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编号:10497352
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性研究
http://www.100md.com 《同济大学学报(医学版)》 2000年第3期
     作者:黄加权 李小丹 杨慧 陈如 刘守桂 齐俊英 张东绅

    单位:同济医科大学附属同济医院传染病科,武汉 430030

    关键词:抗药性,微生物;金黄色葡萄球菌;β-内酰胺酶类

    同济医科大学学报000327 摘要 监测金黄色葡萄球菌的耐药状况,为临床治疗 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染提供依据。采用试管双倍稀释法(改良)及纸片扩 散法对128株金黄色葡萄球菌进行药敏试验,并用Nitrocefin纸片法测定其β-内酰胺酶。M RSA检出率72.65%,产β-内酰胺酶83.70%。对青霉素G、克林霉素、红霉素、头孢唑啉、 庆 大霉素、四环素的耐药率在100%~92.47%之间,万古霉素、去甲万古霉素对所有菌株的抑菌 率达100%。多数药物对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)作用良好,头孢唑啉、利福平、 亚 胺培南和异帕米星的抑菌率均在94.3%~100%之间。MRSA对多数β-内酰胺类、氟喹诺酮类 及 某些氨基糖苷类抗生素呈多重耐药性。万古霉素、去甲万古霉素对其显示最强的抗菌活性, 利福平、壁霉素、异帕米星亦显示较强的抗菌活性,提示上述抗菌药物可用于MRSA所致严重 感染。
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    中图法分类号 R915, R378.1, Q556.9

    Resistance of Methicilli n-resistant Staphylococcus Aureus

    Huang Jiaquan Li Xiaodan Yang Hui et al

    (Department of Infectious Diseases, Tongji Hospital, To ngji Medical University, Wuhan 430030)

    Abstract In order to control the nosocomial infections caused b y methicillin-resistant staphylococcus aureus (MRSA), the resistance of MRSA is olates from patients was investigated, the susceptibility to 24 antibacterial ag ents tested by using agar dilution test and Kirby-Bauer respectively, and the β-lactates deteted by using nitrocefin method. The results showed the detectab le rate of MRSA was 72.65 %. 83.7 % MRSA were positive for β-lactamase. The resistance rate of PG, clindamycin, erythromycin. Cefazolin, gentamicin, tetrac ycline was from 92.24 % to 100 %. Vancomycin and norvancomycin could inhibit al l isolates tested. Most of the drugs were active against methicillin-sensitive staphylococcus. The inhibition rate of cefazolin, rifampin, imipenem and isepami cin was from 94.3 % to 100 %. MRSA was multidrug resistance to most of β-lac tams fluoroquiolones and some aminoglycoside antibiotics. Vancomycin and norvanc omycin possessed a strongest activity for MRSA, and rifampin, teicoplanin and is epamicin also revealed a stronger active against MRSA, suggesting all of them co uld be used to control MRSA infection.
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    Key words resistance, microorganism; staphylococcus aureus; β-lactamase

    耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在临床分离金黄色葡萄球菌中的比例不断上升[1~3], 因耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)多重耐药和高度耐药,治疗困难,病死率高,监测耐药 状况为临床合理选药控制MRSA感染尤为重要。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株:1996年1月~1998年12月从本院临床标本中共分离鉴定128株金黄色葡萄球菌、试验前重新鉴定细菌,标本分布:痰液(36.72%)、伤口(26.56%)、胆汁(8.59%)、鼻咽拭(14.06%)、血液(9.3%)、尿液(3.9%)、其它(2.3%)。
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    1.1.2 抗菌药物:万古霉素(华北制药厂)、替卡西林/克拉维酸(史克美占药厂)、亚胺培南(美国默沙东药厂)、环丙沙星(中美史克制药厂)、诺氟沙星(上海二厂)、氧氟沙星(珠海丽珠制药厂)、SMZ/TMP(上海十五制药厂)、万古霉素(美国礼来制药厂)、壁霉素(MerrellDow公司)、磷霉素(上海新亚制药厂)、异帕米星(日本旭化成株式会社)其余抗菌药物及药敏纸片均购自中国药品生物制品检定所。

    1.1.3 培养基:MH琼脂、MH肉汤培养基均购于中国药品生物制品检定所。

    1.1.4 β-内酰胺酶测定纸片:英国Oxoid公司生产的Nitrocefin测试β-内酰胺酶纸片,由大连辉瑞制药有限公司提供。

    1.1.5 质控标准菌株:试验所用的标准菌株为大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923,2个标准菌株均购自卫生部临床检验中心。
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    1.2 方法1.2.1 MRSA检测:按照NCCLS规定的微量肉汤稀释法[4]进行,在MHB中加入2.4g/L氯化钠,使用的抗生素为苯唑西林,接种药物浓度为5×105CFU/ml,35℃孵育4h后观察结果,MIC≥4mg/L的菌株为MRSA,≤2mg/L的菌株为MSSA。

    1.2.2 药敏试验:药敏试验采用K-B纸片法,应用MH培养基,抑菌直径均经卡尺测量,试验规格及结果判读按NCCLS制定的操作指南进行。

    1.2.3 β-内酰胺酶测定:按β-内酰胺酶测定纸片的说明进行操作和结果判定。

    1.2.4 最低抑菌浓度(MIC)测定:采用试管双倍稀释法(改良)。

    2 结果

    2.1 128株金葡菌对24种抗菌药物的敏感性比较
, 百拇医药
    128株金葡菌中MRSA有93株,占72.65%,痰液所占比例较高为36.7%,以血液标本来源的金 葡菌对大部分抗菌药物敏感性较高,详见表1。

    2.2 24种抗菌药物对金葡菌的耐药性

    万古霉素、去甲万古霉素对93株MRSA仍有良好的抗菌活性,无一耐药,壁霉素、异帕米星、 利福平对MRSA的抗菌作用次之,抑菌率分别为95.31%、94.50%、83.59%,头孢菌素类、 氟喹诺酮类因具有良好的抗菌作用而被临床医师广泛使用,对MRSA的抑菌效果明显下降。大 多数抗菌药物对MSSA作用较好。尤其头孢菌素类还保持一定的敏感性,而红霉素、青霉素、 克林霉素对MSSA的耐药率分别为:74.28%、93.75%、68.57%。详见表2。

    2.3 β-内酰胺酶测定结果

    受试菌产酶株占82.03%,其中MRSA产酶株占83.70%,MSSA产酶株占77.14%,二者无显著 差异。
, 百拇医药
    表1 128株金葡菌临床标本来源及敏感性分析 抗菌药物

    抑 制 率 (%)

    痰液

    伤口

    胆汁

    鼻咽拭

    血液

    尿液

    其它

    合计

    苯唑西啉

    21.65

    23.52
, 百拇医药
    45.45

    16.67

    33.3

    40

    1/3

    27.34

    青霉素G

    6.38

    0

    18.18

    12.50

    8.33

    0
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    0

    6.25

    头孢唑啉

    25.53

    38.23

    27.27

    31.25

    25.0

    60

    1/3

    31.25

    头孢氨苄

    48.93
, 百拇医药
    44.11

    27.27

    31.25

    50

    60

    1/3

    37.5

    头孢曲松

    34.04

    38.23

    27.27

    37.5

    50
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    60

    1/3

    37.5

    头孢塞肟

    36.17

    38.23

    27.27

    43.75

    50

    60

    0

    38.28

    亚胺培南
, 百拇医药
    59.57

    58.82

    54.54

    68.75

    66.7

    80

    3/3

    62.5

    替卡西林/克拉维酸

    25.53

    20.59

    18.18

    50
, 百拇医药
    33.3

    60

    0

    28.15

    氯霉素

    34.04

    38.23

    36.36

    37.50

    50

    40

    1/3

    39.06
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    磷霉素

    25.53

    29.41

    36.36

    37.50

    50

    40

    1/3

    42.03

    利福平

    89.36

    82.35

    72.72
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    81.25

    100

    100

    100

    83.59

    红霉素

    8.5

    8.82

    9.09

    18.15

    16.67

    20

    0/3
, 百拇医药
    12.50

    克林霉素

    10.63

    8.82

    9.09

    18.5

    25

    20

    0/3

    12.50

    四环素

    8.5

    8.82
, 百拇医药
    9.09

    25

    16.67

    0

    0/3

    10.93

    SME/TMP

    10.63

    11.76

    18.15

    18.15

    8.33

    20
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    1/3

    14.06

    万古霉素

    100

    100

    100

    100

    100

    100

    100

    100

    去甲万古

    100
, 百拇医药
    100

    100

    100

    100

    100

    100

    100

    壁霉素

    93.61

    94.11

    100

    93.75

    100
, 百拇医药
    100

    100

    95.31

    庆大霉素

    17.02

    20.58

    27.27

    31.25

    33.33

    40

    1/3

    23.14

    阿米卡星
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    44.68

    35.29

    54.54

    56.25

    50

    60

    2/3

    47.66

    异帕米星

    91.48

    94.11

    100

    93.75
, 百拇医药
    100

    100

    100

    94.53

    诺氟沙星

    14.89

    14.70

    27.27

    31.75

    16.67

    40

    1/3

    19.53
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    氧氟沙星

    21.27

    17.64

    36.36

    37.5

    25

    40

    1/3

    25

    环丙沙星

    19.14

    17.64

    45.45
, 百拇医药
    25

    25

    40

    1/3

    23.44

    表2 MRSA与MSSA对24种抗菌药物的耐药性比较 抗菌药物

    MRSA(93)株

    MSSA(35)株

    MIC50

    MIC90

    耐药率(%)

    MIC50
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    MIC90

    耐药率(%)

    苯唑西啉

    >128

    >128

    100

    0.25

    1

    0

    青霉素G

    >64

    >128

    100
, 百拇医药
    2

    32

    93.75

    头孢唑啉

    >128

    >128

    89.24

    0.25

    4

    5.7

    头孢氨苄

    >128

    >128
, 百拇医药
    77.4

    2

    16

    8.57

    头孢曲松

    64

    >128

    81.72

    2

    8

    11.42

    头孢塞肟

    64
, 百拇医药
    >128

    80.64

    2

    8

    11.42

    亚胺培南

    8

    16

    51.62

    ≤0.06

    0.5

    0

    替卡西林/克拉维酸
, 百拇医药
    32

    64

    86.02

    2

    8

    34.28

    氯霉素

    4

    64

    64.5

    8

    32

    51.42

, 百拇医药     磷霉素

    16

    >128

    74.19

    16

    64

    4.2

    利福平

    ≤0.016

    ≤0.016

    18.27

    ≤0.016

    ≤0.016
, 百拇医药
    0

    红霉素

    64

    >128

    94.62

    64

    >128

    >4.28

    克林霉素

    64

    >128

    94.62

    64
, 百拇医药
    >128

    68.57

    四环素

    64

    >128

    94.62

    64

    >128

    74.28

    SME/TMP

    >256

    >256

    93.54
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    >256

    >256

    65.71

    万古霉素

    1

    1

    0

    1

    1

    0

    去甲万古

    1

    1

    0
, 百拇医药
    1

    1

    0

    壁霉素

    1

    4

    8.60

    1

    2

    0

    庆大霉素

    32

    64

    88.17
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    1

    16

    45.71

    阿米卡星

    16

    32

    62.36

    0.5

    2

    25.71

    异帕米星

    2

    8

, http://www.100md.com     7.52

    0.5

    2

    0

    诺氟沙星

    >32

    >32

    88.17

    1

    64

    60

    氧氟沙星

    16

    >32
, 百拇医药
    86.02

    0.5

    32

    45.71

    环丙沙星

    >32

    >32

    86.02

    0.5

    >32

    51.43

    3 讨论

    MRSA的临床分离国内报道不尽相同[1,3],都有上升趋势,本资料MRSA占金葡菌比 率为72.65%,检出率低于北京、上海等地,MRSA对抗菌药物的耐药率普遍略低于上述地区 ,可能与地区差异、抗生素选择性压力有关,金葡菌标本来源于痰液及鼻咽拭子比率较高, 是其院内感染传播的潜在危险因素。
, 百拇医药
    MRSA表现出多重耐药性。万古霉素、去甲万古霉素及新的糖肽类壁霉素和氨基糖苷类新药异 帕米星对MRSA具良好的抗菌活性,利福平仍保持对MRSA一定敏感性。MRSA对氟喹诺酮类耐药 率迅速上升与报道一致[5~8]。β-内酰胺类抗生素中除亚胺培南对MRSA有一 定的抗菌活性外,其余的作用均较弱,不宜用于MRSA感染的治疗。MSSA除对青霉素G、红霉 素、克林霉素、四环素耐药率较高外,对大多数抗菌药物都保持不同的敏感性,且多种耐 药较少见。

    MRSA耐药机制之一是通过质粒介导产生大量的β-内酰胺酶。本文报道金葡菌产酶率为83. 70%。而MRSA与MSSA产酶率差别不显著,其耐药与产酶量、种类可能有关。MRSA耐药的另一 机制是称为MecA基因介导的固有耐药,MecA编码产生PBP2′能耐受治疗剂量的β-内酰胺类 抗生素,呈不均一性,β-内酰胺酶抑制剂无效[9],也还存在其它多种机制。

    医院内MRSA感染的发生与原发疾病轻重、免疫功能、长期广谱抗菌药物应用等多种因素有关 ,MRSA定植或感染者常为感染源,医护人员、医疗机械常为其传播媒介,对MRSA感染,除了 强调根据药敏试验合理选药外,也应依据感染部位、免疫状况、合并症加强综合治疗,还应 重视清除定植,切断传播,最大可能降低感染危险。
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    黄加权,男,1967年生,主治医师

    参 考 文 献

    1,陈 林,王其南,刘鸿渝等. 重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究. 中 华传染病杂志,1993,11(4):210

    2,王 睿,Nishioka K, Tanneo Y. 抗甲氧西林金葡菌耐药性的研究. 中国抗 生素杂志,1992,17(6):438

    3,李胜利,张婴元,周 乐. 30 种抗菌药物对临床分离葡萄球菌体外抗菌作用 的研究. 抗感染化疗杂志,1997,3(2):101

    4,Brumfitt W, Hamiltou-Miller J M T. The world-wide problem of meth icllin-resistant staphylococcus aureus. Drugs Expel Chin Res,1990,16(5):205[ ZK)
, 百拇医药
    5,Riley T V, Rouse I L. Methicillin-resistant staphylococcus aureus in western Australia 1983~1992. J Hospinfect, 1995,29:177

    6,Turnidge J,Grayson M L.Oprinmum Treatment of staphylococcal infectio ns. Drugs,1993,45:353

    7,邹俊宁,刘 莹. 临床常见致病菌耐药性分析. 中华医院感染学杂志,1996,6 (2):117

    8,Blumberg H M, Rimland D, Carrol D J et al.Rapid development of c ipro floxacin resistance in methicillin-susceptible and-resistant staphylococcus au reus. J infect Dis, 1991,163:1279

    9,De Lancastre H, Sa Figueiredo A M,Urban C et al. Multiple mechan isms of methicillin resistance and improved methods for detection in clinical isolat es of staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother,1991,35:632

    (1999-05-31 收稿), http://www.100md.com