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编号:10496830
沙参提取物镇咳祛痰及免疫增强作用研究
http://www.100md.com 《中国现代应用药学》 2000年第4期
     作者:龚晓健 季晖 李萍 杨伦 陈友地 毛新伟

    单位:李萍(中国药科大学生药学教研室);龚晓健 季晖(南京 210009 中国药科大学药理学教研室);杨伦 陈友地 毛新伟(南京 210037 中 国林科院林产化工研究所)

    关键词:沙参;镇咳祛痰;迟发型超敏反应;碳粒廓清;胸腺;脾脏

    中国现代应用药学000402 摘要 目的:以沙参提取物作为受 试物,观察其镇咳祛痰作用及对免疫功能的影响。方法:采用豚鼠枸橼酸 引咳法、小鼠酚红排泌试验法观察沙参镇咳祛痰作用;采用碳粒廓清法和二硝基氟苯诱导小 鼠迟发型变态反应试验法,观察沙参对非特异性免疫功能和特异性细胞免疫功能的影响。结果:结果显示沙参乙醇和乙酸乙酯提取物对豚鼠枸橼酸引咳具有显著的对 抗作用,乙酸乙酯提取物并有显著地促进小鼠酚红排泌作用。沙参多糖及水提取物能显著地 增加碳粒廓清指数K及吞噬指数α,增强单核巨噬细胞的吞噬功能;能显著地增加小鼠耳肿胀 度,提示沙参能够增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应。沙参多糖能显著增加胸腺和 脾脏的重量,水提物仅增加胸腺重量。结论:沙参提取物具有一定的镇咳 祛痰和免疫增强作用。
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    Studies of Radix adenophorae extracts on antitussive-expectorant and i mmunoenhancement effects

    Gong Xiaojian(Gong XJ),Ji Hui(Ji H),Li Ping(Li P),et al

    (Department of Pharmacology,China Pharmaceutica l University,Nanjing 210009)

    ABSTRACT OBJECTIVE:To evaluate the immunomodulating,antitussive an d expectorant effects of Radix Adenophorae extracts.METHODS:Cough mo del was induced by citric acid in guinea pig,and phenol red expectoration test. Carbon clearance test and dinitrofluorobenzene-induced delayed type hypersensit ivity test(DTH) were used.RESULTS:The tests showed that ethanol extr act and ethyl acetate extract had significant antitussive effect on guinea pig i nduced by citric acid,ethyl acetate extract also had expectorant effect.Polysacc haride and water extract could increase the index of K and α in carbon clearanc e test.Enhancement of ear swelling was also found,showing that radix adenophorae could increase delayed type hypersensitivity induced by DNFB.Polysaccharide inc reased the weight of spleen and thymus,but water extract only increased the weig ht of thymus.CONCLUSION:Radix Adenophorae extracts had significant a ntitussive and expectant effects,and could greatly enhance immunological functio n.
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    KEY WORDS Radix Adenophorae extracts,antitussive and expectora nt effects,DTH,carbon clearance test,thymus,spleen

    沙参(又名南沙参)始载于《神农本草经》:“味苦微寒,主血积惊气、除寒热、补中益 肺气、久服利人。”沙参是清肺养阴、祛痰镇咳的常用中草药之一, 有养阴、补虚、清热、 化痰等功能, 临床用于阴虚肺热、燥咳痰粘、热病伤津及疮疡肿毒等病症的治疗。但对其有 效部位的分离提取及活性成份的报道甚少, 本文报道了沙参提取物(乙醇提取物、乙酸乙酯 提取物、水提取物和多糖)对呼吸系统和免疫系统的主要药理作用。

    1 材料与方法

    1.1动物

    豚鼠,体重200~300g, 雌雄各半;昆明种小鼠,体重18~22g,雌雄各 半,由中国药科大学实验动物室提供。ICR小鼠,体重18~22g,雌雄各半,由南京医科大学 实验动物中心提供。
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    1.2 药品与试剂

    沙参乙醇提取物、乙酸乙酯提 取物、水提取物及沙参多糖,自提;美沙芬(瑞士霍夫曼罗氏公司);云芝多糖(南京老山制 药厂);氯化铵(上海黄海制药厂);印度墨汁(Black Indian Ink)WINSOR AND NEWTON INK,BD H LIMITED Poole,BH12,4NN,England,使用前用生理盐水稀释3倍,超声处理后离心,弃去沉淀 物;二硝基氟苯(Dinitrofluorobenzene,DNFB)(吴江市青云精细化工厂)。使用前配制1% DNFB溶液, 称取DNFB 50mg, 溶于预先配好的丙酮麻油溶液(丙酮-麻油=1∶1)5ml中。

    1.3 镇咳作用豚鼠枸橼酸引咳法[1]

    取豚鼠于实验前一天将其逐一置于3L钟罩内,用超声喷雾法喷入17.5%枸橼酸溶液,持续1.5mi n,数记自喷雾起6.5min内咳嗽次数,挑选咳嗽次数多于10次的豚鼠为合格动物用于实验。将 合格豚鼠64只随机分为8组,每组8只,受试药设两个剂量组,乙醇提取物给药量为50,100和20 0mg/kg;乙酸乙酯提取物给药量为10,20和40mg/kg,用美沙芬作为阳性对照药,剂量为15mg/ kg,阴性对照组给予等量0.5% CMC-Na溶液,上述各组均灌胃给药,每日1次,连续5d。于末 次给药后0.5h按上法喷雾17.5%枸橼酸溶液,将各给药组豚鼠6.5min内咳嗽次数与阴性对照组 同时间进行组间t检验。
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    1.4 祛痰作用小鼠酚红排泌试验法[2]

    取昆明种小鼠72只,随机分成6组,每组12只,雌雄各半。受试药设两个剂量组,乙醇提取 物给药量为300和600mg/kg;乙酸乙酯提取物给药量为60和120mg/kg,连续给药5d,用氯化铵 作为阳性对照药,剂量为1.0g/kg,阴性对照组给予等量0.5% CMC-Na溶液,上述各组均灌 胃给药。于末次给药后0.5h腹腔注射2.5%酚红生理盐水溶液500mg/kg。注射后0.5h处死动物 ,分离气管,取自甲状软骨下缘至支气管分叉处这段气管,置入2ml生理盐水中,室温振荡0 .5h后,加入1mol/L NaOH溶液0.1ml,于波长546nm处比色,将OD值读数在酚红标准曲线上查 出酚红含量(回归方程:y=248.8510X-0.2137,r=0.9999)。

    1.5 对非特异性免疫功能的影响碳粒廓清法[3]
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    取昆明种小鼠72只,随机分为6组,每组12只,受试药设两个剂量组,沙参水提物给药量为600 和1200mg/kg;沙参多糖给药量为400和800mg/kg,用云芝多糖作为阳性对照药,剂量为1.0g/ kg,阴性对照组给予等量0.5% CMC-Na溶液,上述各组均灌胃给药,每日1次,连续7d。末次 给药后半小时,各鼠尾静脉注射经稀释的印度墨汁0.05ml/10g,于1(t1)和5(t5)分钟后, 分别从眼眶静脉丛取血20μl,加到2ml 0.1% Na2CO3溶液中摇匀,用分光光度计在680nm 下比色,测定t1和t5的光密度(OD1和OD5),按下式计算廓清指数K和吞噬指数α:

    K=(log OD1-log OD5)/(t5-t1)=log(OD1/OD5)/4
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    α=体重/肝脾重×K1/3

    最后将小鼠放血处死,取出肝脏、脾脏及胸腺称重,按下式 计算脾脏及胸腺的脏器系数:脏器系数=器官重量/体重×10。

    1.6 对特异性细胞免疫功能的影响二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟 发型变态反应试验法(DTH)[4]

    取ICR小鼠60只,随机分为6组,每组10只,受试药设 两个剂量组,沙参水提物给药量为600和1200mg/kg;沙参多糖给药量为400m和800mg/kg;用 云芝多糖作为阳性对照药,剂量为1g/kg;阴性对照组给予等量0.5% CMC-Na溶液,上述各 组均灌胃给药,每日1次,连续5日。每鼠腹部去毛,范围为3×3cm2,将1%DNFB均匀涂抹于上, DNFB为一种半抗原,与皮肤蛋白结合成全抗原后可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。末次 给药后半小时,将1%DNFB均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击,使局部产生迟发型变态反应(水肿), 攻击后24h,脱颈椎处死小鼠,减下左右耳壳,用打孔器取下直径8mm的耳片,称重,以左右耳片 重量之差作为肿胀度,比较各组的差别。
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    2 结 果

    2.1 镇咳作用豚鼠枸橼酸引咳法

    沙参乙醇提取物在100和200mg/kg的剂 量下及沙参乙酸乙酯提取物在10,20和40mg/kg的剂量下对豚鼠枸橼酸引咳呈现出显著的镇 咳作用,结果见表1。

    表1 沙参对豚鼠枸橼酸引咳的镇 咳作用/x±s,n=8 组 别

    剂量/mg.kg-1

    6.5min内咳嗽次数

    阴性对照

    12.6±2.2

    沙参醇提物
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    50

    10.1±4.1

    沙参醇提物

    100

    5.4±2.1*1

    沙参醇提物

    200

    5.9±3.0*1

    沙参酯提物

    10

    8.4±3.7*2

    沙参酯提物
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    20

    5.6±2.4*1

    沙参酯提物

    40

    5.5±1.2*1

    美沙芬

    15

    5.4±2.1*1

    注:与阴性对照组相比较 ,*1P<0.01,*2P<0.05

    2.2 祛痰作用小鼠酚红排泌试验法

, http://www.100md.com     与阴性对照组比较,120mg/kg剂量沙参乙酸乙酯提取物能显著地增加小鼠酚红排泌量,而乙醇 提取物未见增加酚红排泌作用,结果见表2。

    2.3 对非特异性免疫功能的影响碳粒廓清法

    沙参多糖在800mg/ kg的剂量下具有显著地提高碳粒廓清指数和吞噬指数的作用,说明沙参多糖能够增强单核巨 噬细胞的吞噬功能,沙参水提物在600mg/kg剂量下也具有提高吞噬指数的作用(表3)。沙参多糖在400和800mg/kg的剂量下能增加脾脏及胸腺的重量,而水提物仅在600mg/kg剂量下能 增加胸腺重量结果见表4。

    表2 沙参对小鼠酚红排泌试验的影响/x±s,n=12 组 别

    剂 量/mg.kg-1

    酚红排泌量/μg.ml-1
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    阴性对照

    2.150±0.576

    乙醇提取物

    300

    2.544±1.226

    乙醇提取物

    600

    2.026±0.541

    乙酸乙酯提取物

    60

    2.109±0.603

    乙酸乙酯提取物
, 百拇医药
    120

    3.395±0.658*

    氯化铵

    1000

    3.747±0.958*

    注:与阴性对照组相比较,*P<0.01表3 沙参提取物对小鼠碳粒廓清试验的作用/x±s,n=12 组 别

    剂量

    /mg.kg-1

    廓清指数

    吞噬指数
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    阴性对照

    0.0117±0.00465

    4.139±0.612

    沙参水提物

    600

    0.0175±0.00785

    4.852±0.703*1

    沙参水提物

    1200

    0.0189±0.00983

    4.762±0.684
, 百拇医药
    沙参多糖

    400

    0.0174±0.00841

    4.608±0.915

    沙参多糖

    800

    0.0220±0.00524*2

    5.093±0.426*2

    云芝多糖

    1000

    0.0227±0.00912*2
, 百拇医药
    5.419±0.877*2

    注:与阴性对照组相比较,*1P<0.05,*2P<0 .01表4 沙参提取物对小鼠免疫器官重量 的影响/x±s,n=12 组 别

    剂量

    /mg.kg-1

    脾脏指数

    /mg.10g -1

    胸腺指数

    /mg.10g-1

, 百拇医药     阴性对照

    38.75±7.54

    38.50±9.49

    沙参水提物

    600

    44.08±7.59

    52.52±8.06*1

    沙参水提物

    1200

    35.42±7.33

    41.36±6.986

    沙参多糖
, 百拇医药
    400

    50.66±9.77*1

    49.65±9.37*2

    沙参多糖

    800

    51.41±15.23*2

    58.3±11.05*1

    云芝多糖

    1000

    60.56±17.04*1

    59.92±12.88*1
, 百拇医药
    注:与阴性对照组相比较,*1P<0.01,*2P<0.05

    2.4 对特异性细胞免疫功能的影响DTH试验

    沙参多糖及沙参水提物具有显著地增加小鼠耳肿胀度作用,说明沙参能够增强二硝基氟苯诱 导的小鼠迟发型变态反应,结果见表5。

    3 讨 论

    呼吸道感染属常见病、多发病之一,咳、痰、喘是临床的主要症状,止咳化痰则为临床治疗的主要任务,本文研究了沙参提取物的镇咳祛痰作用, 发现沙参乙酸乙酯提取物对豚鼠枸橼酸引咳具有较好的镇咳作用,并可显著增强酚红排泌作 用,作用强于乙醇提取物,有待进一步从乙酸乙酯提取物中寻找活性成份。

    表5 沙参提取物对小鼠耳肿胀度的影响/x±s,n=10 组 别
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    剂量/mg.kg-1

    小鼠耳肿胀度/mg

    阴性对照

    4.13±0.60

    沙参水提物

    600

    4.13±0.73

    沙参水提物

    1200

    4.88±0.43*1

    沙参多糖

, 百拇医药     400

    4.85±0.78*2

    沙参多糖

    800

    4.78±0.68*2

    云芝多糖

    1000

    5.44±0.72*3

    注:与阴性对照组相比较,*1P<0.01,*2P<0.05,*3 P<0.001

    沙参不仅有祛痰镇咳作用,而且具有养阴补虚等功能。《日华子本草》记载沙参“补虚”,“ 补肺气………益脾与肾”。虚症可引起免疫功能低下或免疫平衡紊乱,补虚、补肺脾肾之药 多数都有提高免疫力的功能。文献报道沙参能使小鼠末梢血中淋巴细胞数和T-细胞数明显 增高,使胸腺内淋巴细胞数增加,从而提高细胞免疫。还可使小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率 明显升高,提高非特异性免疫[5]。本试验结果与文献报道一致,表明沙参多糖和 水提物具有增强非特异性免疫和细胞免疫的作用,调节机体免疫平衡,达到补虚扶正之目的, 提示沙参增强免疫的有效部位可能在多糖部分。
, 百拇医药
    九五攻关课题“沙参培育与产业化技术研究”

    参考文献

    [1]陈奇主编.中药药理研究方法学.第1版.北京:人民卫生出 版社,1994∶639.

    [2]季晖,李萍,姚力,等.蒲贝酮碱的镇咳作用研究.中国药科 大学学报,1993,24(2)∶95.

    [3]徐叔云主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版 社,1991∶1233.

    [4]王格林,林志彬.香菇多糖的免疫调节作用.药学学报,199 6,31(2)∶86.

    [5]黄晓洁,颜耀东,杨正娟,等.沙参对免疫功能的影响.沈阳 药学院学报,1991,8(3)∶204.

    收稿日期:1999-05-28, http://www.100md.com