对肝胃气痛片质量检测方法的研究
作者：张晔 张瑞琦 王宝庆 张军波
单位：张晔(牡丹江 157000 牡丹江市 中医院)；张瑞琦 王宝庆(牡丹江 157011 牡丹江市药品检验所)；张军波(佳木斯 154000 佳木斯市中心医院)
关键词：
中国现代应用药学000429 肝胃气痛片是由大黄、龙胆、丁香油、薄荷油、碳酸氢钠等组 成的复方制剂，具有消积开气、健胃制酸之功效，可用于治疗胃痛、胃胀、嗳气泛酸、消化 不良等症，收载于《黑龙江省药品标准》1986年版，其质量标准是以滴定法测定肝胃气痛片 中碳酸氢钠的含量。对其处方中的大黄、龙胆质量无控制标准，为了进一步完善该制剂的质 量标准，我们对处方中的主药大黄、龙胆进行了薄层层析法定性，并采用比色法测定，制剂 中游离蒽醌和总蒽醌的含量，该法简便快速，结果稳定，重现性好，回收率达到99.35%，变 异系数为2.69%，研究出对肝胃气痛片中其他主药的质量控制方法。
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1 仪器与试药
日本岛津UV-2100型紫外可见分光光度 计TS14-2光学读数分析天平(湘仪天平仪器厂)，三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。
对照品：大黄素、大黄酚、龙胆苦甙(中国药品生物制品检定所，大黄药材、龙胆药材(佳 木斯医学院附属药厂)。
标准品：1，8-二羟基蒽醌(Merck公司)肝胃气痛片(佳木斯医学 院附属药厂)。
2 定性分析
2.1 大黄的薄层鉴别[1，2]
2.1.1 样品液制备 取 肝胃气痛片一片，研成粉末，加甲醇6ml振荡20min，过滤浓缩为样品液Ⅰ，同法平行做6个 批号样品(Ⅰa,Ⅰb,Ⅰc,Ⅰd,Ⅰe,Ⅰf),供检识大黄用。
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2.1.2 对照品溶液的制备，精取大黄素，大黄酚各2mg,用氯仿6ml溶解即 得。
2.1.3 阳阴对照液的制备 取大黄药材粉末2g,制备方法与样 品液相同，得阳性对照液[大黄(+)]。按肝胃气痛片的处方比例，从全方中除去被测药材 大黄，同样品液制备，得阴性对照液[大黄(-)]。
2.1.4 薄层层析分 别取样品液(Ⅰa,Ⅰb,Ⅰc,Ⅰd,Ⅰe,Ⅰf),对照品溶液大黄(+)、大黄(-)4ml,点 于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(4∶1)为展开剂倾斜上行展开，展距11cm,取出，挥干 溶剂，用10% NaOH喷雾显色。大黄(+)各批号样品均显示对照品大黄素、大黄酚相对应的红 色斑点，缺该药材的阴性对照液则无相应斑点，各批号样品层析斑点、位置、形状、颜色基 本一致，重现性好，结果见图1。
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图1 大黄的薄层检识
1-Ⅰa；2-Ⅰb；3- Ⅰc；4-大黄(-)；5-大黄(+)；6-大黄素；7-大黄酚；8-Ⅰd；9-Ⅰe；10-Ⅰf；.- 为红色斑点
2.2 龙胆的薄层鉴别
2.2.1 样品液的制备取肝胃气痛片一片，研成粉 末，加甲醇10ml,回流1h提取液过滤、浓缩，为样品Ⅱ，同法做6个批号(Ⅱa,Ⅱb,Ⅱc ,Ⅱd,Ⅱe,Ⅱf),供检识龙胆用。
2.2.2 对照品溶液的制备 取 龙胆苦甙3mg,用氯仿6ml,溶解即得。
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2.2.3 阳阴对照液的制备 取龙胆药材粉末2g,同样品液制备，得阳性对照液[龙胆(+)]。按肝胃气痛片的组分比 例，从全方中除去被测药材龙胆，按样品液制备得阴性对照液[龙胆(-)]。
2.2.4 薄层层板 分别取样品液Ⅱa,Ⅱb,Ⅱc,Ⅱd,Ⅱe,Ⅱf ,阳性对照液龙胆(+)，阴性对照液龙胆(-)4ml,点于同一硅胶GF薄层板上，以氯仿-甲醇- 水(20∶3∶1)为展开剂倾斜上行展开，取出挥散溶剂，置于紫外灯下观察，龙胆药材，各批 号样品，阳性对照液均显示与龙胆苦甙相对应的紫色荧光斑点，证明鉴别方法可靠，结果见 图2。
图2 龙胆的薄层检识
1-Ⅱa；2-Ⅱb；3- Ⅱc；4-龙胆(-)；5-龙胆苦甙；6-龙胆(+)；7-Ⅱd；8-Ⅱe；9-Ⅱf；.-为紫色荧 光斑点
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3 定量分析
3.1 最大吸收波长的选择[3]
精密称取105℃,干燥2h的1,8-二羟基蒽 醌约25mg,置于250mg量瓶中，以乙醚溶解，稀释至刻度，摇匀。精密吸取标准溶液2.5ml,置 25ml量瓶中，蒸发乙醚至干，残渣中加入5%NaOH-2%NH4OH混合碱液溶解，并稀释至刻度 ，摇匀。测定其吸收特征，结果表明，最大吸收波长为517.8nm。
3.2 标准曲线的绘制
精密称取105℃恒温干燥2h的1,8-二羟基蒽醌25m g,置于250ml量瓶中，加乙醚溶解，充分混匀，稀释至刻度，制得0.1mg/ml的标准溶液。精 密称取,0.50,1.0,1.50,2.0,2.50,3.0,3.50和4.0ml,分别置于25ml量瓶中，在水浴上蒸去乙 醚，残渣用5% NaOH-2% NH4OH混合碱液溶解并稀释至刻度，摇匀，于517.8%处测定吸收 度，以5% NaOH-2% NH4OH混合碱液做空白对照，结果见表1，以浓度为横坐标，以吸收度 为纵坐标，作图得通过原点的直线，见图3。经统计处理求得回归方程为:Y=0.00679+ 50.5357X,r=0.9998。浓度在0.002～0.016mg/ml之间线性关系良好。
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3.3 含量测定
3.3.1 游离蒽醌的含量测定 精密称取肝胃气痛片10 片，研细混匀，求得平均片重，精密称量一片量，置于索氏提取器中，加入不敷出100ml 氯仿于沸水浴上回流提取4h,俟游离蒽醌提尽，将氯仿提取液蒸干，残渣中分数次加入小体 积5% NaOH-2% NH4OH混合碱液溶解，并转移至25ml量瓶中，至混合碱液无色，用同样试 剂稀释至刻度，摇匀。准确吸取5ml,置于25ml量瓶中，用同样的试剂稀释至刻度，摇匀。于 517.8nm处测定，以5% NaOH-2% NH4OH混合碱液作空白对照，结果见表2。
表1 标准溶液的测定数据 浓度/mg.ml-1
吸收度
0.002
, 百拇医药
0.112
0.004
0.205
0.006
0.305
0.008
0.412
0.01
0.509
0.012
0.623
0.014
0.717
, 百拇医药
0.016
0.809
图3 1，8-二羟基蒽醌的标 准曲线
表2 游离蒽醌的含量 测定数据 批 号
片 重
吸收度A
含量/mg.g-1
平均含量/mg.g-1
Ⅰa
0.6012
0.132
, 百拇医药
0.5156
0.5258
0.6014
0.137
0.5360
Ⅰb
0.5908
0.126
0.4996
0.5080
0.5908
0.130
, 百拇医药
0.5163
Ⅰc
0.5973
0.140
0.5519
0.5664
0.5971
0.141
0.5809
Ⅰd
0.5943
0.076
, 百拇医药
0.5133
0.5133
0.5944
0.130
0.5132
Ⅰe
0.5981
0.094
0.3612
0.3653
0.5982
0.096
, 百拇医药
0.3694
Ⅰf
0.5971
0.137
0.5399
0.5462
0.5973
0.140
0.5524
3.3.2 结合蒽醌的含量测定 精密称取肝胃气痛片10片，研细混匀 ，求得平均片重。精密称取一片量，置100ml锥形瓶中，加入浓硫酸6ml,直火加热水解2h。 冷却后，加入氯仿6ml,水浴上加热回流1h,吸取底层氯仿液，酸水层再加新鲜氯仿6ml,仍置 水浴上回流30min,如此重复4次，至酸水层中蒽醌成分提尽，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗 至中性，将氯仿回收。然后依次按上述1项下步骤测定，结果见表3。
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3.3.3 加样回收率试验 取肝胃气痛片10片，批号Ⅰf，精密称定 适量，研细，称取一片重，置于纸筒中，放 入沙氏提取器中，再加入1，8-二羟基蒽醌标准5ml(0.1mg/ml)。挥干乙醚。以下按游 离蒽醌项下操作，平等做6份，结果见表4。表3 总蒽醌的含量测定数据 批 号
片 重
吸收度A
含量/mg.g -1
平均含量/mg.g-1
Ⅰa
0.6012
0.360
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1.4537
1.4555
0.6014
0.361
1.4573
Ⅰb
0.5907
0.420
1.7307
1.7411
0.5907
0.425
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1.7514
Ⅰc
0.5975
0.458
1.8684
1.9817
0.5977
0.513
2.0950
Ⅰd
0.5944
0.494
, 百拇医药
2.0279
2.082
0.5945
0.520
2.1361
Ⅰe
0.5980
0.547
2.2349
2.396
0.5981
0.625
, 百拇医药
2.5571
Ⅰf
0.5969
0.625
2.5625
2.5995
0.5970
0.643
2.6364
表4 加样回收率测定数据 编 号
样品量
/mg
, 百拇医药
加样量
/mg
吸收度
/A
加样回收
率/%
平均加样
回收率/%
CV
/%
1
0.5948
0.5
, 百拇医药
0.321
96.28
2
0.5948
0.5
0.324
97.20
3
0.5948
0.5
0.328
98.43
99.35
, 百拇医药
2.37
4
0.5949
0.5
0.339
101.80
5
0.5947
0.5
0.336
100.88
6
0.5948
, 百拇医药
0.5
0.338
101.49
3.3.4 精密度试验 取肝胃气痛片10片，精密称定重量，研细，称 取一片重，按游离蒽醌含量测定项下操作，平行做6份，结果见表5。表5 精密度测定平行6份样数据 编 号
吸收度A
平均值
Sx
CV/%
1
0.131
2
, 百拇医药
0.130
3
0.131
0.131
0.00352
2.69
4
0.131
5
0.126
6
0.137
4 小结与讨论
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4.1 本文采用薄层层析法，以大黄素 、大黄酚、龙胆苦甙，单味药材和缺该药材的配方为对照，定性检出了肝胃气痛片中的主药 大黄和龙胆，实验表明，肝胃气痛片薄层定性方法，斑点清晰、稳定，重现性好，可为该制 剂质量控制的标准。
4.2 采用比色法[4]测定了肝胃气痛片中 游离蒽醌和总蒽醌的含量，方法简便，结果稳定，数据可靠，回收率达到99.35%，变异系数 为2.69%，是控制产品质量的一种有效方法。
4.3 薄层鉴别龙胆时，样 品液制备[5]中文献报导龙胆用甲醇冷浸过夜，薄层层析表明效果不好，我们改用 加热回流提取1h，效果较佳。
4.4 比色测定中，采用直接加碱显色， 代替萃取后显色的方法，避免了萃取操作过程中含量的损失。
4.5 在实验中，发现了一些质量问题，如龙胆成分，制剂中含量较低， 可能是在制剂过程中遭到不同程度的破坏。另外，实验中还发现，不同批号的肝胃气痛片， 其游离蒽醌和总蒽醌的含量有的相差很大，有关这方面的研究还有待于继续进行。
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参考文献
[1]刘训江.中药材薄层色谱鉴别.天津：天津科学技术出版 社，1990，20，161.
[2]沙世炎著.中草药有效成分分析法.上册.北京：北京人民 卫生出版社，1982∶25.
[3]姚桂根，孙小萍，马星航.用醋酸镁-甲醇比色法测定何 首乌及其制剂中蒽醌类成份的含量.中草药，1983，14(6)∶15.
[4]王慕邹.植物药中蒽醌衍生物的化学分析.药学学报，198 6，21(3)∶231.
[5]杨梓懿，易伟锋.决明子不同炮制品蒽醌含量测定.中成 药，1991，13(12)∶18.
收稿日期：1998-10-22, http://www.100md.com
单位：张晔(牡丹江 157000 牡丹江市 中医院)；张瑞琦 王宝庆(牡丹江 157011 牡丹江市药品检验所)；张军波(佳木斯 154000 佳木斯市中心医院)
关键词：
中国现代应用药学000429 肝胃气痛片是由大黄、龙胆、丁香油、薄荷油、碳酸氢钠等组 成的复方制剂，具有消积开气、健胃制酸之功效，可用于治疗胃痛、胃胀、嗳气泛酸、消化 不良等症，收载于《黑龙江省药品标准》1986年版，其质量标准是以滴定法测定肝胃气痛片 中碳酸氢钠的含量。对其处方中的大黄、龙胆质量无控制标准，为了进一步完善该制剂的质 量标准，我们对处方中的主药大黄、龙胆进行了薄层层析法定性，并采用比色法测定，制剂 中游离蒽醌和总蒽醌的含量，该法简便快速，结果稳定，重现性好，回收率达到99.35%，变 异系数为2.69%，研究出对肝胃气痛片中其他主药的质量控制方法。
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1 仪器与试药
日本岛津UV-2100型紫外可见分光光度 计TS14-2光学读数分析天平(湘仪天平仪器厂)，三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。
对照品：大黄素、大黄酚、龙胆苦甙(中国药品生物制品检定所，大黄药材、龙胆药材(佳 木斯医学院附属药厂)。
标准品：1，8-二羟基蒽醌(Merck公司)肝胃气痛片(佳木斯医学 院附属药厂)。
2 定性分析
2.1 大黄的薄层鉴别[1，2]
2.1.1 样品液制备 取 肝胃气痛片一片，研成粉末，加甲醇6ml振荡20min，过滤浓缩为样品液Ⅰ，同法平行做6个 批号样品(Ⅰa,Ⅰb,Ⅰc,Ⅰd,Ⅰe,Ⅰf),供检识大黄用。
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2.1.2 对照品溶液的制备，精取大黄素，大黄酚各2mg,用氯仿6ml溶解即 得。
2.1.3 阳阴对照液的制备 取大黄药材粉末2g,制备方法与样 品液相同，得阳性对照液[大黄(+)]。按肝胃气痛片的处方比例，从全方中除去被测药材 大黄，同样品液制备，得阴性对照液[大黄(-)]。
2.1.4 薄层层析分 别取样品液(Ⅰa,Ⅰb,Ⅰc,Ⅰd,Ⅰe,Ⅰf),对照品溶液大黄(+)、大黄(-)4ml,点 于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(4∶1)为展开剂倾斜上行展开，展距11cm,取出，挥干 溶剂，用10% NaOH喷雾显色。大黄(+)各批号样品均显示对照品大黄素、大黄酚相对应的红 色斑点，缺该药材的阴性对照液则无相应斑点，各批号样品层析斑点、位置、形状、颜色基 本一致，重现性好，结果见图1。
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图1 大黄的薄层检识
1-Ⅰa；2-Ⅰb；3- Ⅰc；4-大黄(-)；5-大黄(+)；6-大黄素；7-大黄酚；8-Ⅰd；9-Ⅰe；10-Ⅰf；.- 为红色斑点
2.2 龙胆的薄层鉴别
2.2.1 样品液的制备取肝胃气痛片一片，研成粉 末，加甲醇10ml,回流1h提取液过滤、浓缩，为样品Ⅱ，同法做6个批号(Ⅱa,Ⅱb,Ⅱc ,Ⅱd,Ⅱe,Ⅱf),供检识龙胆用。
2.2.2 对照品溶液的制备 取 龙胆苦甙3mg,用氯仿6ml,溶解即得。
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2.2.3 阳阴对照液的制备 取龙胆药材粉末2g,同样品液制备，得阳性对照液[龙胆(+)]。按肝胃气痛片的组分比 例，从全方中除去被测药材龙胆，按样品液制备得阴性对照液[龙胆(-)]。
2.2.4 薄层层板 分别取样品液Ⅱa,Ⅱb,Ⅱc,Ⅱd,Ⅱe,Ⅱf ,阳性对照液龙胆(+)，阴性对照液龙胆(-)4ml,点于同一硅胶GF薄层板上，以氯仿-甲醇- 水(20∶3∶1)为展开剂倾斜上行展开，取出挥散溶剂，置于紫外灯下观察，龙胆药材，各批 号样品，阳性对照液均显示与龙胆苦甙相对应的紫色荧光斑点，证明鉴别方法可靠，结果见 图2。
图2 龙胆的薄层检识
1-Ⅱa；2-Ⅱb；3- Ⅱc；4-龙胆(-)；5-龙胆苦甙；6-龙胆(+)；7-Ⅱd；8-Ⅱe；9-Ⅱf；.-为紫色荧 光斑点
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3 定量分析
3.1 最大吸收波长的选择[3]
精密称取105℃,干燥2h的1,8-二羟基蒽 醌约25mg,置于250mg量瓶中，以乙醚溶解，稀释至刻度，摇匀。精密吸取标准溶液2.5ml,置 25ml量瓶中，蒸发乙醚至干，残渣中加入5%NaOH-2%NH4OH混合碱液溶解，并稀释至刻度 ，摇匀。测定其吸收特征，结果表明，最大吸收波长为517.8nm。
3.2 标准曲线的绘制
精密称取105℃恒温干燥2h的1,8-二羟基蒽醌25m g,置于250ml量瓶中，加乙醚溶解，充分混匀，稀释至刻度，制得0.1mg/ml的标准溶液。精 密称取,0.50,1.0,1.50,2.0,2.50,3.0,3.50和4.0ml,分别置于25ml量瓶中，在水浴上蒸去乙 醚，残渣用5% NaOH-2% NH4OH混合碱液溶解并稀释至刻度，摇匀，于517.8%处测定吸收 度，以5% NaOH-2% NH4OH混合碱液做空白对照，结果见表1，以浓度为横坐标，以吸收度 为纵坐标，作图得通过原点的直线，见图3。经统计处理求得回归方程为:Y=0.00679+ 50.5357X,r=0.9998。浓度在0.002～0.016mg/ml之间线性关系良好。
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3.3 含量测定
3.3.1 游离蒽醌的含量测定 精密称取肝胃气痛片10 片，研细混匀，求得平均片重，精密称量一片量，置于索氏提取器中，加入不敷出100ml 氯仿于沸水浴上回流提取4h,俟游离蒽醌提尽，将氯仿提取液蒸干，残渣中分数次加入小体 积5% NaOH-2% NH4OH混合碱液溶解，并转移至25ml量瓶中，至混合碱液无色，用同样试 剂稀释至刻度，摇匀。准确吸取5ml,置于25ml量瓶中，用同样的试剂稀释至刻度，摇匀。于 517.8nm处测定，以5% NaOH-2% NH4OH混合碱液作空白对照，结果见表2。
表1 标准溶液的测定数据 浓度/mg.ml-1
吸收度
0.002
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0.112
0.004
0.205
0.006
0.305
0.008
0.412
0.01
0.509
0.012
0.623
0.014
0.717
, 百拇医药
0.016
0.809
图3 1，8-二羟基蒽醌的标 准曲线
表2 游离蒽醌的含量 测定数据 批 号
片 重
吸收度A
含量/mg.g-1
平均含量/mg.g-1
Ⅰa
0.6012
0.132
, 百拇医药
0.5156
0.5258
0.6014
0.137
0.5360
Ⅰb
0.5908
0.126
0.4996
0.5080
0.5908
0.130
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0.5163
Ⅰc
0.5973
0.140
0.5519
0.5664
0.5971
0.141
0.5809
Ⅰd
0.5943
0.076
, 百拇医药
0.5133
0.5133
0.5944
0.130
0.5132
Ⅰe
0.5981
0.094
0.3612
0.3653
0.5982
0.096
, 百拇医药
0.3694
Ⅰf
0.5971
0.137
0.5399
0.5462
0.5973
0.140
0.5524
3.3.2 结合蒽醌的含量测定 精密称取肝胃气痛片10片，研细混匀 ，求得平均片重。精密称取一片量，置100ml锥形瓶中，加入浓硫酸6ml,直火加热水解2h。 冷却后，加入氯仿6ml,水浴上加热回流1h,吸取底层氯仿液，酸水层再加新鲜氯仿6ml,仍置 水浴上回流30min,如此重复4次，至酸水层中蒽醌成分提尽，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗 至中性，将氯仿回收。然后依次按上述1项下步骤测定，结果见表3。
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3.3.3 加样回收率试验 取肝胃气痛片10片，批号Ⅰf，精密称定 适量，研细，称取一片重，置于纸筒中，放 入沙氏提取器中，再加入1，8-二羟基蒽醌标准5ml(0.1mg/ml)。挥干乙醚。以下按游 离蒽醌项下操作，平等做6份，结果见表4。表3 总蒽醌的含量测定数据 批 号
片 重
吸收度A
含量/mg.g -1
平均含量/mg.g-1
Ⅰa
0.6012
0.360
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1.4537
1.4555
0.6014
0.361
1.4573
Ⅰb
0.5907
0.420
1.7307
1.7411
0.5907
0.425
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1.7514
Ⅰc
0.5975
0.458
1.8684
1.9817
0.5977
0.513
2.0950
Ⅰd
0.5944
0.494
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2.0279
2.082
0.5945
0.520
2.1361
Ⅰe
0.5980
0.547
2.2349
2.396
0.5981
0.625
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2.5571
Ⅰf
0.5969
0.625
2.5625
2.5995
0.5970
0.643
2.6364
表4 加样回收率测定数据 编 号
样品量
/mg
, 百拇医药
加样量
/mg
吸收度
/A
加样回收
率/%
平均加样
回收率/%
CV
/%
1
0.5948
0.5
, 百拇医药
0.321
96.28
2
0.5948
0.5
0.324
97.20
3
0.5948
0.5
0.328
98.43
99.35
, 百拇医药
2.37
4
0.5949
0.5
0.339
101.80
5
0.5947
0.5
0.336
100.88
6
0.5948
, 百拇医药
0.5
0.338
101.49
3.3.4 精密度试验 取肝胃气痛片10片，精密称定重量，研细，称 取一片重，按游离蒽醌含量测定项下操作，平行做6份，结果见表5。表5 精密度测定平行6份样数据 编 号
吸收度A
平均值
Sx
CV/%
1
0.131
2
, 百拇医药
0.130
3
0.131
0.131
0.00352
2.69
4
0.131
5
0.126
6
0.137
4 小结与讨论
, 百拇医药
4.1 本文采用薄层层析法，以大黄素 、大黄酚、龙胆苦甙，单味药材和缺该药材的配方为对照，定性检出了肝胃气痛片中的主药 大黄和龙胆，实验表明，肝胃气痛片薄层定性方法，斑点清晰、稳定，重现性好，可为该制 剂质量控制的标准。
4.2 采用比色法[4]测定了肝胃气痛片中 游离蒽醌和总蒽醌的含量，方法简便，结果稳定，数据可靠，回收率达到99.35%，变异系数 为2.69%，是控制产品质量的一种有效方法。
4.3 薄层鉴别龙胆时，样 品液制备[5]中文献报导龙胆用甲醇冷浸过夜，薄层层析表明效果不好，我们改用 加热回流提取1h，效果较佳。
4.4 比色测定中，采用直接加碱显色， 代替萃取后显色的方法，避免了萃取操作过程中含量的损失。
4.5 在实验中，发现了一些质量问题，如龙胆成分，制剂中含量较低， 可能是在制剂过程中遭到不同程度的破坏。另外，实验中还发现，不同批号的肝胃气痛片， 其游离蒽醌和总蒽醌的含量有的相差很大，有关这方面的研究还有待于继续进行。
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参考文献
[1]刘训江.中药材薄层色谱鉴别.天津：天津科学技术出版 社，1990，20，161.
[2]沙世炎著.中草药有效成分分析法.上册.北京：北京人民 卫生出版社，1982∶25.
[3]姚桂根，孙小萍，马星航.用醋酸镁-甲醇比色法测定何 首乌及其制剂中蒽醌类成份的含量.中草药，1983，14(6)∶15.
[4]王慕邹.植物药中蒽醌衍生物的化学分析.药学学报，198 6，21(3)∶231.
[5]杨梓懿，易伟锋.决明子不同炮制品蒽醌含量测定.中成 药，1991，13(12)∶18.
收稿日期：1998-10-22, http://www.100md.com