绞股蓝总皂苷中原2α-羟基人参二醇皂苷分离和鉴定
作者：郑坚雄 胡文梅
单位：郑坚雄(广州市医药公司,广东 广州 510160)；胡文梅(上海罗氏制药有限公司)
关键词：绞股蓝皂苷；原2α-羟基人参二醇皂苷；双糖；分离；鉴定
广东药学院学报000312
摘 要 绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thumb.)Marko]总皂苷经硅胶柱层分离得一结晶性成分，经化学分析及光谱测定，其化学结构为3β-槐糖，20-β-芸香糖-原2α-羟基人参二醇皂苷。
中图号 R284.2 文献标识码:A
文章编号:1006-8783(2000)03-0203-02
, 百拇医药
绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thumb.)Marko]为葫芦科绞股蓝属植物。近年药理研究表明，它具有镇痛、抗疲劳、降血脂、抗癌等作用。绞股蓝的主要有效成分为绞股蓝皂苷，日本竹本常松等[1]曾从绞股蓝中分离鉴定了80多种皂苷，其中有4种为人参皂苷。我们从绞股蓝中提取总皂苷，从中分离得到一结晶(定名为SH-6)。经化学分析及光谱鉴定为原2α-羟基人参二醇皂苷。结构式见图1。
图1 原2α-羟基人参二醇皂苷的结构式
1 试验部分
1.1 仪器与试剂
MP-50型微量熔点仪，日本岛津UV2100，FT-IR 5DX型红外光谱仪，240C型元素分析仪，FX-90Q型核磁共振仪，UG ZAB-HS型质谱仪。层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品(120～160目)，其余试剂均为分析纯。
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1.2 粗总皂苷的精制
20 g粗皂苷(910901)用φ=70%乙醇溶解成500 mL。过滤除去醇不溶物后，过离子交换纤维柱3次，再用φ=70%乙醇200～300 mL将柱洗1次，将脱色后乙醇液合并，于沸水浴上浓缩干燥，得精制总皂苷14.5 g。
1.3 SH-6的分离
称2 g干燥的精制总皂苷用适量的甲醇溶解，再加3 g硅胶吸附、干燥、研细。称100 g层析用硅胶，以CHCl3为溶剂湿法装柱，上样，用V(氯仿)：V(甲醇)：V(水)=65∶35∶10室温静置的下层液作洗脱剂洗脱，速度2 mL/min，25 mL/次收集馏分，每份均在水浴上减压浓缩。用硅胶G(0.6% CMC_Na)薄层板，用上述洗脱剂作展开剂，以ρ=10%硫酸乙醇溶液作显色剂，经TLC鉴定，合并Rf值与人参皂苷(Rb1)相同斑点的馏分，减压回收溶剂，得白色粉末，用无水乙醇重结晶，得白色簇晶，即SH-6。
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1.4 苷元的分离、鉴别
称7.4 mg SH-6结晶加ρ=5%硫酸溶液5 mL于沸水浴水解4 h。水解液用3 mL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯，用蒸馏水洗至中性，浓缩，TLC检查，展开剂为V(CHCl3)∶V(MeOH)∶V(ETOAc)=20∶10∶1，显色剂同“1.3”。结果其水解物斑点位置和颜色与2α-羟基人参二醇对照品完全一致。
1.5 糖的分离鉴别
将上述“1.4”中ρ=5%硫酸水解溶液经乙酸乙酯萃取后的水层过701型阴离子树脂柱(5 mL)。水溶液蒸干，用适量甲醇溶解，TLC检查，展开剂为V(冰乙酸)∶V[V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=30∶12∶4下层液]=1∶9，显色剂为苯胺-邻苯二甲酸。结果与标准葡萄糖和鼠李糖的位置与颜色相一致。
称25.6 mg SH-6结晶加φ＝50%冰乙酸2 mL于70 ℃水浴水解6 h。再用水饱和正丁醇萃取3次(2 mL/次)，合并正丁醇液，减压抽干，加ρ＝5%硫酸溶液水解2 h，用乙酸乙酯萃取3次(2 mL/次)。合并乙酸乙酯，浓缩，TLC检查。结果显示有2α-羟基人参二醇的斑点。其水层过701阴离子柱，浓缩，蒸干，加适量甲醇溶解，TLC检查。结果仅显示有葡萄糖黄色斑点，未见有鼠李糖斑点。
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将上述φ＝50%冰乙酸水解溶液，经正丁醇萃取后的水层在水浴上蒸干，加适量甲醇溶解，TLC检查。结果在葡萄糖斑点下方只有一斑点。将此甲醇溶液挥干，加ρ＝5%硫酸于沸水浴中水解2 h，水解液过701型阴离子树脂，蒸干加适量甲醇溶解，TLC检查。结果显示有葡萄糖和鼠李糖二个斑点。这两种单糖经蒽酮法测定糖含量，得葡萄糖与鼠李糖的比例为3∶1。
1.6 SH-6的结构测定
SH-6为白色簇晶，mp 208～209 ℃，UV光谱在205.9 nm处有一最大吸收峰，在同等条件下Rb1在205.9 nm处也有一最大吸收峰，说明SH-6可能与Rb1具有相同的双键。IR光谱中3300 cm-1有一强吸收峰为-OH的伸缩振动吸收，837、1645 cm-1有中等强度吸收，从而表明SH-6分子中有双键结构，2930、1380 cm-1处有吸收，表明SH-6分子中有-CH3。SH-6的13C-NMR及DEPT谱中δppm 131.0(季碳)、125.9(叔碳)证实C24与C25处有一双键。13C-NMR和DEPT-13C-NMR谱表明在δ 95～105 ppm处有5个-CH-峰，其中4个应是糖的端基峰。另一个δ 95.5 ppm应是母核C3的碳。从“1.4”中得知SH_6的苷元为2α-羟基人参二醇。将SH-6的13C-NMR与2α-羟基人参二醇的13C-NMR相比较，2α-羟基人参二醇C3为δ 83.4 ppm、C2为δ 68.7 ppm，SH-6中的C3向低场位移12.1 ppm，与文献报道一致[2]，因此糖只可能联结在C3上，SH-6中δ 68.7 ppm峰应是C2上的碳，据此推测C3上连接有双糖。根据“1.5”中，SH-6经水解掉下双糖，此双糖经强酸水解后成葡萄糖和鼠李糖，从而说明C20位也连有葡萄糖和鼠李糖构成的双糖。将SH-6糖部分的13C-NMR及DEPT-13C-NMR与已知的葡萄糖、鼠李糖的13C-NMR相比较，接在母核C3双糖的二个葡萄糖连接顺序为1→2相连，即接在C3上葡萄糖的2位碳(δ 82.3 ppm)与另一分子葡萄糖1位碳(δ 105.4 ppm端基)相连，其双糖为槐糖。而接在C20双糖联结顺序为1→6相连，即接在C20位上葡萄糖6位碳(δ 67.2 ppm)与鼠李糖1位碳(δ 101.5 ppm)相连，其双糖为芸香糖。从13C-NMR谱中可见，连接C3、C20位上的槐糖与芸香糖均为β苷键构型。质谱FBA测得m/z：113 1(M++Na)、447(苷元)，表明其分子量应为1108，分子式C54H92O23。元素分析(%)：C 56.19，H 8.22，故SH-6分子式为C54H92O23*2H2O。综上所述SH-6结构为3-β-槐糖，20-β-芸香糖原2α-羟基人参二醇皂苷，即2α,3β,12β,20(s)-tetra-hydroxydammar-24-ene-3-o-β-sqohoroside-20-o-β-rutinoside，即为绞股蓝皂苷XLⅢ。
(致谢：元素分析、13C-NMR谱、IR谱、MS_FAB谱均由中山大学测试中心测定。)
参考文献
[1]竹木常松.ヴリ科植物の成分研究(第11报)アヌチヤサルをのサポニニ成分キフいこごのづ[J].药学杂志，1980，104(10)：1043.
[2]刘国樵.绞股蓝中人参二醇类苷元及商陆素的分离[J].中草药，1987，18(10)：47.
(收稿日期 2000-07-10), 百拇医药
单位：郑坚雄(广州市医药公司,广东 广州 510160)；胡文梅(上海罗氏制药有限公司)
关键词：绞股蓝皂苷；原2α-羟基人参二醇皂苷；双糖；分离；鉴定
广东药学院学报000312
摘 要 绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thumb.)Marko]总皂苷经硅胶柱层分离得一结晶性成分，经化学分析及光谱测定，其化学结构为3β-槐糖，20-β-芸香糖-原2α-羟基人参二醇皂苷。
中图号 R284.2 文献标识码:A
文章编号:1006-8783(2000)03-0203-02
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绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thumb.)Marko]为葫芦科绞股蓝属植物。近年药理研究表明，它具有镇痛、抗疲劳、降血脂、抗癌等作用。绞股蓝的主要有效成分为绞股蓝皂苷，日本竹本常松等[1]曾从绞股蓝中分离鉴定了80多种皂苷，其中有4种为人参皂苷。我们从绞股蓝中提取总皂苷，从中分离得到一结晶(定名为SH-6)。经化学分析及光谱鉴定为原2α-羟基人参二醇皂苷。结构式见图1。
图1 原2α-羟基人参二醇皂苷的结构式
1 试验部分
1.1 仪器与试剂
MP-50型微量熔点仪，日本岛津UV2100，FT-IR 5DX型红外光谱仪，240C型元素分析仪，FX-90Q型核磁共振仪，UG ZAB-HS型质谱仪。层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品(120～160目)，其余试剂均为分析纯。
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1.2 粗总皂苷的精制
20 g粗皂苷(910901)用φ=70%乙醇溶解成500 mL。过滤除去醇不溶物后，过离子交换纤维柱3次，再用φ=70%乙醇200～300 mL将柱洗1次，将脱色后乙醇液合并，于沸水浴上浓缩干燥，得精制总皂苷14.5 g。
1.3 SH-6的分离
称2 g干燥的精制总皂苷用适量的甲醇溶解，再加3 g硅胶吸附、干燥、研细。称100 g层析用硅胶，以CHCl3为溶剂湿法装柱，上样，用V(氯仿)：V(甲醇)：V(水)=65∶35∶10室温静置的下层液作洗脱剂洗脱，速度2 mL/min，25 mL/次收集馏分，每份均在水浴上减压浓缩。用硅胶G(0.6% CMC_Na)薄层板，用上述洗脱剂作展开剂，以ρ=10%硫酸乙醇溶液作显色剂，经TLC鉴定，合并Rf值与人参皂苷(Rb1)相同斑点的馏分，减压回收溶剂，得白色粉末，用无水乙醇重结晶，得白色簇晶，即SH-6。
, http://www.100md.com
1.4 苷元的分离、鉴别
称7.4 mg SH-6结晶加ρ=5%硫酸溶液5 mL于沸水浴水解4 h。水解液用3 mL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯，用蒸馏水洗至中性，浓缩，TLC检查，展开剂为V(CHCl3)∶V(MeOH)∶V(ETOAc)=20∶10∶1，显色剂同“1.3”。结果其水解物斑点位置和颜色与2α-羟基人参二醇对照品完全一致。
1.5 糖的分离鉴别
将上述“1.4”中ρ=5%硫酸水解溶液经乙酸乙酯萃取后的水层过701型阴离子树脂柱(5 mL)。水溶液蒸干，用适量甲醇溶解，TLC检查，展开剂为V(冰乙酸)∶V[V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=30∶12∶4下层液]=1∶9，显色剂为苯胺-邻苯二甲酸。结果与标准葡萄糖和鼠李糖的位置与颜色相一致。
称25.6 mg SH-6结晶加φ＝50%冰乙酸2 mL于70 ℃水浴水解6 h。再用水饱和正丁醇萃取3次(2 mL/次)，合并正丁醇液，减压抽干，加ρ＝5%硫酸溶液水解2 h，用乙酸乙酯萃取3次(2 mL/次)。合并乙酸乙酯，浓缩，TLC检查。结果显示有2α-羟基人参二醇的斑点。其水层过701阴离子柱，浓缩，蒸干，加适量甲醇溶解，TLC检查。结果仅显示有葡萄糖黄色斑点，未见有鼠李糖斑点。
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将上述φ＝50%冰乙酸水解溶液，经正丁醇萃取后的水层在水浴上蒸干，加适量甲醇溶解，TLC检查。结果在葡萄糖斑点下方只有一斑点。将此甲醇溶液挥干，加ρ＝5%硫酸于沸水浴中水解2 h，水解液过701型阴离子树脂，蒸干加适量甲醇溶解，TLC检查。结果显示有葡萄糖和鼠李糖二个斑点。这两种单糖经蒽酮法测定糖含量，得葡萄糖与鼠李糖的比例为3∶1。
1.6 SH-6的结构测定
SH-6为白色簇晶，mp 208～209 ℃，UV光谱在205.9 nm处有一最大吸收峰，在同等条件下Rb1在205.9 nm处也有一最大吸收峰，说明SH-6可能与Rb1具有相同的双键。IR光谱中3300 cm-1有一强吸收峰为-OH的伸缩振动吸收，837、1645 cm-1有中等强度吸收，从而表明SH-6分子中有双键结构，2930、1380 cm-1处有吸收，表明SH-6分子中有-CH3。SH-6的13C-NMR及DEPT谱中δppm 131.0(季碳)、125.9(叔碳)证实C24与C25处有一双键。13C-NMR和DEPT-13C-NMR谱表明在δ 95～105 ppm处有5个-CH-峰，其中4个应是糖的端基峰。另一个δ 95.5 ppm应是母核C3的碳。从“1.4”中得知SH_6的苷元为2α-羟基人参二醇。将SH-6的13C-NMR与2α-羟基人参二醇的13C-NMR相比较，2α-羟基人参二醇C3为δ 83.4 ppm、C2为δ 68.7 ppm，SH-6中的C3向低场位移12.1 ppm，与文献报道一致[2]，因此糖只可能联结在C3上，SH-6中δ 68.7 ppm峰应是C2上的碳，据此推测C3上连接有双糖。根据“1.5”中，SH-6经水解掉下双糖，此双糖经强酸水解后成葡萄糖和鼠李糖，从而说明C20位也连有葡萄糖和鼠李糖构成的双糖。将SH-6糖部分的13C-NMR及DEPT-13C-NMR与已知的葡萄糖、鼠李糖的13C-NMR相比较，接在母核C3双糖的二个葡萄糖连接顺序为1→2相连，即接在C3上葡萄糖的2位碳(δ 82.3 ppm)与另一分子葡萄糖1位碳(δ 105.4 ppm端基)相连，其双糖为槐糖。而接在C20双糖联结顺序为1→6相连，即接在C20位上葡萄糖6位碳(δ 67.2 ppm)与鼠李糖1位碳(δ 101.5 ppm)相连，其双糖为芸香糖。从13C-NMR谱中可见，连接C3、C20位上的槐糖与芸香糖均为β苷键构型。质谱FBA测得m/z：113 1(M++Na)、447(苷元)，表明其分子量应为1108，分子式C54H92O23。元素分析(%)：C 56.19，H 8.22，故SH-6分子式为C54H92O23*2H2O。综上所述SH-6结构为3-β-槐糖，20-β-芸香糖原2α-羟基人参二醇皂苷，即2α,3β,12β,20(s)-tetra-hydroxydammar-24-ene-3-o-β-sqohoroside-20-o-β-rutinoside，即为绞股蓝皂苷XLⅢ。
(致谢：元素分析、13C-NMR谱、IR谱、MS_FAB谱均由中山大学测试中心测定。)
参考文献
[1]竹木常松.ヴリ科植物の成分研究(第11报)アヌチヤサルをのサポニニ成分キフいこごのづ[J].药学杂志，1980，104(10)：1043.
[2]刘国樵.绞股蓝中人参二醇类苷元及商陆素的分离[J].中草药，1987，18(10)：47.
(收稿日期 2000-07-10), 百拇医药