HPLC和络合-UV法测定特非那丁颗粒剂的含量
作者：张冯敏 何厚洪
单位：杭州 310006 浙江康恩贝集团研究开发中心
关键词：特非那丁；HPLC法；络合-UV法；含量测定
中国现代应用药学000427 摘要 目的：用HPLC和电荷转移络合UV法分别测定特非那丁颗粒剂的 含量,并对测定结果进行比较。方法：HPLC法，色谱柱：Spherisorb C 8(150×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1mol/L三乙胺磷酸缓冲液(80∶20)，检测波长235 nm。电荷转移络合UV法，利用碘与TFN在氯仿中形成电荷转移络合物的原理，在紫外294nm的 波长处测定TFN的含量。结果：两法测定的线性范围和平均回收率分别为 ：HPLC法150～1500μg/ml，99.40%(RSD 0.92%)；络合-UV法2～12μg/m l，99.45%(RSD 0.67%)。结论：两种测定方法准确可 靠，并无显著性差异。
, http://www.100md.com
The determination of terfenadine granules by HPLC and charge-tra nsfer complex UV spectrophotometry
Zhang Fengmin(Zhang FM)，He Houhong(He HH)
(Zhejiang Conba Group Center of Research and Devel opment，Hangzhou 310006)
ABSTRACT OBJECTIVE：Terfenadine granules were assayed by HPLC or ch arge-transfer complex UV spectrophotometry and the results were compared. METHODS:Separation was achieved on a spherisorb columm C8 with a mobile phase of triethylammonium phosphate buffer(0.1mol/L)-methanol(20∶80).The wavel ength of the UV detector was 235nm.Terfenadine reacted with iodine in chloroform to form a molecular charge-transfer complex and can be quantitatively determin ed by UV spectrophotometric method at 294nm after treatment with iodine solution at 60℃ for 30 minutes.RESULTS:The average recovery and linear rang e were 99.40%(RSD 0.92%) and 150～1500μg/ml for HPLC，99.45%( RSD 0.67%) and 2～12μg/ml for complex-UV method，respectively.CONC LUSION:Two methods were accurate and there are no significant differences existed between them.
, 百拇医药
KEY WORDS terfenadine，HPLC，complex-UV spectrophotometry，assay
特非那丁(Terfenadine TFN)是八十年代上市的抗组胺药，因TFN紫外吸收 系数很小，片剂和胶囊在部颁标准中采用非水滴定法。后发现TFN与碘在氯仿介质中发生电 荷转移形成络合物，该络合物在294nm的波长处有明显吸收，因此，在部颁标准中，本中心 研制的新药TFN颗粒剂采用络合-UV法测定含量。现用HPLC法测定含量，结果显示两法无显 著性差异。
1 仪器与试药
HP1100高效液相色谱仪(四元梯度泵、可变波长紫外检测器、液相色谱工作站);岛津UV-220 1型紫外分光光度计。
TFN对照品(本中心精制，由浙江省药品检验所标定，含量100.1%);T FN颗粒剂(本中心研制，规格0.5g：15mg);辅料(按处方配制，主要由糖粉、CMC-Na等 组成)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 测定方法
2.1.1 HPLC法 TFN的主峰出峰时间约为3.8min，辅料、有关物质对测定无干扰。
色谱条件 色谱柱：Spherisorb C8(150×4.6mm，5μm);流动相：甲醇-0.1mol/L三乙 胺磷酸缓冲液(80∶20);检测波长235nm，流速1.5ml/min，理论板数按TFN峰计算大于3000。
测定法 精密称取样品适量(约相当于TFN 30mg)，置50ml量瓶中，加入流动相溶解并定容 ，取续滤液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录峰面积，另取TFN对照品，同法测定，按 外标法以峰面积计算含量。
2.1.2 络合-UV法 只有TFN-I络合物在2 94nm的波长处有最大吸收，而辅料、TFN、碘则为0。
, 百拇医药
精密称取样品适量(约相当于TFN 7.5 mg)，置50ml量瓶中，加氯仿溶解、定容，滤过，取续滤液，即得供试液，另取TFN对照品适 量，用氯仿配制成每1ml中含TFN 0.15mg的溶液，即得对照品溶液。精密量取此两种溶液各2 ml，分别置50ml棕色量瓶中，加0.005%碘氯仿溶液25ml，60℃保温30min，冷却至室温，用 氯仿定容，在294nm的波长处分别测定吸收度，计算含量。
2.2 线性关系
照2.1.1法，取TFN对照品适量用流动相配制成0，150，300，450，600，750，900，1200和1 500μg/ml的系列溶液，得进样量M与峰面积Y的回归方程为：Y=156.8M+36.3，r=0.9997。
照2.1.2法，配制成0，2，4，6，8，10和12μg/ml的TFN对照品溶液，在2 94nm处测定吸收度A，得浓度C与吸收度A的回归方程为：A=0.0615C-0.0079，r=0.9991。
, 百拇医药
2.3 回收率试验
分别精密称取TFN对照品约30mg(置50 ml量瓶中)和15mg(置100ml量瓶中)，加入相应的辅料，分别按上述两法测定，结果见表1。
表1 回收率测定结果/%，n=6
HPLC法
UV法
1
100.5
99.87
2
100.6
99.40
, 百拇医药
3
98.51
98.52
4
98.74
99.27
5
99.22
100.5
6
98.85
99.14
99.40
, 百拇医药
99.45
RSD/%
0.92
0.67
2.4 样品测定及精密度
按上述两法测定4批TFN颗粒剂的含量，并进行 精密度计算和平均值间的t检验，结果见表2。表2 样品含量测定及精密度结果/%，n =6，置信度99% 批 号
测定法
1
2
3
4
, 百拇医药
5
6
RSD/%
t
961202
HPLC
99.34
99.56
99.81
9 9.17
99.93
99.65
99.58
, http://www.100md.com
0.29
0.32
UV
99.97
99.24
99.97
99.85
99.01
99.82
99.64
0.37
961203
HPLC
, http://www.100md.com
100.9
99.83
101.3
102.0
101.8
99.69
100.9
0.98
0.20
UV
101.4
100.4
99.83
, 百拇医药
100.9
101.9
101.6
101.0
0 .75
961204
HPLC
98.37
99.52
97.87
98.65
99.23
98.44
, 百拇医药
98.68
0.61
0.14
UV
99.63
98.82
98.05
99.31
98.44
98.10
98.73
0.66
921207
, 百拇医药
HPLC
95.37
94.69
96.42
93. 83
95.11
92.84
94.71
1.32
1.62
UV
93.99
93.04
, http://www.100md.com
9 5.25
92.16
93.31
94.00
93.63
1.12
t0. 01，10=3.17，t0.01，10
3 讨 论
3.1 用HPLC或络合-UV法测定含量，两者 经t检验无显著性差异。
3.2 921207为稳定性试 验考察样品，原来的含量为100.4%，经过7年半的室温放置，现只降为93.63%，说明TFN颗粒 剂稳定性好。
3.3 HPLC-法影响因素少，不仅操作简便易行，而且可 同时监控有关物质和降解产物的变化，有优越性，宜采用。
收稿日期：1999-06-24, 百拇医药
单位：杭州 310006 浙江康恩贝集团研究开发中心
关键词：特非那丁；HPLC法；络合-UV法；含量测定
中国现代应用药学000427 摘要 目的：用HPLC和电荷转移络合UV法分别测定特非那丁颗粒剂的 含量,并对测定结果进行比较。方法：HPLC法，色谱柱：Spherisorb C 8(150×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1mol/L三乙胺磷酸缓冲液(80∶20)，检测波长235 nm。电荷转移络合UV法，利用碘与TFN在氯仿中形成电荷转移络合物的原理，在紫外294nm的 波长处测定TFN的含量。结果：两法测定的线性范围和平均回收率分别为 ：HPLC法150～1500μg/ml，99.40%(RSD 0.92%)；络合-UV法2～12μg/m l，99.45%(RSD 0.67%)。结论：两种测定方法准确可 靠，并无显著性差异。
, http://www.100md.com
The determination of terfenadine granules by HPLC and charge-tra nsfer complex UV spectrophotometry
Zhang Fengmin(Zhang FM)，He Houhong(He HH)
(Zhejiang Conba Group Center of Research and Devel opment，Hangzhou 310006)
ABSTRACT OBJECTIVE：Terfenadine granules were assayed by HPLC or ch arge-transfer complex UV spectrophotometry and the results were compared. METHODS:Separation was achieved on a spherisorb columm C8 with a mobile phase of triethylammonium phosphate buffer(0.1mol/L)-methanol(20∶80).The wavel ength of the UV detector was 235nm.Terfenadine reacted with iodine in chloroform to form a molecular charge-transfer complex and can be quantitatively determin ed by UV spectrophotometric method at 294nm after treatment with iodine solution at 60℃ for 30 minutes.RESULTS:The average recovery and linear rang e were 99.40%(RSD 0.92%) and 150～1500μg/ml for HPLC，99.45%( RSD 0.67%) and 2～12μg/ml for complex-UV method，respectively.CONC LUSION:Two methods were accurate and there are no significant differences existed between them.
, 百拇医药
KEY WORDS terfenadine，HPLC，complex-UV spectrophotometry，assay
特非那丁(Terfenadine TFN)是八十年代上市的抗组胺药，因TFN紫外吸收 系数很小，片剂和胶囊在部颁标准中采用非水滴定法。后发现TFN与碘在氯仿介质中发生电 荷转移形成络合物，该络合物在294nm的波长处有明显吸收，因此，在部颁标准中，本中心 研制的新药TFN颗粒剂采用络合-UV法测定含量。现用HPLC法测定含量，结果显示两法无显 著性差异。
1 仪器与试药
HP1100高效液相色谱仪(四元梯度泵、可变波长紫外检测器、液相色谱工作站);岛津UV-220 1型紫外分光光度计。
TFN对照品(本中心精制，由浙江省药品检验所标定，含量100.1%);T FN颗粒剂(本中心研制，规格0.5g：15mg);辅料(按处方配制，主要由糖粉、CMC-Na等 组成)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 测定方法
2.1.1 HPLC法 TFN的主峰出峰时间约为3.8min，辅料、有关物质对测定无干扰。
色谱条件 色谱柱：Spherisorb C8(150×4.6mm，5μm);流动相：甲醇-0.1mol/L三乙 胺磷酸缓冲液(80∶20);检测波长235nm，流速1.5ml/min，理论板数按TFN峰计算大于3000。
测定法 精密称取样品适量(约相当于TFN 30mg)，置50ml量瓶中，加入流动相溶解并定容 ，取续滤液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录峰面积，另取TFN对照品，同法测定，按 外标法以峰面积计算含量。
2.1.2 络合-UV法 只有TFN-I络合物在2 94nm的波长处有最大吸收，而辅料、TFN、碘则为0。
, 百拇医药
精密称取样品适量(约相当于TFN 7.5 mg)，置50ml量瓶中，加氯仿溶解、定容，滤过，取续滤液，即得供试液，另取TFN对照品适 量，用氯仿配制成每1ml中含TFN 0.15mg的溶液，即得对照品溶液。精密量取此两种溶液各2 ml，分别置50ml棕色量瓶中，加0.005%碘氯仿溶液25ml，60℃保温30min，冷却至室温，用 氯仿定容，在294nm的波长处分别测定吸收度，计算含量。
2.2 线性关系
照2.1.1法，取TFN对照品适量用流动相配制成0，150，300，450，600，750，900，1200和1 500μg/ml的系列溶液，得进样量M与峰面积Y的回归方程为：Y=156.8M+36.3，r=0.9997。
照2.1.2法，配制成0，2，4，6，8，10和12μg/ml的TFN对照品溶液，在2 94nm处测定吸收度A，得浓度C与吸收度A的回归方程为：A=0.0615C-0.0079，r=0.9991。
, 百拇医药
2.3 回收率试验
分别精密称取TFN对照品约30mg(置50 ml量瓶中)和15mg(置100ml量瓶中)，加入相应的辅料，分别按上述两法测定，结果见表1。
表1 回收率测定结果/%，n=6
HPLC法
UV法
1
100.5
99.87
2
100.6
99.40
, 百拇医药
3
98.51
98.52
4
98.74
99.27
5
99.22
100.5
6
98.85
99.14
99.40
, 百拇医药
99.45
RSD/%
0.92
0.67
2.4 样品测定及精密度
按上述两法测定4批TFN颗粒剂的含量，并进行 精密度计算和平均值间的t检验，结果见表2。表2 样品含量测定及精密度结果/%，n =6，置信度99% 批 号
测定法
1
2
3
4
, 百拇医药
5
6
RSD/%
t
961202
HPLC
99.34
99.56
99.81
9 9.17
99.93
99.65
99.58
, http://www.100md.com
0.29
0.32
UV
99.97
99.24
99.97
99.85
99.01
99.82
99.64
0.37
961203
HPLC
, http://www.100md.com
100.9
99.83
101.3
102.0
101.8
99.69
100.9
0.98
0.20
UV
101.4
100.4
99.83
, 百拇医药
100.9
101.9
101.6
101.0
0 .75
961204
HPLC
98.37
99.52
97.87
98.65
99.23
98.44
, 百拇医药
98.68
0.61
0.14
UV
99.63
98.82
98.05
99.31
98.44
98.10
98.73
0.66
921207
, 百拇医药
HPLC
95.37
94.69
96.42
93. 83
95.11
92.84
94.71
1.32
1.62
UV
93.99
93.04
, http://www.100md.com
9 5.25
92.16
93.31
94.00
93.63
1.12
t0. 01，10=3.17，t
3 讨 论
3.1 用HPLC或络合-UV法测定含量，两者 经t检验无显著性差异。
3.2 921207为稳定性试 验考察样品，原来的含量为100.4%，经过7年半的室温放置，现只降为93.63%，说明TFN颗粒 剂稳定性好。
3.3 HPLC-法影响因素少，不仅操作简便易行，而且可 同时监控有关物质和降解产物的变化，有优越性，宜采用。
收稿日期：1999-06-24, 百拇医药