对中国药典头孢拉定制剂含量测定方法的改进建议
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前卫药学杂志
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对中国药典头孢拉定制剂含量测定方法的改进建议
赵庆华 张晓席 屈爱存 刘欣
(药品检验所 济南250022)
头孢拉定制剂的含量测定，中国药典[1,2]采用高效液相色谱法。但该方法头孢拉定及其主要杂质的保留时间过长，极大地影响了工作效率，增加了流动相的消耗。笔者查阅了近年来高效液相色谱法测定头孢拉定的有关文献，认为适当提高流动相中甲醇所占的比例，分离度和柱效满足药典要求，而样品的分析时间可缩短一半以上，含量测定结果与中国药典方法无明显差异。
1 药品与试剂
无水碳酸钠(AR)，36%醋酸(AR)，头孢拉定对照品(中国药品生物制品鉴定所)，头孢氨苄对照品(中国药品生物制品鉴定所)，头孢拉定制剂(市售)，甲醇(AR)。
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2 仪器与色谱条件KG2STBZ岛津LC-6A高效液相色谱仪；SPD-6AV紫外检测器；C-R4A数据处理机；色谱柱：SimPack CLC-ODS柱(250mm×46mm)，柱温：35℃；流动相：水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液(1364:600:30:6)，流速：08ml/min；检测波长：254nm。
3 方法与结果
3.1 头孢拉定对照品溶液的制备[1,2] 精密称取头孢拉定对照品约0.035g，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取10μl注入液相色谱仪，记录液相色谱图。
3.2 头孢氨苄对照品溶液的制备[1,2] 精密称取头孢氨苄对照品约20mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀(作为贮备液)。
, 百拇医药 3.3 系统适用性试验[1,2]取头孢拉定对照品溶液10份和头孢氨苄对照品贮备液1份，混匀，量取10μl注入液相色谱仪，记录液相色谱图，测定。头孢拉定峰和头孢氨苄峰的分离度为2.7，计算六次进样结果，RSD为0.46%；理论塔板数按头孢拉定峰计算为5.9×103。
34 供试品溶液的制备与测定[1,2]取装量差异项下的内容物(约相当于头孢拉定70mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录液相色谱图。
3.5 本方法与药典方法[1,2]比较
3.5.1 色谱图比较 图1和图2分别是采用本方法和药典方法测定头孢拉定对照品的色谱图，头孢拉定在两图中均呈现良好峰形，且与杂质分离效果良好，但保留时间有很大差异，前者为21.32min，后者为8.06min，较前者缩短了62%。图1中在头孢拉定峰后出现了一未知杂质峰，与文献[3]结果一致，说明在甲醇比例提高后，对杂质有更好的分离能力。
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图3是采用本方法测定头孢拉定样品的色谱图，从图中可以看出头孢拉定峰形尖锐，与杂质分离良好。说明该方法适合于头孢拉定样品的测定。
3.5.2 含量测定结果比较分别采用药典方法和本方法测定了几批头孢拉定样品中头孢拉定的含量，结果见表1。应用F检验判断两种方法的精密度是否存在差异。由表中数据计算所得的F值为1.18，查表得F0.05，5.5＝5.05，F值小于F0.05，55，说明两种方法的精密度无显著差异。应用t检验判断两种方法的平均值是否存在差异。由表中数据计算所得的t值为0.062，查表得t0.05，10＝2.228，t值远小于t0.05，10，因此，两种方法的平均值之间也无显著差异。
4 讨论
4.1 比较理想的流动相应当稳定性好，廉价易得，对环境无污染，在检测波长区域无吸收，分离效果好，样品组份保留时间短，分析速度快。表2中列出了部分高效液相色谱法测定头孢拉定的流动相。其中，甲醇-醋酸钠缓冲液流动相体系简单，廉价易得，分离效果良好，为中国药典和许多文献所采用，不失为一种较理想的流动相体系。但采用中国药典所规定的流动相，头孢拉定的保留时间长达21.32min，这不能不说是一重大缺陷。
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4.2 流动相的p值 流动相的p值对头孢拉定及其杂质的保留时间和分离效果会产生影响，在p4.8～6.0之间头孢拉定和其主要杂质头孢氨苄的保留时间有一最小值[3]，并且在此p值下，头孢拉定溶液具有较高的稳定性[3]。中国药典和其他方法流动相的p值大都在这一范围。影响流动相p值的主要是醋酸钠和醋酸的浓度，因此考虑保留中国药典所规定的醋酸钠和醋酸的浓度。
4.3 头孢拉定的保留时间随流动相中甲醇比例的增大而缩短[3]。适当提高流动相中甲醇的比例，有可能在保证分离效果的前提下，缩短其保留时间。将水-甲醇-3.86%的醋酸钠溶液-4%醋酸溶液流动相的比例由(1565:400:30:6)变为(1364:600:30:6)，使甲醇由原来的20%提高到30%，可在保证分离度(按头孢拉定与头孢氨苄峰计算为2.7)和理论塔板数(按头孢拉定峰计算为5.9×103)符合中国药典规定的前提下，使头孢拉定的保留时间缩短了62%。
4.4 与中国药典方法比较本方法一方面继承了原方法的优点，另一方面改进了原方法的一些缺陷，在保证分离效果的前提下，缩短了组份的保留时间，提高了分析速度，含量测定结果与中国药典无显著差异。因此能更好地适用于常规检验工作和厂方大批量生产时的质量控制。
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4.5 建议中国药典修改高效液相色谱法测定头孢拉定流动相中甲醇的比例。
参 考 文 献
1 中国药典1995二部：171
2 中国药典2000二部：185
3 刘春霞，等.首批头孢拉定暂行国家对照品的制备与标定中国抗生素杂志1994，19(5)：344)
4 杜迎翔，等反相PLC法测定先锋霉素VI胶囊和片剂的含量药学进展1995，19(3)：166)
5 何振梅，等高效液相色谱法测定血清中头孢拉定中国医院药学杂志1994，14(3)：121)
6 黄春明，等柱切换PLC法测定头孢拉定血清浓度药物分析杂志1998，18(5)：295)
7 曾慧，等PLC法同时测定头孢拉定和精氨酸的含量药物分析杂志1999，19(1)：, 百拇医药