二味康口服液对动物体内部分球蛋白的影响
作者：魏世超 马宝瑕 李俊 王立人
单位：魏世超 马宝瑕(同济医科大学附属同济医院药学部，武汉 430030)；李俊(安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230000)；王立人(同济医科大学基础医学院免疫学教研室，武汉 430030)
关键词：二味康口服液；免疫球蛋白；肺肿瘤；环磷酰胺
同济医科大学学报000330 摘要 肿瘤及免疫抑制剂均可导致免疫力低下, 表现 为免疫球蛋白IgG、IgM等水平降低。二味康口服液用于治疗由肺瘤及环磷酰胺引起的免疫球 蛋白减少的小鼠,结果表明,治疗15 d后,低下的IgG及IgM水平明显升高(P<0.05，0.01 )。正常大鼠大剂量服用该药后,亦可见球蛋白水平升高。实验结果提示, 二味康口服液能增 强免疫功能且通过该作用达到治疗肿瘤及免疫力低下引起的其他疾病,并能增强机体抗病能 力。
, http://www.100md.com 中图法分类号 R392.11， R734.2, R979.5
Effect of Erweikang Oral Solution on Glo bulin of Animals
Wei Shichao
(Department of Pharmacy, Tongji Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 4 30030)
Ma Baoxia
(Department of Pharmacy, Tongji Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 4 30030)
Li Jun
, 百拇医药
(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230000)
Abstract Erweikang oral solution (EOS) was used to treat the mi ce with lower immunoglobulin level caused by pulmonary tumor and cyclophosphami de. The results showed that EOS could raise the lower IgG and IgM level signific antly within 15 days. The globulin level of normal rats was promoted after using EOS in a large dosage. The results suggested that EOS can enhance immunologic f unction to treat tumor or other diseases, and strengthen defence competence of body.
, http://www.100md.com
Key words erweikang oral solution; immunoglobulin, pulmonary t umor; cyclophosphamide
二味康口服液(以下简称二味康)主要由黄芪、刺五加等中药组成,该方制剂及应用研究在 我院已开展多年,现正在作为辅助抗癌药三类新药进行开发研究，由于其具有免疫增强作用 [1] ，本文仅综合报道其对动物体内部分球蛋白的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
二味康: 规格2.2 g/ml(生药含量),由本科室制备。参芪片: 吉林制药厂产,剥取片芯, 加水研磨至适当浓度。环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)由上海第十二制药厂生产。
C57 BL/6J小鼠, 体重(18±3) g, 雌雄兼用,由上海实验动物中心提供。lewis肺癌瘤株从上 海药物研究所引进,用同系小鼠皮下接种传代。测定用小鼠 IgG标准品及兔抗鼠IgG由安徽医 学研究所病毒室提供。
, 百拇医药
NZH小鼠，体重(16±2) g,雄性，由湖北医学科学院动物中心提供,测定用小鼠IgG由华美 生物工程公司提供，羊抗鼠IgG为军事医学科学院产品。
SD大鼠 ，体重(120±10) g,雌雄各半, 由上海实验动物中心提供。
1.2 测定方法
血清IgG采用单向琼脂扩散法测定[2] 。脾细胞IgM的诱生与检测[3]: 每只 C57 BL/6J小鼠腹腔注射10%绵羊红细胞悬液0.2 ml(含细胞4×108个),于致敏后第 5 d处死,制备脾细胞悬液( 含细胞1.1×107 个/ml),取该悬液、0.2%绵羊红细胞和1∶1 0稀释的豚鼠血清各0.5 ml混匀,置37 ℃水浴中温育1 h, 3000 r/min离心5 min,取上清液 于分光光度计上检测(λ=413 nm),以A值表示IgM生成量。血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量 ,方法见文献[2]。
, http://www.100md.com
1.3 肿瘤模型制备
无菌操作,取出Lewis肺癌瘤块,用0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA消化30 min, 经200目尼 龙 网磨碎过滤。1500 r/min离心5 min, 配制1×107个/ml活细胞悬液, 每鼠右足趾皮下注射 0.1 ml,48 h后灌胃给药或溶媒进行治疗实验[3]。
1.4 免疫抑制模型制备
取NZH小鼠隔日腹腔注射Cy 50 mg/kg，共14 d。
1.5 动物分组及处理
C57 BL/6J小鼠140只,随机平均分为14组, 其中7组进行治疗7 d实验, 余7组进行治疗15 d实验, 动物处理方法相同。取1组动物不作任何处理为正常对照组, 余6组动物造肿瘤模型 后进行以下处理:①模型对照组, 灌服同体积水;②二味康高、中、低剂量组,灌服剂量分别 为27.50、13.75、6.88 g/(kg.d); ③对照药参芪片组, 灌服剂量为0.55 g/(kg.d); ④Cy组, 灌服剂量为0.02 g/(kg.d)。观察治疗后荷瘤小鼠脾细胞产生IgM及血清IgG水平 。
, 百拇医药
NZH小鼠50只随机分为5组,每组10只,作如下处理: ①正常对照组, 灌服水; ②模型对照 组, 隔日腹腔注射Cy 50 mg/kg,制作免疫抑制模型; ③Cy+二味康高、中、低剂量组, 每日 灌服二味康剂量分别为55、13.75、6. 88 g/kg, 隔日腹腔注射Cy 50 mg/kg, 于第15 d处 死动物, 测血清IgG值。
SD大鼠80只, 雌雄各半, 随机分为4组, 即正常对照组和二味康高、 中、 低三个剂量 组〔剂量分别为33、 3.3、0.66 g/(kg.d)〕。各组动物每周连续灌胃给药6 d,间隔1 d, 共计13周,第91 d处死动物,眼球取血测血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量。
1.6 数据处理
实验结果以
±s 表示，组间数据用t检验作统计学分析 。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 二味康对荷瘤小鼠脾细胞产生IgM及血清IgG水平的 影响
表1中,模型对照组动物IgM、IgG值均显著低于正常对照组(P<0.05), 说明模型成 立。二 味康高、中剂量组从第7 d起IgM及第15 d IgG值明显升高,与模型对照组比较有显著性差异( p<0.05～0.01)。阳性对照药参芪片及Cy分别显现免疫增强和抑制趋势。
表1 二味康对荷瘤小鼠脾细胞产生IgM及血清IgG水平的影响(±s,n＝10) 组别
脾细胞IgM(A值)
血清IgG(g/L)
7d
, http://www.100md.com
15 d
7d
15 d
正常对照组
0.58±0.07
0.60±0.09
11.7±1.3
11.8±0.8
模型对照组
0.37±0.04*
0.33±0.04*
10.6±1.4
, 百拇医药
9.3±1.2*
二味康低剂量组
0.40±0.05*
0.36±0.03*
10.8±1.1
10.0±1.2*
中剂量组
0.45±0.05*△△
0.49±0.06*△△
11.3±1.3
, http://www.100md.com
11.2±1.4△△
高剂量组
0.54±0.06△△
0.56±0.08△△
11.8±2.1
11.9±1.0△△
参芪片组
0.63±0.09△△
0.62±0.08△△
11.7±1.2
, 百拇医药
11.8±1.1△△
Cy组
0.35±0.02*
0.29±0.02*△
10.3±1.2
8.9±1.3*
与正常对照组比较 *P<0.01,与模型对照组比较 △ P<0.05 △△ P<0.012.2 二味康对免疫抑制模型小鼠血清IgG产生水平的影响
模型对照组动物IgG值(24.73±10.08) g/L显著低于正常对照组(48.64±18.59) g/L , P<0.01,说明免疫抑制模型成立。Cy+二味康高、中剂量组IgG分别为(41.11±15.9 8)、(36.49±16.01) g/L,与Cy组比较有显著性差异(P<0.01,<0.05), 而Cy+ 二味康低剂量组 IgG值为(30.53±8.56) g/L,显示二味康作用力较弱。
, 百拇医药
2.3 二味康对正常大鼠球蛋白的影响
由表2可见,高剂量组动物总蛋白、球蛋白含量与正常对照组比较明显升高(P<0.05)。
表2 二味康对大鼠总蛋白、白蛋白、球蛋白含量的影响(±s,n＝20) 组别
总蛋白(g/L)
白蛋白(g/L)
球蛋白(g/L)
正常对照组
70.53± 8.38
38.79±2.60
, 百拇医药
31.74± 9.85
二味康低剂量组
75.44± 5.15
41.50±2.45
34.39± 5.54
中剂量组
76.93±15.20
41.60±4.53
35.33±10.60
高剂量组
84.08±10.28*
, 百拇医药
41.60±2.67
42.48±10.38*
与正常对照组比较 *P<0.053 讨论
二味康口服液作为一种辅助抗癌药，具有免疫增强作用，主要用于肿瘤发病期及放疗化疗期 免疫功能低下者。众所周知，肿瘤及抗肿瘤药免疫抑制剂的使用常可导致免疫功能低下, 表现在免疫球蛋白上可见IgG、IgM等含量降低；免疫功能低下又可促使肿瘤及其他多种疾病 如感染性疾病的发生,IgG和IgM高浓度存在于身体多部位, 其Fc段可以与巨噬细胞、 多形核 白细胞、K细胞、 NK细胞等Fc受体结合,促进吞噬效果或形成细胞毒作用(ADCC),从而杀伤细 菌、瘤细胞等[4] 。动物实验表明,肺癌小鼠IgG和IgM含量低,用药后含量明显升高 ,说明 二味康能提高荷瘤小鼠免疫功能,起到扶正抗瘤效果,二味康能拮抗Cy引起的免疫力低下,促 进IgG指标恢复,且随剂量升高作用力增强,显示其对免疫力低下疾病具有预防和治疗作用,正 常大鼠长期大剂量服用二味康后,其球蛋白含量有明显升高(P<0.05),说明该药能增强 体 质,提高抗病能力。临床研究表明[1,5] ,该方具有抑制卵巢癌作用且能提高肿瘤患 者免疫功能。这些结果与中医“益气健脾”理论一致。实验及临床研究提示,二味康具有提 高 免疫功能作用,并可望通过该作用达到预防和治疗肿瘤及免疫力低下引起的疾病,长期服用可 治病健身。有关该药对肿瘤及免疫系统的影响的实验研究成果将作进一步报道。
, 百拇医药
魏世超，男，1966年生，主管药师
参 考 文 献
1，马 丁,蔡桂茹.黄芪刺五加治疗卵巢恶性肿瘤的免疫学研究.同济医科大学 学报,1992,22(增刊1):45
2，中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.南京:东南大学出版 社,1991. 145～148
3，徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1991.1208～12 45,1423～1436
4，郑武飞.医学免疫学.北京:人民卫生出版社,1989. 52,266～269
5，马 丁,蔡桂茹,刘春明.黄芪刺五加对人卵巢癌细胞抑制作用的初步研究.肿瘤 , 1992,12(2):57
(1998-12-05 收稿), http://www.100md.com
单位：魏世超 马宝瑕(同济医科大学附属同济医院药学部，武汉 430030)；李俊(安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230000)；王立人(同济医科大学基础医学院免疫学教研室，武汉 430030)
关键词：二味康口服液；免疫球蛋白；肺肿瘤；环磷酰胺
同济医科大学学报000330 摘要 肿瘤及免疫抑制剂均可导致免疫力低下, 表现 为免疫球蛋白IgG、IgM等水平降低。二味康口服液用于治疗由肺瘤及环磷酰胺引起的免疫球 蛋白减少的小鼠,结果表明,治疗15 d后,低下的IgG及IgM水平明显升高(P<0.05，0.01 )。正常大鼠大剂量服用该药后,亦可见球蛋白水平升高。实验结果提示, 二味康口服液能增 强免疫功能且通过该作用达到治疗肿瘤及免疫力低下引起的其他疾病,并能增强机体抗病能 力。
, http://www.100md.com 中图法分类号 R392.11， R734.2, R979.5
Effect of Erweikang Oral Solution on Glo bulin of Animals
Wei Shichao
(Department of Pharmacy, Tongji Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 4 30030)
Ma Baoxia
(Department of Pharmacy, Tongji Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 4 30030)
Li Jun
, 百拇医药
(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei 230000)
Abstract Erweikang oral solution (EOS) was used to treat the mi ce with lower immunoglobulin level caused by pulmonary tumor and cyclophosphami de. The results showed that EOS could raise the lower IgG and IgM level signific antly within 15 days. The globulin level of normal rats was promoted after using EOS in a large dosage. The results suggested that EOS can enhance immunologic f unction to treat tumor or other diseases, and strengthen defence competence of body.
, http://www.100md.com
Key words erweikang oral solution; immunoglobulin, pulmonary t umor; cyclophosphamide
二味康口服液(以下简称二味康)主要由黄芪、刺五加等中药组成,该方制剂及应用研究在 我院已开展多年,现正在作为辅助抗癌药三类新药进行开发研究，由于其具有免疫增强作用 [1] ，本文仅综合报道其对动物体内部分球蛋白的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
二味康: 规格2.2 g/ml(生药含量),由本科室制备。参芪片: 吉林制药厂产,剥取片芯, 加水研磨至适当浓度。环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)由上海第十二制药厂生产。
C57 BL/6J小鼠, 体重(18±3) g, 雌雄兼用,由上海实验动物中心提供。lewis肺癌瘤株从上 海药物研究所引进,用同系小鼠皮下接种传代。测定用小鼠 IgG标准品及兔抗鼠IgG由安徽医 学研究所病毒室提供。
, 百拇医药
NZH小鼠，体重(16±2) g,雄性，由湖北医学科学院动物中心提供,测定用小鼠IgG由华美 生物工程公司提供，羊抗鼠IgG为军事医学科学院产品。
SD大鼠 ，体重(120±10) g,雌雄各半, 由上海实验动物中心提供。
1.2 测定方法
血清IgG采用单向琼脂扩散法测定[2] 。脾细胞IgM的诱生与检测[3]: 每只 C57 BL/6J小鼠腹腔注射10%绵羊红细胞悬液0.2 ml(含细胞4×108个),于致敏后第 5 d处死,制备脾细胞悬液( 含细胞1.1×107 个/ml),取该悬液、0.2%绵羊红细胞和1∶1 0稀释的豚鼠血清各0.5 ml混匀,置37 ℃水浴中温育1 h, 3000 r/min离心5 min,取上清液 于分光光度计上检测(λ=413 nm),以A值表示IgM生成量。血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量 ,方法见文献[2]。
, http://www.100md.com
1.3 肿瘤模型制备
无菌操作,取出Lewis肺癌瘤块,用0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA消化30 min, 经200目尼 龙 网磨碎过滤。1500 r/min离心5 min, 配制1×107个/ml活细胞悬液, 每鼠右足趾皮下注射 0.1 ml,48 h后灌胃给药或溶媒进行治疗实验[3]。
1.4 免疫抑制模型制备
取NZH小鼠隔日腹腔注射Cy 50 mg/kg，共14 d。
1.5 动物分组及处理
C57 BL/6J小鼠140只,随机平均分为14组, 其中7组进行治疗7 d实验, 余7组进行治疗15 d实验, 动物处理方法相同。取1组动物不作任何处理为正常对照组, 余6组动物造肿瘤模型 后进行以下处理:①模型对照组, 灌服同体积水;②二味康高、中、低剂量组,灌服剂量分别 为27.50、13.75、6.88 g/(kg.d); ③对照药参芪片组, 灌服剂量为0.55 g/(kg.d); ④Cy组, 灌服剂量为0.02 g/(kg.d)。观察治疗后荷瘤小鼠脾细胞产生IgM及血清IgG水平 。
, 百拇医药
NZH小鼠50只随机分为5组,每组10只,作如下处理: ①正常对照组, 灌服水; ②模型对照 组, 隔日腹腔注射Cy 50 mg/kg,制作免疫抑制模型; ③Cy+二味康高、中、低剂量组, 每日 灌服二味康剂量分别为55、13.75、6. 88 g/kg, 隔日腹腔注射Cy 50 mg/kg, 于第15 d处 死动物, 测血清IgG值。
SD大鼠80只, 雌雄各半, 随机分为4组, 即正常对照组和二味康高、 中、 低三个剂量 组〔剂量分别为33、 3.3、0.66 g/(kg.d)〕。各组动物每周连续灌胃给药6 d,间隔1 d, 共计13周,第91 d处死动物,眼球取血测血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量。
1.6 数据处理
实验结果以
±s 表示，组间数据用t检验作统计学分析 。, http://www.100md.com
2 结果
2.1 二味康对荷瘤小鼠脾细胞产生IgM及血清IgG水平的 影响
表1中,模型对照组动物IgM、IgG值均显著低于正常对照组(P<0.05), 说明模型成 立。二 味康高、中剂量组从第7 d起IgM及第15 d IgG值明显升高,与模型对照组比较有显著性差异( p<0.05～0.01)。阳性对照药参芪片及Cy分别显现免疫增强和抑制趋势。
表1 二味康对荷瘤小鼠脾细胞产生IgM及血清IgG水平的影响(
±s,n＝10) 组别脾细胞IgM(A值)
血清IgG(g/L)
7d
, http://www.100md.com
15 d
7d
15 d
正常对照组
0.58±0.07
0.60±0.09
11.7±1.3
11.8±0.8
模型对照组
0.37±0.04*
0.33±0.04*
10.6±1.4
, 百拇医药
9.3±1.2*
二味康低剂量组
0.40±0.05*
0.36±0.03*
10.8±1.1
10.0±1.2*
中剂量组
0.45±0.05*△△
0.49±0.06*△△
11.3±1.3
, http://www.100md.com
11.2±1.4△△
高剂量组
0.54±0.06△△
0.56±0.08△△
11.8±2.1
11.9±1.0△△
参芪片组
0.63±0.09△△
0.62±0.08△△
11.7±1.2
, 百拇医药
11.8±1.1△△
Cy组
0.35±0.02*
0.29±0.02*△
10.3±1.2
8.9±1.3*
与正常对照组比较 *P<0.01,与模型对照组比较 △ P<0.05 △△ P<0.012.2 二味康对免疫抑制模型小鼠血清IgG产生水平的影响
模型对照组动物IgG值(24.73±10.08) g/L显著低于正常对照组(48.64±18.59) g/L , P<0.01,说明免疫抑制模型成立。Cy+二味康高、中剂量组IgG分别为(41.11±15.9 8)、(36.49±16.01) g/L,与Cy组比较有显著性差异(P<0.01,<0.05), 而Cy+ 二味康低剂量组 IgG值为(30.53±8.56) g/L,显示二味康作用力较弱。
, 百拇医药
2.3 二味康对正常大鼠球蛋白的影响
由表2可见,高剂量组动物总蛋白、球蛋白含量与正常对照组比较明显升高(P<0.05)。
表2 二味康对大鼠总蛋白、白蛋白、球蛋白含量的影响(
±s,n＝20) 组别总蛋白(g/L)
白蛋白(g/L)
球蛋白(g/L)
正常对照组
70.53± 8.38
38.79±2.60
, 百拇医药
31.74± 9.85
二味康低剂量组
75.44± 5.15
41.50±2.45
34.39± 5.54
中剂量组
76.93±15.20
41.60±4.53
35.33±10.60
高剂量组
84.08±10.28*
, 百拇医药
41.60±2.67
42.48±10.38*
与正常对照组比较 *P<0.053 讨论
二味康口服液作为一种辅助抗癌药，具有免疫增强作用，主要用于肿瘤发病期及放疗化疗期 免疫功能低下者。众所周知，肿瘤及抗肿瘤药免疫抑制剂的使用常可导致免疫功能低下, 表现在免疫球蛋白上可见IgG、IgM等含量降低；免疫功能低下又可促使肿瘤及其他多种疾病 如感染性疾病的发生,IgG和IgM高浓度存在于身体多部位, 其Fc段可以与巨噬细胞、 多形核 白细胞、K细胞、 NK细胞等Fc受体结合,促进吞噬效果或形成细胞毒作用(ADCC),从而杀伤细 菌、瘤细胞等[4] 。动物实验表明,肺癌小鼠IgG和IgM含量低,用药后含量明显升高 ,说明 二味康能提高荷瘤小鼠免疫功能,起到扶正抗瘤效果,二味康能拮抗Cy引起的免疫力低下,促 进IgG指标恢复,且随剂量升高作用力增强,显示其对免疫力低下疾病具有预防和治疗作用,正 常大鼠长期大剂量服用二味康后,其球蛋白含量有明显升高(P<0.05),说明该药能增强 体 质,提高抗病能力。临床研究表明[1,5] ,该方具有抑制卵巢癌作用且能提高肿瘤患 者免疫功能。这些结果与中医“益气健脾”理论一致。实验及临床研究提示,二味康具有提 高 免疫功能作用,并可望通过该作用达到预防和治疗肿瘤及免疫力低下引起的疾病,长期服用可 治病健身。有关该药对肿瘤及免疫系统的影响的实验研究成果将作进一步报道。
, 百拇医药
魏世超，男，1966年生，主管药师
参 考 文 献
1，马 丁,蔡桂茹.黄芪刺五加治疗卵巢恶性肿瘤的免疫学研究.同济医科大学 学报,1992,22(增刊1):45
2，中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.南京:东南大学出版 社,1991. 145～148
3，徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1991.1208～12 45,1423～1436
4，郑武飞.医学免疫学.北京:人民卫生出版社,1989. 52,266～269
5，马 丁,蔡桂茹,刘春明.黄芪刺五加对人卵巢癌细胞抑制作用的初步研究.肿瘤 , 1992,12(2):57
(1998-12-05 收稿), http://www.100md.com