2蛋白在人膀胱不同细胞类型的肿瘤中有表达，在移行细胞中的表达与临床病理分级有一定的相关关系。探讨bcl-2蛋白在人膀胱癌中表达的临床意义。方法：取57例经病理证实的膀胱肿瘤标本，应用免疫组化技术检测石蜡包埋在组织切片中bcl-2的表达。结果：正常膀胱粘膜组织bcl-2蛋白呈阴性。膀胱移行细胞癌Ⅰ级15例，阳性率13.3%；Ⅱ级16例，阳性率6.2%；Ⅲ级18例，阳性率50.0%。膀胱横纹肌肉瘤阳性1例，葡萄状肉瘤阳性1例，内胚窦瘤阳性1例。结论：凋亡抑制基因bcl-2蛋白在人膀胱不同细胞类型的肿瘤中有表达，在移行细胞中的表达与临床病理分级有一定的相关关系。
, 百拇医药
中图分类号：R 737.14 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(2000)02-0107-02
Bcl-2 expression in human bladder tumors
WANG Yang-min,WANG Rong-xia,HA Ying-di,et al.(Department of Urology,Lanzhou General Hospital,Lanzhou Command,PLA,730050)
Abstract:Objective:To investigate the clinical significance of bcl-2 protein expression in human bladder tumors.Methods:Bcl-2 protein expression was investigated by immunocytoc hemistry from paraffin-embedded tissues from 57 patients with bladder tumor.Results:Normal bladder mucosa showed no immunoreactivity for bcl-2.Bcl-2 positive expression appeared in 49 transitional cell cacinomas(TCC),l rhabdomy-osarcoma,1 botryoid sarcoma and 1 endodermal sinus tumor,The positive expression rates in grade Ⅰ、Ⅱand Ⅲof TCC were 13.3%,6.2% and 50.0% respectively.Conclusion:Bcl-2 expression can be detected in TCC and other tumors of bladder.It might be related to the tumor grade of TCC.
, 百拇医药
Key words：Bladder neoplasms; Bcl-2; Expression
近来年，bcl-2表达与肿瘤的恶性关系越来越受到重视，已发现它与肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等有关。bcl-2是一种调节细胞凋亡的基因，可抑制细胞凋亡。作者应用免疫组化技术对57例膀胱肿瘤组织中bcl-2蛋白进行检测，以探讨bcl-2蛋白表达的临床意义。
1 材料与方法
1.1 临床病理资料：57例膀胱瘤标本取自我院经手术切除的肿瘤标本。年龄2～87岁；男性47例，女性10例。移行细胞瘤49例，横纹肌肉瘤3例，腺癌、葡萄状肉瘤、内胚窦瘤、脂母细胞瘤、内翻乳头瘤各1例。经福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，病理证实。移行细胞瘤病理分级(按WHO分级标准)：Ⅰ级15例，Ⅱ级16例，Ⅲ级18例。另取正常膀胱粘膜组织作为对照。
, 百拇医药 1.2 试剂及方法
1.2.1 试剂：一抗鼠抗人bcl-2蛋白单克隆抗体，二抗为生物素标记的兔抗鼠IgG，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶及DAB显色试剂均购自迈新公司。
1.2.2 方法：石蜡切片常规脱蜡，逐级水化，PBS液中微波炉煮沸15 min，0.3%H2O2阻断内源性过氧化酶10 min，小牛血清封闭10 min。用SP法检测，新鲜配制的DAB溶液显色[1]。苏木素复染，逐渐脱水、透明、封片，光镜下观察。以迈新公司提供的阳性对照片为阳性对照，用PBS替代一抗作为阴性对照。
1.2.3 统计学处理：采用卡方检验进行统计学分析。
2 结果
bcl-2蛋白染色大多数位于肿瘤细胞浆内及细胞核周围，呈棕黄色，甚至可见细小颗粒。结果判断：无棕黄色为(-)，阳性细胞数<10%为(+)，11%～50%阳性细胞为()，>50%阳性细胞()。
, 百拇医药
在正常膀胱粘膜中bcl-2蛋白表达为阴性。移行细胞癌Ⅰ级15例，阳性2例，占13.3%；(+)1例，()1例；Ⅱ级16例，阳性(+)1例占6.2%；Ⅲ级18例，阳性9例占50%，(+)7例，()2例。膀胱横纹肌肉瘤3例中有1例阳性，葡萄状肉瘤1例阳性，内胚窦瘤1例阳性。腺癌、脂母细胞瘤，内翻乳头瘤均为阴性。经统计学分析，Ⅰ、Ⅱ级移行细胞癌两组之间bcl-2阳性率无显著性差异(P>0.05)，而Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ级移行细胞癌bcl-2阳性率有显著性差异(P<0.01)。其它细胞类型的肿瘤因例数少未做统计学分析。
3 讨论
bcl-2蛋白的异常表达在许多人类癌组织中被发现，其表达与癌组织的恶性程度有相关关系[2，4]。本研究检测显示：正常膀胱粘膜组织中未见bcl-2蛋白表达，结果与文献报道一致。检测膀胱肿瘤的bcl-2蛋白表达发现：移行细胞癌分级与bcl-2蛋白的表达有一定的关联。Ⅰ、Ⅱ级移行细胞癌阳性率较低，分别为13.3%和6.2%，但Ⅲ级的阳性率明显升高占50.0%。习小庆等[2]报告的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌的阳性率分别为18.8%、52.0%和60.0%，高于本组所检出的阳性率。可能与试剂、操作方法各异有关。在膀胱横纹肌肉瘤、葡萄状肉瘤和内胚窦瘤中也检测到bcl-2蛋白的表达。提示bcl-2蛋白的表达可能与细胞分化有关。
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bcl-2是细胞凋亡的调节基因，可抑制P53诱发的细胞凋亡，而P53基因产物则下调bcl-2基因的表达，bcl-2和P53共同参与膀胱移行细胞癌的发展过程，可能会影响患者生存率[3]。有实验表明bcl-2表达能阻断肿瘤细胞的凋亡[4]。作者在体外实验中将反义bcl-2基因片段的重组逆转录病毒载体转染膀胱癌BIU-87细胞，发现bcl-2瞬时表达可促进BIU-87细胞凋亡[5]。最近有研究报告[6]：bcl-2在人膀胱癌多药耐药细胞中呈高表达，是导致细胞凋亡抑制的重要因素。bcl-2与膀胱肿瘤细胞的凋亡有肯定的联系，不仅在分化差的肿瘤中阳性率高，而且与膀胱肿瘤的耐药有关。因此，bcl-2蛋白表达可能与膀胱肿瘤预后有联系。有研究者认为：复发性肿瘤bcl-2阳性表达率明显高于未复发肿瘤，两者之间存在着显著性差异，提示bcl-2为临床估价个体膀胱癌复发的机率提供新的依据[2]。但也有作者观察的结果相反，Heikki等[7]研究bcl-2蛋白在女性乳腺癌中的表达，经过长期观察认为：bcl-2蛋白阴性的患者5年存活率低于bcl-2阳性表达患者，30年存活率两组无显著性差异。
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本研究结果发现，bcl-2在正常膀胱粘膜中无表达，在移行细胞癌及其它细胞类型的膀胱癌中有表达，如膀胱横纹肌肉瘤、葡萄状肉瘤及内胚窦瘤。而在Ⅲ级移行细胞癌中表达阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ级肿瘤，说明bcl-2蛋白的表达与膀胱肿瘤的分级有一定关联。bcl-2蛋白的表达能否作为膀胱肿瘤标志物及与膀胱肿瘤患者存活有否关系仍需进一步深入的研究。
作者简介：王养民(1958—)，男，硕士，主任医师
邢传平(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
张淑萍(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
参考文献：
[1]周惠珍，赵凤兰，周 俊，等.应用免疫组化SP法检测ER、PR在乳腺增生病组织中的表达及意义[J].西北国防医学杂志，1999，20(2)：113-114.
, 百拇医药
[2]习小庆，葛 根，彭瑞元，等.膀胱癌组织中bcl-2癌蛋白分布及意义[J].中华泌尿外科杂志，1997，18：304-305.
[3]Robin TV,Peter AH,Paul ES,et al.Invasion of the Bladder by Transitional Cell Carcinoma[J].Cancer,1998,82(4):715-723.
[4]Reed JC.Stein C,Subasingle C.et al.Antisense-mediated inhibition of bcl-2 protooncogene expression and Leukemic cell growth on survival comparisons of phosphodiester and phosphorothioate oligodeox ynucleotides[J].Cancer Res,1990,50:6565-6570.
, http://www.100md.com
[5]王养民，张绍增，惠宏襄，等.反义cbl-2RNA促进膀胱癌IBU-87细胞凋亡[J].中华泌尿外科杂志，1998，19(10)：519-523.
[6]王祥卫，杨唐俊，何 斌，等.bcl-2基因表达在人膀胱癌多药耐药现象中的意义[J].中华泌尿外科杂志，1999，20：234-236.
[7]Heikki J,Liisa P,Sakari T.Bcl-2 protein expression and long-term survival in breast cancer[J].Am J pathol,1994,145:1191-1198.
收稿日期：1999-09-01 修回：1999-12-30, 百拇医药
单位：王养民(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；王荣霞(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；哈英娣(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)；张绍增(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
关键词：膀胱肿瘤；Bcl-2；表达
西北国防医学杂志000210 摘要：目的：探讨bcl-2蛋白在人膀胱癌中表达的临床意义。方法：取57例经病理证实的膀胱肿瘤标本，应用免疫组化技术检测石蜡包埋在组织切片中bcl-2的表达。结果：正常膀胱粘膜组织bcl-2蛋白呈阴性。膀胱移行细胞癌Ⅰ级15例，阳性率13.3%；Ⅱ级16例，阳性率6.2%；Ⅲ级18例，阳性率50.0%。膀胱横纹肌肉瘤阳性1例，葡萄状肉瘤阳性1例，内胚窦瘤阳性1例。结论：凋亡抑制基因bcl-2蛋白在人膀胱不同细胞类型的肿瘤中有表达，在移行细胞中的表达与临床病理分级有一定的相关关系。探讨bcl-2蛋白在人膀胱癌中表达的临床意义。方法：取57例经病理证实的膀胱肿瘤标本，应用免疫组化技术检测石蜡包埋在组织切片中bcl-2的表达。结果：正常膀胱粘膜组织bcl-2蛋白呈阴性。膀胱移行细胞癌Ⅰ级15例，阳性率13.3%；Ⅱ级16例，阳性率6.2%；Ⅲ级18例，阳性率50.0%。膀胱横纹肌肉瘤阳性1例，葡萄状肉瘤阳性1例，内胚窦瘤阳性1例。结论：凋亡抑制基因bcl-2蛋白在人膀胱不同细胞类型的肿瘤中有表达，在移行细胞中的表达与临床病理分级有一定的相关关系。
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中图分类号：R 737.14 文献标识码：A 文章编号：1007-8622(2000)02-0107-02
Bcl-2 expression in human bladder tumors
WANG Yang-min,WANG Rong-xia,HA Ying-di,et al.(Department of Urology,Lanzhou General Hospital,Lanzhou Command,PLA,730050)
Abstract:Objective:To investigate the clinical significance of bcl-2 protein expression in human bladder tumors.Methods:Bcl-2 protein expression was investigated by immunocytoc hemistry from paraffin-embedded tissues from 57 patients with bladder tumor.Results:Normal bladder mucosa showed no immunoreactivity for bcl-2.Bcl-2 positive expression appeared in 49 transitional cell cacinomas(TCC),l rhabdomy-osarcoma,1 botryoid sarcoma and 1 endodermal sinus tumor,The positive expression rates in grade Ⅰ、Ⅱand Ⅲof TCC were 13.3%,6.2% and 50.0% respectively.Conclusion:Bcl-2 expression can be detected in TCC and other tumors of bladder.It might be related to the tumor grade of TCC.
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Key words：Bladder neoplasms; Bcl-2; Expression
近来年，bcl-2表达与肿瘤的恶性关系越来越受到重视，已发现它与肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等有关。bcl-2是一种调节细胞凋亡的基因，可抑制细胞凋亡。作者应用免疫组化技术对57例膀胱肿瘤组织中bcl-2蛋白进行检测，以探讨bcl-2蛋白表达的临床意义。
1 材料与方法
1.1 临床病理资料：57例膀胱瘤标本取自我院经手术切除的肿瘤标本。年龄2～87岁；男性47例，女性10例。移行细胞瘤49例，横纹肌肉瘤3例，腺癌、葡萄状肉瘤、内胚窦瘤、脂母细胞瘤、内翻乳头瘤各1例。经福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，病理证实。移行细胞瘤病理分级(按WHO分级标准)：Ⅰ级15例，Ⅱ级16例，Ⅲ级18例。另取正常膀胱粘膜组织作为对照。
, 百拇医药 1.2 试剂及方法
1.2.1 试剂：一抗鼠抗人bcl-2蛋白单克隆抗体，二抗为生物素标记的兔抗鼠IgG，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶及DAB显色试剂均购自迈新公司。
1.2.2 方法：石蜡切片常规脱蜡，逐级水化，PBS液中微波炉煮沸15 min，0.3%H2O2阻断内源性过氧化酶10 min，小牛血清封闭10 min。用SP法检测，新鲜配制的DAB溶液显色[1]。苏木素复染，逐渐脱水、透明、封片，光镜下观察。以迈新公司提供的阳性对照片为阳性对照，用PBS替代一抗作为阴性对照。
1.2.3 统计学处理：采用卡方检验进行统计学分析。
2 结果
bcl-2蛋白染色大多数位于肿瘤细胞浆内及细胞核周围，呈棕黄色，甚至可见细小颗粒。结果判断：无棕黄色为(-)，阳性细胞数<10%为(+)，11%～50%阳性细胞为()，>50%阳性细胞()。
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在正常膀胱粘膜中bcl-2蛋白表达为阴性。移行细胞癌Ⅰ级15例，阳性2例，占13.3%；(+)1例，()1例；Ⅱ级16例，阳性(+)1例占6.2%；Ⅲ级18例，阳性9例占50%，(+)7例，()2例。膀胱横纹肌肉瘤3例中有1例阳性，葡萄状肉瘤1例阳性，内胚窦瘤1例阳性。腺癌、脂母细胞瘤，内翻乳头瘤均为阴性。经统计学分析，Ⅰ、Ⅱ级移行细胞癌两组之间bcl-2阳性率无显著性差异(P>0.05)，而Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ级移行细胞癌bcl-2阳性率有显著性差异(P<0.01)。其它细胞类型的肿瘤因例数少未做统计学分析。
3 讨论
bcl-2蛋白的异常表达在许多人类癌组织中被发现，其表达与癌组织的恶性程度有相关关系[2，4]。本研究检测显示：正常膀胱粘膜组织中未见bcl-2蛋白表达，结果与文献报道一致。检测膀胱肿瘤的bcl-2蛋白表达发现：移行细胞癌分级与bcl-2蛋白的表达有一定的关联。Ⅰ、Ⅱ级移行细胞癌阳性率较低，分别为13.3%和6.2%，但Ⅲ级的阳性率明显升高占50.0%。习小庆等[2]报告的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌的阳性率分别为18.8%、52.0%和60.0%，高于本组所检出的阳性率。可能与试剂、操作方法各异有关。在膀胱横纹肌肉瘤、葡萄状肉瘤和内胚窦瘤中也检测到bcl-2蛋白的表达。提示bcl-2蛋白的表达可能与细胞分化有关。
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bcl-2是细胞凋亡的调节基因，可抑制P53诱发的细胞凋亡，而P53基因产物则下调bcl-2基因的表达，bcl-2和P53共同参与膀胱移行细胞癌的发展过程，可能会影响患者生存率[3]。有实验表明bcl-2表达能阻断肿瘤细胞的凋亡[4]。作者在体外实验中将反义bcl-2基因片段的重组逆转录病毒载体转染膀胱癌BIU-87细胞，发现bcl-2瞬时表达可促进BIU-87细胞凋亡[5]。最近有研究报告[6]：bcl-2在人膀胱癌多药耐药细胞中呈高表达，是导致细胞凋亡抑制的重要因素。bcl-2与膀胱肿瘤细胞的凋亡有肯定的联系，不仅在分化差的肿瘤中阳性率高，而且与膀胱肿瘤的耐药有关。因此，bcl-2蛋白表达可能与膀胱肿瘤预后有联系。有研究者认为：复发性肿瘤bcl-2阳性表达率明显高于未复发肿瘤，两者之间存在着显著性差异，提示bcl-2为临床估价个体膀胱癌复发的机率提供新的依据[2]。但也有作者观察的结果相反，Heikki等[7]研究bcl-2蛋白在女性乳腺癌中的表达，经过长期观察认为：bcl-2蛋白阴性的患者5年存活率低于bcl-2阳性表达患者，30年存活率两组无显著性差异。
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本研究结果发现，bcl-2在正常膀胱粘膜中无表达，在移行细胞癌及其它细胞类型的膀胱癌中有表达，如膀胱横纹肌肉瘤、葡萄状肉瘤及内胚窦瘤。而在Ⅲ级移行细胞癌中表达阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ级肿瘤，说明bcl-2蛋白的表达与膀胱肿瘤的分级有一定关联。bcl-2蛋白的表达能否作为膀胱肿瘤标志物及与膀胱肿瘤患者存活有否关系仍需进一步深入的研究。
作者简介：王养民(1958—)，男，硕士，主任医师
邢传平(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
张淑萍(兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)
参考文献：
[1]周惠珍，赵凤兰，周 俊，等.应用免疫组化SP法检测ER、PR在乳腺增生病组织中的表达及意义[J].西北国防医学杂志，1999，20(2)：113-114.
, 百拇医药
[2]习小庆，葛 根，彭瑞元，等.膀胱癌组织中bcl-2癌蛋白分布及意义[J].中华泌尿外科杂志，1997，18：304-305.
[3]Robin TV,Peter AH,Paul ES,et al.Invasion of the Bladder by Transitional Cell Carcinoma[J].Cancer,1998,82(4):715-723.
[4]Reed JC.Stein C,Subasingle C.et al.Antisense-mediated inhibition of bcl-2 protooncogene expression and Leukemic cell growth on survival comparisons of phosphodiester and phosphorothioate oligodeox ynucleotides[J].Cancer Res,1990,50:6565-6570.
, http://www.100md.com
[5]王养民，张绍增，惠宏襄，等.反义cbl-2RNA促进膀胱癌IBU-87细胞凋亡[J].中华泌尿外科杂志，1998，19(10)：519-523.
[6]王祥卫，杨唐俊，何 斌，等.bcl-2基因表达在人膀胱癌多药耐药现象中的意义[J].中华泌尿外科杂志，1999，20：234-236.
[7]Heikki J,Liisa P,Sakari T.Bcl-2 protein expression and long-term survival in breast cancer[J].Am J pathol,1994,145:1191-1198.
收稿日期：1999-09-01 修回：1999-12-30, 百拇医药